甲狀腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表達及其與臨床特征的關系

樂 飛 張經宇 劉 偉 黃先明 羅文政 張 霞

甲狀腺癌中NF-κB p50、NF-κB p65的表達及其與臨床特征的關系

樂 飛 張經宇 劉 偉 黃先明 羅文政 張 霞

目的探討甲狀腺癌組織中NF-κB p50、NF-κB p65的表達及其與臨床特征的關系。方法選取73例甲狀腺癌患者作為研究對象。采用免疫組化SP法檢測所有患者甲狀腺癌組織的NF-κB p50、NF-κB p65表達情況，并分析其與臨床特征的關系。結果①NF-κB p50表達陽性組與NF-κB p50表達陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統計學意義(P>0.05)；NF-κB p50表達陽性組腫瘤直徑、淋巴結轉移顯著高于NF-κB p50表達陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)。②NF-κB p65表達陽性組與NF-κB p65表達陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統計學意義(P>0.05)；NF-κB p65表達陽性組腫瘤直徑、淋巴結轉移顯著高于NF-κB p65表達陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)。③甲狀腺癌組織表達NF-κB p50與NF-κB p65呈顯著正相關(γs=0.653，P<0.05)。結論甲狀腺癌組織表達NF-κB p50、NF-κB p65與腫瘤直徑、淋巴結轉移密切相關，兩者可能在甲狀腺癌發生發展、淋巴結轉移過程中發揮協同作用。

甲狀腺癌；NF-κB p50；NF-κB p65；免疫組化

甲狀腺癌是目前臨床頭頸部、內分泌系統最常見的惡性腫瘤，傳統臨床確診甲狀腺癌主要采用病理形態學檢查，但是該方法診斷某些不典型甲狀腺癌或者微小甲狀腺癌有一定的困難[1]。隨著醫學技術的發展，分子生物學技術逐步應用于臨床，其可能為甲狀腺癌的分子診斷、療效評估提供重要依據[2]。NF-κB是一種重要的核轉錄因子，目前研究證實NF-κB失控與惡性腫瘤、炎癥、病毒感染、感染性休克等多種類型疾病有關，NF-κB家族成員在人體內有5個亞單位，其中以p50、p65最為重要[3]。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2017年3月江西省腫瘤醫院收治的73例甲狀腺癌患者作為研究對象，患者均經術后病理組織學檢查確診，且既往無甲狀腺手術史。73例甲狀腺癌患者中男性20例、女性53例；年齡18～76歲，平均(44.8±12.7)歲；病理類型：乳頭狀癌42例、濾泡癌14例、髓樣癌17例；腫瘤直徑0.4～3.5 cm，平均(1.7±1.5)cm；淋巴結轉移37例、無轉移36例。

1.2 方法

1.2.1 NF-κB p50以及NF-κB p65表達的免疫組化檢測 組織切片60 ℃烘烤30 min → 二甲苯(Ⅰ)脫蠟15 min →二甲苯(Ⅱ)脫蠟15 min → 無水乙醇(Ⅱ)5 min → 無水乙醇(Ⅰ)5 min → 95%乙醇5 min → 85%乙醇5 min → 75%乙醇5 min → 磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次5 min → 在電熱手提式壓力蒸汽滅菌器中用檸檬酸抗原修復液進行抗原修復，當有蒸汽冒出2 min后，取出冷卻 → PBS洗滌3次，每次5 min → 去除多余液體，置于濕盒，滴加3%過氧化氫去離子水，孵育10 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 去除多余液體，置于濕盒，滴加羊血清工作夜，孵育15 min → 滴加50 μl一抗稀釋液，稀釋劑為PBS，稀釋比例為1∶100，4 ℃冰箱過夜 → 恢復室溫1 h，PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加生物素化二抗工作液，孵育15 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標記鏈霉素液，孵育15 min → PBS洗滌3次，每次5 min → 置于濕盒，滴加二氨基聯苯胺(DAB)顯色劑50 μl，當細胞質呈棕黃色時將切片浸入自來水中終止顯色，流水沖洗5 min → 蘇木素復染1 min，流水沖洗5 min → 1%鹽酸乙醇分化數1～2 s ， 流水洗滌20 min→ 75%乙醇脫水3 min → 95%乙醇脫水3 min → 無水乙醇(Ⅰ)脫水3 min → 無水乙醇(Ⅱ)脫水3 min → 二甲苯(Ⅰ)透明10 min → 二甲苯(Ⅱ)透明10 min → 中性樹膠封片 → 鏡下觀察結果。

