FISH技術檢測骨髓異常綜合征四種常見染色體異常

王 巍，練有浩，官全生，黃永彬，梁文君，文瑞婷，梁 亮，楊志剛

(廣東醫科大學 血液病研究室、廣東醫科大學附屬醫院 血液科，廣東 湛江524001)

FISH技術檢測骨髓異常綜合征四種常見染色體異常

王 巍，練有浩，官全生，黃永彬，梁文君，文瑞婷，梁 亮，楊志剛

(廣東醫科大學 血液病研究室、廣東醫科大學附屬醫院 血液科，廣東 湛江524001)

目的評估熒光原位雜交(FISH)技術在檢測骨髓增生異常綜合征(MDS)常見染色體異常中的價值。方法FISH方法檢測47例新診斷MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色體異常，并與15例染色體核型結果比較。結果47例患者中，-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色體異常FISH方法總檢出率44.7%，其中5q-最常見，其次是+8、-7/7q-，-20/20q-最少見。中期分裂相不足10個時，FISH法可提高染色體異常檢出率；分裂相達10個以上，兩種方法對上述染色體異常檢測結果基本一致。結論本室FISH方法檢測MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、-20/20q-染色體異?？倷z出率與文獻報道基本一致；染色體核型和FISH同時做，可提高MDS患者染色體異常檢出率。

骨髓增生異常綜合征；熒光原位雜交；染色體異常

(ChinJLabDiagn,2017,21:2046)

骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes，MDS)是一組源于造血干細胞的獲得性克隆性疾病，以髓系中一系或多系血細胞減少或發育異常、無效造血以及急性髓系白血病發病風險增高為特征。約40%-70% MDS患者具有非隨機的克隆性染色體異常，對染色體進行分析是MDS診斷分型、預后判斷不可缺少的一部分[1]。目前常規檢測染色體的方法是核型分析，但由于技術方法所限或一些疾病本身細胞分裂指數低，部分標本不能獲得足夠數量和高質量的中期分裂相供分析。熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)技術具有快速、準確、不需獲得中期分裂相的優點，現已越來越多地應用于臨床。本文應用FISH方法檢測了47例MDS患者-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-染色體異常，并與常規細胞遺傳學結果比較，以評估FISH方法在檢測MDS常見染色體異常中的應用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集廣東醫科大學附屬醫院血液科2013年1月至2016年11月經骨髓細胞形態學和/或骨髓活檢確診的初發MDS 患者47例，其中男28例，女19例，男女比例約為1.5∶1，中位年齡64歲(16-83歲)。按照2016 WHO MDS分型診斷標準[2]，MDS-SLD 1例，MDS-MLD 14例，MDS-RS-SLD 1例，MDS-RS-MLD 1例，MDS 5q- 2例，MDS-U 1例，MDS-EB-1 12例，MDS-EB-2 15例。

1.2 方法

1.2.1熒光原位雜交技術(FISH)

抽取肝素鈉或EDTA抗凝骨髓液2-4 ml，經低滲、固定后調整細胞濃度滴片，按照探針說明書老化、脫水、變性、雜交、洗片及復染，然后在Zeiss熒光顯微鏡下觀察熒光信號，Isis軟件進行圖像采集。

5q缺失探針、7q缺失探針、+8探針、20q缺失探針購自英國Cytocell公司，檢測位點依次為D5S630(5p15.31)/EGR1(5q31.2)，D7S658(7q22.1-q22.2)/ D7S486 (7q31.2)，D8Z1 (8p11-q11)，D20S108 (20q12)/D20S150(20q13.12)。每例分析200個間期細胞，以20例非惡性血液病患者檢測結果設定閾值(`x±3s)，超過閾值上限為陽性。5q、7q、20q缺失探針正常熒光信號模式為間期細胞內2紅2綠，+8探針為2綠。5q缺失探針異常信號模式：細胞內1紅2綠，提示del 5q31，上限3.82%；1紅1綠，提示-5，上限3.67%。7q缺失探針異常信號模式：1紅1綠，提示-7或7q-，上限2.5%，該探針不能區分-7和7q-。20q缺失探針異常信號模式：1紅1綠，提示-20或20q-，上限3.49%，不能區分-20和20q-。+8探針異常信號模式：3綠，提示+8，上限2.77%。

1.2.2染色體核型分析

采用骨髓細胞24 h短期培養法，操作按照常規，G顯帶技術進行核型分析。染色體核型按照《人類細胞遺傳學國際命名體制(ISCN2013)》的規定進行描述。

1.3 統計學分析

采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，四格表資料組間比較采用χ2檢驗，P<0.05認為有統計學差異。

2 結果

2.1 血常規結果

47例MDS患者均有貧血(Hb<110 g/L)，如按WHO對MDS血細胞減少的定義，Hb<100 g/L者45例，占95.7%；WBC正?；驕p低，其中減低33例，占70.2%；PLT可稍增高、正?；驕p低，其中減低34例，占72.3%。三系中全血細胞減少26例，占55.3%；2系減少18例，占38.3%；1系減少3例，占6.4%(表1)。

