基于正交試驗的藏藥浴藥液發酵工藝優化研究*

黃 河，許 洪，岳 萍，崔 峰，才 多，吳金鵬**

(1.中國醫學科學院北京協和醫學院 生物醫學工程研究所,天津 300072；2.天津大學精密儀器與光電子工程學院,天津 300072； 3.西藏自治區藏醫院,西藏 拉薩 850000)

·實驗研究·

基于正交試驗的藏藥浴藥液發酵工藝優化研究*

黃 河1，許 洪2，岳 萍1，崔 峰1，才 多3，吳金鵬1**

(1.中國醫學科學院北京協和醫學院 生物醫學工程研究所,天津 300072；2.天津大學精密儀器與光電子工程學院,天津 300072； 3.西藏自治區藏醫院,西藏 拉薩 850000)

藏藥浴是藏醫外治療法中的重要手段，對腦卒中后遺癥、風濕類疾病等多種慢性疑難疾病療效顯著。傳統藏藥浴藥液發酵主要采用室溫自然發酵法，發酵時間長，且過程煩瑣、耗時，難以滿足當現代臨床快速、簡便、安全的藥液制備需求。本研究采用正交試驗的方法，開展“五味甘露方”藥液發酵工藝的優化研究。結果表明，菌種對藏藥浴液發酵具有最顯著的影響，最優藥液發酵方案為水溫37 ℃浸泡8 h，采用酒曲作為菌種以8 g/kg添加，在31 ℃下發酵24 h。研究表明，以藏醫傳統藥浴液發酵方法為基礎，對藏藥浴液發酵工藝進行優化完全可行，通過合理選擇發酵參數可以顯著縮短藥液制備周期。

藏藥??；藥液發酵；試驗優化

藏藥浴是藏醫外治療法中的重要手段，對腦卒中后遺癥、風濕類疾病等多種慢性疑難疾病療效顯著。當藥液作用于皮膚或患處時，產生的溫熱刺激可以刺激皮膚神經末梢感受器，擴張血管，促進血液與淋巴循環，加快新陳代謝，改善組織供養條件，調節與疏通經絡[1～2]。藏藥浴以“五味甘露湯”為主方，隨癥加減其他藥物開展藥水浴[3～4]。其主要技術流程包括診斷、配方、藥液制備、藥浴施治與護理等環節，其中尤以藥液制備技術最為關鍵，是影響藏藥浴臨床療效的核心環節。

傳統藥液發酵主要采用室溫自然發酵法，發酵時間長(3 d～5 d)，且過程煩瑣、耗時，無法適應現代社會快速、簡便、安全的需求。近年來，隨著藏藥浴療法的廣泛推廣，出現了3種改良的藏藥浴藥液制備方法：①直接煎煮法，直接煎煮五味甘露藏藥，獲取藥液；②直接煎煮法聯合乙醇法，在直接煎煮基礎上加入適當比例的白酒；③溶解法，將五味甘露藏藥提取成顆粒劑(或膏劑)，使用時加入熱水溶解。雖然這些方法能明顯縮短藏藥浴液的制備時間，但其藥液質量與傳統發酵法仍有較大差距。此外，傳統藏藥浴液發酵基本依賴經驗完成，沒有形成統一的標準，導致不同批次藥液質量存在較大差異。因此，本研究基于藏藥浴藏液傳統發酵工藝，采用試驗分析的方法，對“五味甘露方”藥液發酵工藝開展優化研究，旨在探索既保持傳統工藝特色，又符合現代臨床需求的藏藥浴藥液制備方法。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

藏麻黃、水柏枝、大籽蒿、圓柏、黃花杜鵑(西藏自治區藏醫院)；活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)；酒曲(安琪酵母股份有限公司)。FA2004N電子天平(讀數精度0.1 mg，河南兄弟儀器設備有限公司)；煎藥壺(康爾順貿易有限公司)；8分杯發酵機(廣東小熊電器有限公司)；HT511酒精濃度計折光儀(鄭州南北儀器設備有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 五味甘露方主劑配制

