普洱茶水浸液抑制牙釉質脫礦作用初探*

王麗梅，梁迎東，楊曉珍，藍海

[1.大理大學第三附屬醫院（云南省大理州人民醫院） 口腔科，云南 大理671000；2.大理大學藥學與化學學院，云南 大理671000]

齲病是高發的口腔疾病，嚴重危害人類的身心健康。世界衛生組織（WHO）已將齲齒列為人類重點防治的疾病之一[1]。齲病預防研究的核心是如何降低宿主對齲病的易感性，即增強牙齒硬組織的抗酸能力[2]。普洱茶是以云南特有的大葉茶的曬青毛茶為原料，經特殊發酵工藝生產而成的。普洱茶中含有糖、氨基酸、蛋白質、氟、維生素、兒茶素、茶多酚等。其中已證明氟和茶多酚具有防齲的作用。普洱茶中的水溶性氟含量為77 mg/kg，就氟含量而言，普洱茶是良好的防齲飲品。普洱茶分為熟茶和生茶2種，二者在品質特征上有明顯的差異，內含物的化學成分也存在較大差異[3]。本文通過實驗測定經普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度水浸液處理離體牙前后乳酸鹽緩沖溶液中磷離子濃度的變化，計算出磷溶出率，研究普洱茶（生茶、熟茶）水浸液對牙釉質脫礦作用的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

普洱茶，購于大理市下關鎮沃爾瑪超市，品名：圣邦普洱茶禮盒，廠址：普洱市思茅區振興路柏枝寺，生產日期：2011年5月28日。

1.2 儀器

SB25-12D超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司），HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學儀器有限公司），電子天平（波特樂-托利多儀器有限公司），T6紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司），燒杯，容量瓶，移液管。

1.3 試劑

氫氧化鈉（上海強順化學試劑有限公司），抗壞血酸（國藥集團化學試劑有限公司），磷酸二氫鉀（天津市化學試劑研究所），鉬酸銨（天津市化學試劑四廠凱達化工廠），乳酸（天津市風船化學試劑科技有限公司）。以上均為分析純。

1.4 方法

1.4.1 普洱茶（生茶、熟茶）水浸液的制備 稱取普洱茶生茶9.6 g，加入到150 ml蒸餾水中，煮沸1 min，得到100 ml普洱茶水浸液，冷卻至室溫，倍比稀釋依次得到50 ml的96、48、24、12和6 mg/ml的普洱茶生茶水浸液，備用。熟茶水浸液依此法制得。

1.4.2 牙齒標本的制備 去市場購買新鮮牛牙齒100顆，切去壓根，去除牙髓和軟組織，超聲清洗，從中選出無裂痕、無齲損的牙齒72顆，分為12組，每組6顆，在陰涼處晾干備用。

1.4.3 乳酸鹽緩沖溶液的制備 2 ml的乳酸稀釋至400 ml，84 g氫氧化鈉溶于600 ml蒸餾水中，將稀釋好的乳酸鹽緩沖溶液與氫氧化鈉溶液混合，并稀釋至2 L，攪拌均勻，備用。

1.4.4 脫保護處理 將選出的牙齒浸入100 ml乳酸鹽緩沖溶液中2 h，充分除去牙齒表面的抗溶解保護，每次緩沖液的用量為100 ml，1 h更換1次緩沖液，2 h后取出牙齒，備用。

1.4.5 抑制牙釉質脫礦實驗 第1次酸蝕：將裝有牙齒（每組6顆）的12個燒杯，分別浸入37℃恒溫水浴30 min，取出燒杯，在每個燒杯中加入40 ml乳酸鹽緩沖溶液，15 min后分別將各只燒杯里的乳酸鹽緩沖溶液收集到12只50 ml的容量瓶中密封保存，備用。用蒸餾水將各組牙齒反復沖洗3～5次。牙齒處理：分別取普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度（96、48、24、12和6 mg/ml）水浸液、去離子水、20 mg/ ml氟化鈉溶液各40 ml，加入所對應的牙齒樣品中，5 min后傾倒處理液。用蒸餾水將各組牙齒反復沖洗3次。第2次酸蝕：將普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度（96、48、24、12和6 mg/ml）水浸液、去離子水、20 mg/L氟化鈉溶液處理過的牙齒再次分別放入40 ml乳酸鹽緩沖溶液中，方法同第1次酸蝕。將第2次酸蝕后的乳酸鹽緩沖溶液收集到另外12只50 ml容量瓶中密封保存，備用。