表1 47例MDS患者血常規結果

2.2 FISH檢測結果

47例MDS患者中21例檢出染色體異常，檢出率44.7%。其中單條染色體異常10例，占47.6%；兩條染色體異常9例，占42.9%；三條染色體異常2例，占9.5%；四條染色體同時累及的未見。5q-為最常見染色體異常(12例，25.5%)，其次是+8(9例，19.1%)和-7/7q-(8例，17%)，-20/20q-最少見(5例，10.6%)(表2)。低原始細胞比例MDS(<5%)20例，占42.6%，高原始細胞比例MDS(≥5%)27例，占57.4%，兩組上述四種染色體異常檢出率無顯著差異(表3)。

表2 47例MDS患者5、7、8、20號染色體異常檢出情況

表3 低、高原始細胞比例MDS患者5、7、8、20號染色體異常FISH檢出率比較

2.3 染色體核型分析結果

47例MDS患者中15例進行了常規染色體核型分析，其中3例無分裂相，5例未分析夠20個分裂相，僅7例合格，合格率46.7%。在無分裂相的3例患者中有2例FISH檢出異常(例8和例9)。分裂相不足10個的3例患者，染色體分析均為正常核型，但1例FISH檢出異常(例7)。分裂相10-20個2例患者中，1例FISH與核型結果相符(例13)，1例FISH檢出了核型未檢出的異常(例4)。分裂達20個以上的7例患者中，2例為正常核型，5例檢出染色體異常。2例正常核型患者FISH結果亦陰性。5例染色體異?；颊咧?例FISH陰性，因為該例染色體異常不在FISH探針檢測范圍內(例15)；其余4例所涉及染色體異常均包括5、7、8或20號染色體，1例FISH未檢出核型中的-20異常(例3)，余均檢出所在染色體異常。但仔細對比結果發現，部分病例FISH所檢出染色體異常雖與核型異常在同一條染色體上，但信號提示結果與核型結果并不完全一致，如例6和例13 FISH信號提示5q-，而核型結果為-5，見表4。

表4 15例MDS患者FISH與常規細胞遺傳學檢測結果

*5q缺失探針信號均為1紅2綠，提示5q-。

3 討論

MDS主要發生于老年人，男性多于女性。本組患者中位年齡64歲，男女比例約1.5∶1，與教材[3]基本一致。從血常規檢測結果看，幾乎所有患者均有貧血，WBC數減低或正常，PLT可以減低、正?；蛏栽龈?。超過半數MDS患者存在全血細胞減少，單純1系減少的比例少見，約占6.4%，與陳安寶等報道的基本一致[4]。

MDS是一組高度異質性疾病，涉及一系或多系血細胞發育異常。骨髓染色體畸變類型也較復雜，有數目異常，也有結構異常，所累及染色體中以-5/5q-、-7/7q-、+8、20q-異常最常見。本組47例MDS患者中，FISH方法檢測上述四種染色體異?？倷z出率為44.7%，與天津血研所42%[5]和湘雅醫院48%報道的基本一致[6]。其中單條染色體異常和兩條染色體異常的比例大致相當，分別為47.6%和42.9%，而三條染色體同時異常的較少見(9.5%)，四條染色體同時累及的未見。5q-為最常見染色體異常，其次是+8、-7/7q-，20q-最少見。而湘雅醫院報告的FISH檢測100例MDS患者中，陽性檢出率從高到低依次為-5/5q-、20q-、+8、-7/7q-[6]。天津血研所FISH聯合染色體核型分析檢測112例MDS患者，陽性檢出率從高到低依次為+8、-7/7q-、-5/5q-、20q-[5]，可見在此方面各家醫院差異較大，可能與所用FISH探針覆蓋區域不同、地域差異及研究病例數偏少等有關。

文獻報道，約35%-40%的MDS患者可轉化為急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)，核型演變可能是MDS轉白的原因之一[7]。陳寶安等[4]用常規細胞遺傳學方法檢測49例MDS患者，發現原始細胞比例增高(RAEB、RAEB-T)患者比原始細胞比例不高(RA、RAS)患者染色體異常檢出率高(78.3% VS 42.3%，P<0.05)，染色體異常組轉白率高于正常組。而本組研究中原始細胞比例增高患者染色體異常檢出率雖高于原始細胞比例不高患者(48.1% VS 40.0%)，但差異無統計學意義(P>0.05)。分析原因主要與FISH方法局限性即不能檢測探針覆蓋不到區域染色體異常有關，這也是FISH方法不能替代染色體核型分析的原因。