1.2.2 結果判斷及研究對象分組 每例標本選10個高倍視野，每次觀察100個細胞，陽性細胞<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分；染色程度：細胞質或細胞核基本不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將上述兩項評分結果相乘，0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～6分為陽性，>6分為強陽性[4]。根據NF-κB p50檢測結果將甲狀腺癌患者分為2組，NF-κB p50評分0～1分為NF-κB p50表達陰性組，2～9分為NF-κB p50表達陽性組。NF-κB p65表達陰性組、NF-κB p65表達陽性組的判斷及分組方法與NF-κB p50一致。

1.3 統計學分析

采用SPSS 19.0統計軟件，組間性別、病理類型、淋巴結轉移比較，采用χ2檢驗；組間年齡、腫瘤直徑比較，采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NF-κB p50表達陽性組與NF-κB p50表達陰性組臨床特征的比較

NF-κB p50表達陽性組與NF-κB p50表達陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統計學意義(P>0.05)；NF-κB p50表達陽性組腫瘤直徑、淋巴結轉移顯著高于NF-κB p50表達陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 NF-κB p50表達陽性組與NF-κB p50表達陰性組臨床特征的比較

2.2 NF-κB p65表達陽性組與NF-κB p65表達陰性組臨床特征的比較

NF-κB p65表達陽性組與NF-κB p65表達陰性組之間性別、年齡、病理類型相比，差異無統計學意義(P>0.05)；NF-κB p65 表達陽性組腫瘤直徑、淋巴結轉移顯著高于NF-κB p65表達陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 甲狀腺癌組織表達NF-κB p50與NF-κB p65的相關性分析

經分析，甲狀腺癌組織表達NF-κB p50與NF-κB p65呈顯著正相關性(γs=0.653，P<0.05)。

表2 NF-κB p65表達陽性組與NF-κB p65表達陰性組臨床特征的比較

3 討論

甲狀腺癌是目前臨床上最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%，但是近年來其發病率增長快速，因此在臨床上亦越來越常見[5]。與其他惡性腫瘤一樣，病理形態學檢查是甲狀腺癌確診最主要的方法，但該方法不適用于某些不典型甲狀腺癌或者微小甲狀腺癌，此時分子生物學技術被寄予厚望。

NF-κB是一種存在于真核細胞中的重要的核轉錄因子，它通過結合啟動子區的固定核苷酸序列發揮啟動基因轉錄作用，因此其在細胞增殖與分化，腫瘤形成、侵襲、轉移等過程中發揮十分重要的功能[6]。此外，NF-κB還參與細胞對自由基、紫外線照射、細胞因子、細菌或病毒抗原等刺激的反應，并且在調節機體免疫系統對感染的反應過程中發揮關鍵性作用[7]。目前臨床亦已經形成共識，就是NF-κB失控與惡性腫瘤、炎癥、病毒感染、感染性休克、等多種類型疾病有關。進一步研究認為，NF-κB家族成員在人體內有5個亞單位，分別為Rel、RelB、p50、p52、p65，其中p50是DNA結合部位，而p65則通過Rel 同源結構域的協調作用增強轉錄活性，并促進 p50與DNA的結合[8]，因此NF-κB p50、NF-κB p65在NF-κB家族中最為重要。

目前NF-κB p50、NF-κB p65表達檢測已廣泛應用于乳腺癌、肝癌、食管鱗癌、胃癌等多種惡性腫瘤，但其在甲狀腺癌中表達的研究報道較少。Pyo等[9]報道，74.6%的甲狀腺乳頭狀癌患者表達NF-κB p65，當腫瘤直徑>1 cm時，NF-κB p65表達陽性率更高，且NF-κB p65表達陽性組與NF-κB p65表達陰性組之間甲狀腺外擴散、淋巴結轉移、BRAF(V600E)突變差異有統計學意義(P<0.05)。秦陽等[10]報道，甲狀腺癌NF-κB p50、NF-κB p65表達陽性率分別為73.00%、74.00%，甲狀腺非癌組織NF-κB p50、NF-κB p65陽性率顯著低于癌組織。在本研究中，73例甲狀腺癌患者接受NF-κB p50、NF-κB p65表達檢測，結果顯示甲狀腺癌組織表達NF-κB p50、NF-κB p65與患者性別、年齡、病理類型無相關，而與腫瘤直徑、淋巴結轉移呈顯著相關性。分析其原因，可能是NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌發生發展、淋巴結轉移過程中發揮了協同作用所致，但是兩者之間的具體作用機制有待臨床進一步研究。

[1] 陳 健.精確病理診斷在甲狀腺癌精準醫療中的意義〔J〕.中國腫瘤臨床，2017，44(4)：181-185.

