牡丹多糖提取液對黑色素的消除作用

李孟帆 李丹陽 杜曉輝 趙奇 劉瑞霞

摘 要：本文通過選取優質無蟲害的牡丹葉片，并提取不同時期葉片多糖提取液進行比較，利用多糖溶液對酪氨酸酶活性的影響，通過對酪氨酸酶的抑制率來評價對黑色素的消除作用。研究表明，牡丹多糖溶液對黑色素具有抑制作用，并且隨著多糖溶液濃度的減少，其抑制率有所降低。

關鍵詞：牡丹多糖；黑色素；酪氨酸酶

中圖分類號：TQ658 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2018）22-0175-02

多糖是一種對維持人體生命活動正常運轉有重要作用的生物大分子，是構成生命的四大基本物質之一，具有調節人體免疫力、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、降血糖、抗輻射等作用，還可在石油和化妝品工業中作為凝聚劑、潤滑劑、保濕劑使用，同時也可在食品工業中作為果蔬涂膜劑和食品包裝應用。目前，已有相關研究證明牡丹葉片多糖提取液可以有效消除羥自由基（-OH），且具有明顯的量效關系[1，2]。而我們想要探究多糖可以有效消除羥自由基的作用是否能夠有效減輕人們面部色斑？在社會壓力以及環境因素的影響下，許多愛美的年輕女性越來越注意自己面部色斑問題。而色素的沉淀是人體皮膚呈現不同色斑的主要因素，但是色素沉淀及色斑產生的原因比較復雜，比如遺傳因素，內分泌失調，環境污染，紫外線的照射等，不管是哪一種因素，歸根結底是由黑色素沉淀造成的，抑制黑色素的形成，或者提高皮膚的抗氧化能力成為我們研究的主要目標。在化學合成工藝不斷進步的時期，化妝品主要是含化學合成成分制品，但是接踵而來的是化學制品的毒性、過敏性、刺激性等問題。于是人們開始追求天然、無毒產品，這時候植物化妝品受到重視[3]。

牡丹葉片或者被堆積廢棄從而造成環境污染，或者被產地農民用做低值薪柴使用，我們通過提取牡丹葉片多糖，對其進行研究，增加了牡丹葉片的利用價值。

1 材料與方法

1.1 試驗原理

檢測藥物抑制黑色素產生效果有代表性的試管內測定方法主要分兩大類：酪氨酸酶試驗法和用惡性黑素瘤細胞試驗法，通常采用第一種方法[4]。因此，通過測定丹葉片多糖對酪氨酸酶的抑制作用來評價牡丹葉片多糖對黑色素的抑制能力[5，6]。

1.2 試驗材料

牡丹葉片采收于鄭州師范學院實習實訓基地。

1.3 試驗方法

1.3.1 牡丹葉片多糖的提取

將牡丹葉片利用電恒溫鼓風干燥箱進行干燥處理，研磨制成粉末備用。取粉末10g，加入80%乙醇100ml，80℃恒溫水浴浸提30min，而后4000r/min離心20min收集上清液，將沉淀再次浸提，最后將兩次上清液混合。將10%三氯乙酸與上清液按1：12比例混勻，在室溫下靜置30min，再次在4000r/min條件下離心10min，棄掉蛋白質沉淀，把上清液加入一定量無水乙醇，使上清液含醇量達到80%，最后將上清液濃縮到10ml，即得到牡丹葉片多糖溶液。

1.3.2 多糖濃度測定

采用苯酚硫酸法[7]制備葡萄糖標準曲線來測定牡丹葉片多糖濃度。

1.3.3 酪氨酸酶活性測定

用蒸餾水將多糖溶液分別稀釋成原液濃度的10倍，20倍，30倍，40倍，50倍，并且以多糖濃度為0mg/ml時作為對照組。選取馬鈴薯代替酪氨酸酶，直接取馬鈴薯加入各反應液中，將待測液設為A組，對照組設為B組，按表1所示依次加入。

按照上述表加入后，將其在室溫下靜置10min，迅速轉移至比色皿中，并在475nm處測OD值。

2 結果與分析

2.1 葡萄糖標準曲線和多糖濃度

通常利用葡萄糖標準曲線來測定待測液的濃度，根據上述方法測出葡萄糖標準液濃度得出葡萄糖標準曲線見圖1。

測出多糖溶液OD值分別為：4.482，4.832，4.768得出平均值為4.694。將其代入標準曲線得出多糖濃度為7.593mg/ml。

2.2 不同濃度多糖溶液

將上述配成的不同稀釋倍數的多糖溶液得出的OD值如圖2所示。

可以看出隨著多糖溶液濃度減少，OD值也在減少，這可以看出隨著多糖溶液濃度與對酪氨酸酶抑制率成正相關關系。

2.3 抑制率

通過利用多糖溶液對酪氨酸酶的抑制作用來測出對黑色素的抑制作用，利用如下公式計算抑制率[8]：

抑制率I=（B-A/B）*100%

得出抑制率結果如圖3。由圖可以看出隨著多糖濃度的增加，其與酪氨酸酶的抑制率呈正相關關系。

3 總結與展望

該試驗通過提取牡丹葉片多糖，并檢測牡丹葉片多糖溶液對酪氨酸酶的抑制作用，發現隨著牡丹多糖溶液濃度增加，其抑制作用也隨之增加。我們認為以下幾點需要注意：第一，選取優質無蟲害的牡丹葉片，并選取不同時期葉片多糖提取液進行比較。第二，選擇合適的提取防范，增加多糖提取液的純度。第三，要注意與化妝品之間成分相容的問題。相信隨著研究的不斷深入，牡丹葉片多糖提取液在化妝品中會得到廣泛使用。該試驗在前人研究的基礎上進行一些擴展，將牡丹葉片和化妝品聯系起來是一種新的突破，但是該試驗并未在人皮膚上試驗，只是證明了其對黑色素形成會有抑制作用，將其應用在以后的化妝品中還需進一步研究。

參考文獻

[1]李曉燕，劉志洪，蔡汝秀.黑色素對羥基自由基清除活性的研究[J].四川大學學報（自然科學版），2003，（06）：1132-1136.

[2]李攀.天然活性化妝品發展概況[A].中國香料香精化妝品工業協會.2004年中國化妝品學術研討會論文集[C].中國香料香精化妝品工業協會：，2004：5.

[3]朱月，鐘尉，趙雪梅，畢曉丹.紫斑牡丹葉片多糖對羥自由基清除能力的比較[J].江蘇農業科學，2016，44（11）：341-342.

[4]毛培坤.化妝品功能性評價和分析方法.北京：中國輕工業出版社，1998，355-360.

[5]楊柳依，曹煜，魏羽佳，雷大衛.14種中藥提取成分對酪氨酸酶活性的抑制作用[J].中華皮膚科雜志，2003，（04）：32-34.

[6]沈放，王德斌.當歸多糖對酪氨酸酶活性的影響[J].昆明師范高等?？茖W校學報，2005，（04）：61-62+67.

[7]朱月，畢曉丹，趙雪梅.“洛陽紅”牡丹葉片多糖提取條件的研究[J].北方園藝，2011，（04）：149-151.

[8]李艷莉，鐘理，梁麗紅.6種中藥抑制酪氨酸酶活性的實驗研究[J].時珍國醫國藥，2002，（03）：129-131.