以《四部醫典·后續部》、《祖先言教》、《藏醫十八支》、《千萬舍利》、《藍琉璃》等傳統典籍中記載的藏藥浴方劑、用法和注意事項為基礎，配制五味甘露藏藥。五味甘露藏藥組成為藏麻黃、圓柏、大籽蒿、水柏枝、黃花杜鵑。5種藥材的質量百分比均為20 %，每份五味甘露藏藥為50 g。

1.2.2 實驗方法

根據藏藥浴藥液發酵傳統工藝，以五味甘露藏藥為主藥，青稞為輔料進行配制發酵，兩者質量比為3∶1。藥液發酵經浸泡、煮制、發酵3個過程。①浸泡：在藏藥中加入純凈水，藏藥與水的體積比為1∶3。②煮制：將浸泡好的藏藥煮沸，待水面降至與藏藥表面齊平時?；?。③發酵：將煮制好的藏藥自然冷卻至發酵溫度，并維持該溫度直至發酵結束。

為優化藥液發酵條件，選用試驗優化的方法設計試驗。試驗優化是應用數學的一個新興分支，通過合理設計試驗方案，可大大減小試驗次數、有效控制試驗干擾、科學處理試驗數據，實現優化目標[5～8]。根據藏藥浴液發酵工藝需求，選定浸泡水溫、浸泡時間、菌種、菌量、發酵溫度、發酵時間作為考察的6個因素,每個因素各取2個水平，設誤差1列(見表1)。根據選定的因素水平，采用L8(27)正交表進行試驗，以HT511酒精濃度計折光儀測定的酒精度值(°)作為考察指標。對考察結果進行極差與方差分析，以P<0.1為差異具有統計學意義。

表1 試驗因素表

2 結 果

2.1 試驗結果

以L8(27)為正交表進行試驗設計，經藥劑配比、浸泡、煎煮、發酵等步驟進行藏藥浴液制備，以折合酒精度作為考察指標。藥液制備過程如圖1所示，試驗參數設置與試驗結果見表2。

圖1 藏藥浴液制備過程

試驗號ABCDEFG酒精度111111117．521112222133122112264122221113．5521212129．562122121117221122178221211216

2.2 結果分析

表3的方差結果表明，菌種因素(C)對藏藥浴液發酵具有最顯著的影響，對藏藥浴液酒精度產生影響的因素作用權重排序為D>F>G>A>E>B。最優藥液發酵方案為A2-B2-D2-E2-F1-G2，即水溫37 ℃浸泡8 h，采用酒曲作為菌種以8 g/kg 添加，在31 ℃下發酵24 h，可得到最優的酒精產出。

表3 藏藥浴液發酵的方差分析表

3 討論與結論

根據《四部醫典·后續部》和近年來的臨床報道，藏藥浴適應證包括四肢強直或攣急、跛蹺、癤癰、炭疽、新舊瘡瘍炎腫、各種皮膚病、婦女產后風、弓腰駝背關節變形、肌膚之間黃水充斥等，臨床治療范圍非常廣泛[9～12]。但傳統藏藥浴液發酵制備方法由于制備時間長、操作繁瑣、人工成本高、批量制備困難等，限制了藏藥浴的發展及推廣。因此，基于藏醫傳統藥浴液發酵方法，優化藥浴發酵工藝，縮短發酵時間，規范發酵標準是本研究的核心目標。本研究采用科學的試驗優化方法進行試驗設計，大大減小了試驗量。結果表明，菌種對藏藥浴液發酵具有最顯著的影響，采用酒曲進行藏藥浴液發酵效果最好。結果提示，最優藥劑浸泡時間為8 h，藥液發酵時間為24 h，但該結果顯著性并不明顯，因此在以藥液發酵效率作為考核指標時可以進一步縮短浸泡時間與發酵時間，這對藏藥浴液的工業化生產具有重要參考價值。

綜上所述，以藏醫傳統藥浴液發酵方法為基礎，進行藏藥浴液發酵優化是可行的，通過合理選擇發酵參數可以大大縮短藥液制備周期。

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①國家科技支撐計劃“民族醫藥病證結合及特色治療技術臨床研究”(編號：2014BAI10B10)；

②西藏自治區藏醫藥管理局科技專項“藏藥浴藥液制備關鍵技術及療效研究”(編號：2017038)。

**通訊作者。

R944.1+2

A

1006-978X(2017)06-0007-02

2017-10-05

2017-10-30

朱慶文