[2] 孫 思，陳 創，李 艷.甲狀腺癌分子診斷技術的研究進展〔J〕.武漢大學學報(醫學版)，2016，37(1)：167-172.

[3] 張碩穩，楊 微，王新樂，等.乳腺癌組織中MTDH、IκB、NF-κB P65的表達及其臨床意義〔J〕.實用癌癥雜志，2016，31(10)：1578-1581.

[4] 劉宏健.HMGB1和BF-κB p50、NF-κB p50在甲狀腺癌中的表達及意義〔D〕.鄭州大學，2013.

[5] Aytekin T,Aytekin A,Maralcan G,et al.A cyclin D1 (CCND1) gene polymorphism contributes to susceptibility to papillary thyroid cancer in the Turkish population〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(17):7181-7185.

[6] Cras A,Politis B,Balitrand N,et al.Bexarotene via CBP/p300 induces suppression of NF-κB-dependent cell growth and invasion in thyroid cancer〔J〕.Clin Cancer Res,2012,18(2):442-453.

[7] 龔 藝，陳 丹，陳小琴，等.NF-κB和JNK通路調節肺炎鏈球菌PspA蛋白誘導人類單核細胞分泌炎性細胞因子〔J〕.中國免疫學雜志，2014，30(4)：464-467.

[8] 洪良利，秦杰升，黃杰雄，等.NF-κB p65、CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及意義〔J〕.海南醫學，2014，26(12)：1853-1855.

[9] Pyo JS,Kang G,Kim DH,et al.Activation of nuclear factor-κB contributes to growth and aggressiveness of papillary thyroid carcinoma〔J〕.Pathol Res Pract,2013,209(4):228-232.

[10] 秦 陽，王 玲，呂曉娟，等.NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌中的表達及意義〔J〕.中國生化藥物雜志，2014，35(8)：148-150，153.

ExpressionofNF-κBp50andNF-κBp65inThyroidCarcinomaandItsRelationshipwithClinicalFeatures

LEFei，ZHANGJingyu，LIUWei,etal.

JiangxiCancerHospital,Nanchang，330029

ObjectiveTo investigate the expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid carcinoma and its relationship with clinical features.Methods73 cases of thyroid carcinoma were selected,and the expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 in all thyroid cancer tissues were detected by immunohistochemical SP method,and the relationship between expressions of NF-κB p50 and NF-κB p65 and clinical characteristics were analyzed.Results①There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p50 positive-expression group and NF-κB p50 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p50 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p50 negative-expression group,respectively(P<0.05).②There were no significant differences in the gender,age and pathological type between NF-κB p65 positive-expression group and NF-κB p65 negative-expression group(P>0.05),the tumor diameter and lymph node metastasis of NF-κB p65 positive-expression group were significantly higher than those of NF-κB p65 negative-expression group,respectively(P<0.05).③The expression of NF-κB p50 was positively correlated with NF-κB p65 in thyroid carcinoma tissues (γs=0.653,P<0.05).ConclusionThe expression of NF-κB p50 and NF-κB p65 in thyroid cancer tissues is closely related to tumor diameter and lymph node metastasis,and both of them may play a synergistic role in the occurrence and development of thyroid cancer,as well as lymph node metastasis.

Thyroid cancer;NF-κB p50;NF-κB p65;Immunohistochemistry

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1768～1770)

江西省衛計委科技支撐項目(編號：20165396)

330029 江西省腫瘤醫院(樂 飛，黃先明，羅文政，張 霞)；330006 南昌大學第一附屬醫院(張經宇)；330006 江西省婦幼保健院(劉 偉)

張 霞

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.008

R736.1

A

1001-5930(2017)11-1768-03

2017-07-18

2017-08-29)

(編輯：甘艷)