1.5 牙釉質磷濃度降低率的測定

1.5.1 磷標準溶液的配制 準確稱取磷酸二氫鉀0.439 g溶于蒸餾水并定容至100 ml（含磷1 mg/ml），使用時稀釋500倍（含磷2μg/ml）。

1.5.2 25 g/L鉬酸銨溶液的配制 稱取2.5 g鉬酸銨，加蒸餾水20 ml，15 ml濃硫酸溶解，用水稀釋至100 ml。

1.5.3 抗壞血酸的制備 稱取10 g抗壞血酸溶于適量蒸餾水中，稀釋至100 ml。

1.5.4 標準曲線的繪制[[44]]分別吸取磷標準溶液 0.00、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00 和15.00 ml，置于8只50 ml刻度管中，加水至25 ml，搖勻，加2 ml 25 g/L鉬酸銨溶液，搖勻，放置30 s，加1 ml抗壞血酸，加水至50 ml，于室溫下顯色15 min，在波長325 nm，1 cm比色杯條件下，以蒸餾水作為參比，測定吸光度。以標準溶液的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得到標準曲線方程y=1.4869x-0.0026，r=0.999 6。

采用鉬酸銨分光光度法測定磷酸鹽緩沖液中的磷含量[5]。在波長為325 nm處測定非還原性磷鉬酸銨化合物的吸光度A，得磷含量的計算公式，C=（A+0.0026）/1.4869。

1.6 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，所有數據采用均數±標準差（±s）表示，各組總體均數之間比較采用單因素方差分析；兩兩比較采用DunnettT3檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

用繪制標準曲線的方法測定2次酸蝕乳酸鹽緩沖溶液中的磷含量，計算磷濃度降低率（ESR），ESR=（C1-C2）/C1，經單因素方差分析，各濃度組總體均數不全相等（F=105 695.866，P=0.000）。普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度組的ESR與氟化鈉組和去離子水組的ESR比較差異均有統計學意義（P＜0.05）；同一濃度組的普洱茶生茶組和熟茶組比較，除6 mg/ml生茶和12 mg/mL熟茶組差異無統計學意義（P＞0.05）外，其余各組差異均有統計學意義（P＜0.05）。說明普洱茶熟茶組的再礦化效果整體上要比生茶組的好。生茶6 mg/ml組與熟茶12 mg/ml組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），說明這兩組抑制牙釉質脫礦作用相差不大。普洱茶（生茶、熟茶）96和48 mg/ml這2個濃度組的作用均＞20 mg/L 氟化鈉組，其余3個相對較低濃度組的作用均＜20 mg/ mL 氟化鈉組?？傮w表明：普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度水浸液都有抑制牙釉質脫礦的作用，且隨著普洱茶水浸液的茶濃度增大抑制作用越強。生茶與熟茶的抑制牙釉質脫礦的作用效果不同，總體來說，熟茶抑制牙釉質脫礦的作用效果優于生茶。見附表。

附表 牙釉質磷濃度降低率（ESR） （±s）

附表 牙釉質磷濃度降低率（ESR） （±s）

注：（s：×10-3）；C1為處理液處理前磷溶出量；C2為處理液處理后磷溶出量；1）表示與陰性對照組相比，P ＜0.05；2）表示與陽性對照組相比，P ＜0.05；3）表示同一濃度的不同實驗組相比，P ＜0.05