47例MDS患者中15例進行了常規染色體核型分析，達標(20個分裂相)的僅7例，達標率約46.7%。3例即1/5左右患者無分裂相可供分析，分裂相不足10個的核型結果可靠性下降，即一些正常核型FISH檢出異常，而FISH 100%可檢測出結果，因此有條件的患者建議核型和FISH同時做，以提高染色體異常檢出率、縮短患者住院時間；同時，獲得足夠數量和高質量的分裂相仍是染色體核型分析技術要努力解決的問題。從分裂相達到10個以上的核型與FISH對比結果來看，兩者檢測結果基本一致，但部分病例FISH信號所提示染色體異常與核型結果不一致，仔細觀察肖雅娟等[9]、高冬格等[10]的FISH與核型結果也存在不一致情況，說明是個普遍問題，分析原因可能與分裂相質量、FISH探針質量、閱片者經驗等因素有關。另外，本組1例FISH未全部檢出核型中的異常；1例FISH 5q-、-7/7q-陽性比例不高，尤其是-7/7q-，僅4.5%，易漏診；而核型結果10個分裂相中5個有-5、del(7)(q22)，比例并不低，說明FISH結果也不是萬無一失的，核型結果也是FISH結果的補充和驗證。

綜上所述，盡管中期分裂相的數量和質量制約著染色體核型結果的準確性，但其仍然是染色體檢測常規且不可替代的方法，FISH方法是有益補充；為提高MDS患者染色體異常檢出率和準確性，建議有條件患者同時做染色體核型和FISH檢查。

[1]Greenberg PL,Tuechler H,Schanz J,et al.Revised International Prognostic Scoring System for Myelodysplastic Syndromes[J].Blood,2012,120(12):2454.

[2]Arber DA,Orazi A,Hasserjian R,et al.The 2016 revision to the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia[J].Blood,2016,127(20):2391.

[3]許文榮,王建中.臨床血液學檢驗[M].第5版.北京:人民衛生出版社,2014:245.

[4]陳寶安,高 沖,丁 婕,等.65例骨髓增生異常綜合癥的臨床及實驗室分析[J].中國實驗血液學雜志,2009,17(6):1472.

[5]曲士強,徐澤鋒,李承文,等.FISH在骨髓增生異常綜合征患者細胞遺傳學評估中的作用[J].中華血液學雜志,2012,33(10):839.

[6]曹鵬飛,李 原,李曉林,等.FISH技術聯合常規細胞遺傳學檢測MDS的染色體異常[J].中南大學學報醫學版,2014,39(6):605.

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[8]安 利,江 明.114例骨髓增生異常綜合征的染色體核型與預后分析[J].中山大學學報(醫學科學版),2014,35(4):575.

[9]肖雅娟,黃園鷺,許 娜,等.熒光原位雜交聯合染色體核型分析在骨髓增生異常綜合征診斷中的應用[J].熱帶醫學雜志,2014,14(5):639,650.

[10]高冬格,李渤濤,周麗娜,等.50例MDS患者的細胞遺傳學異常的熒光原位雜交檢測和常規染色體核型分析研究[J].中國實驗血液學雜志,2013,21(5):1190.

DetectionoffourcommonabnormalchromosomesbyFISHinmyelodysplasticsyndrome

WANGWei,LIANYou-hao,GUANQuan-sheng,etal.

(LaboratoryofHematology,GuangdongMedicalUniversity;DepartmentofHematology,AffiliatedHospitalofGuangdongMedicalUniversity,Zhanjiang524001,China)

ObjectiveTo evaluate the significance of fluorescence in situ hybridization (FISH) in detecting the common chromosomal abnormalities in patients with myelodysplastic syndrome(MDS).MethodsThe -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- chromosomal abnormalities were detected by FISH in 47 patients with de novo MDS,and the results were compared with those of metaphase cytogenetics in 15 patients.ResultsThe total positive rate of -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- abnormalities detected by FISH was 44.7%,and 5q- was the most common chromosomal abnormality,then +8 and -7/7q- abnormalities followed,-20/20q- was the fewest one.FISH testing can improve the positive rate of chromosomal abnormalities in cases with fewer than 10 metaphases,and the results of FISH testing were in accordance with those of metaphase cytogenetics in cases with more than 10 metaphases.ConclusionThe total positive rate of -5/5q-,-7/7q-,+8 and -20/20q- chromosomal abnormalities detected by FISH in our hospital is in accordance with reports.And metaphase cytogenetics and FISH should be carried out at the same time to improve the positive rate of chromosomal abnormalities in MDS patients.

Myelodysplastic syndrome;Fluorescence in situ hybridization;Chromosome abnormality

國家自然科學基金資助項目(81500131)；湛江市財政資金科技專項競爭性分配項目(2016A06003)

1007-4287(2017)12-2046-04

R551.3

A

王巍，女，42歲，博士，副教授，主要研究方向：白血病分子機理研究，現在上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院工作。

2017-07-14)