ESR生茶 96 mg/ml組 0.186 7±0.548 0.101 1±0.837 0.458 7±4.9701）2）3）生茶 48 mg/ml組 0.188 3±0.837 0.127 5±1.000 0.322 8±5.9301）2）3）生茶 24 mg/ml組 0.186 3±0.245 0.163 3±0.894 0.123 7±8.0801）2）生茶 12 mg/ml組 0.189 9±0.894 0.174 5±0.894 0.079 8±2.3101）2）3）生茶 6 mg/ml組 0.188 3±0.474 0.175 5±0.894 0.068 1±4.5501）2）3）20 mg/L氟化鈉組 0.188 2±0.837 0.151 3±0.474 0.196 3±2.050去離子水組 0.187 3±0.164 0.180 4±0.474 0.037 0±8.850熟茶 96 mg/ml組 0.189 8±0.000 0.112 6±0.474 0.406 8±2.6801）2）3）熟茶 48 mg/ml組 0.186 3±0.837 0.124 2±0.894 0.333 0±2.8801）2）3）熟茶 24 mg/ml組 0.189 4±1.095 0.166 7±0.474 0.120 1±7.1601）2）3）熟茶 12 mg/ml組 0.188 6±0.548 0.175 6±0.837 0.068 6±3.2901）2）熟茶 6 mg/ml組 0.188 5±1.643 0.178 3±0.707 0.055 0±21.2101）2）3）組別C1C2

3 討論

致齲菌的生長和產酸會使牙釉質中的主要成分羥基磷灰石與氫離子反應，從而使羥基磷灰石晶體解體，使牙釉質脫礦，發生齲齒。研究證實普洱茶中含有氟、茶多酚等成分，氟離子，能在牙釉質表面形成氟化鈣沉淀，同時氟離子進入釉質中生成晶格更小、穩定性更強的氟磷灰石，促進牙質的再礦化，增強了牙釉質對酸的抵抗力，從而抑制牙釉質脫礦，達到防齲的作用[6]。另外，茶多酚能改變膠原的性質，從而抑制多種致齲菌在牙本質和牙骨質上的生長和產酸[7]，從而抑制牙釉質的脫礦。

通過測定經普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度水浸液處理離體牙前后乳酸鹽緩沖溶液中磷離子濃度的變化，計算磷溶出率可知，相同條件下，普洱茶（生茶、熟茶）不同濃度水浸液均具有抑制牙釉質脫礦的作用，隨著普洱茶水浸液的茶濃度增大抑制作用越強，且有4個濃度生茶組的作用強度大于熟茶組，1個濃度熟茶組的作用強于生茶組。普洱茶中含有抑制牙釉質脫礦的活性物質茶多酚和氟，鄒艷麗等[8]報道生茶的茶多酚含量普遍高于熟茶，而熟茶的氟含量又高于生茶，最高可達32.7倍[9]，所以，普洱茶的抗酸脫礦作用是茶多酚的作用還是氟的作用或者是二者的協同作用有待于進一步的研究。另外，普洱茶葉片的成熟程度也會影響氟的含量，一般偏老葉片的氟含量高于嫩葉。

本實驗在環境控制中存在一些局限，如果能更好地模擬出人喝茶時茶液在口腔里的環境，結果將更為可靠。

[1]劉曉靜, 鄭寶山, 王濱濱, 等.茶防齲研究進展[J]. 地球與環境,2005, 33(2): 91-96.

[2]張安生. 天然藥物五倍子及釉質有機質抑制釉質脫礦機理的實驗研究[D]. 西安: 第四軍醫大學, 2009, 1-78.

[3]呂海鵬, 谷記平, 林智, 等. 普洱茶的化學成分及生物活性研究進展[J]. 茶業科學, 2007, 27(1): 8-18.

[4]王麗梅, 周學靈, 布正興, 等. 紫地榆牙膏對牙釉質脫礦和再礦化作用的研究[J]. 昆明醫科大學學報, 2014, 35(10): 15-18.

[5]彭剛華, 康長安, 鐘鴻雁, 等. 鉬酸銨分光光度法測定水中總磷質量控制指標研究[J]. 三峽環境與生態, 2011, 33(2): 31-34.

[6]李志華. 不同成膜基質的氟化物涂膜對牛牙釉質抗脫礦性能影響的研究[D]. 廣州: 南方醫科大學, 2011, 1-62.

[7]劉曉丹, 石四箴. 茶多酚防齲研究進展[J]. 上海醫學, 2005,28(9): 813-814.

[8]鄒艷麗, 陳靖, 李聰. 普洱生茶和熟茶茶多酚的提取及抗氧化活性研究[J]. 安徽農業科學, 2012, 40(8): 4850-4851.

[9]王白娟, 趙艷, 戴富強, 等. 云南普洱茶氟含量研究[J]. 廣東農業科學, 2010, 37(5): 45-46.