HPLC法測定鎮寧百香果中維生素C的含量

◎ 楊 文，李小敬

（1.安順市食品藥品檢驗所，貴州 安順 561000；2.安順市人民醫院，貴州 安順 561000）

百香果（Passion fruit）又稱西番蓮、巴西果、雞蛋果，是西番蓮科多年木質藤本植物果實的通稱。百香果是一種原產南美洲的熱帶水果，因其果汁具有蟠桃、石榴、菠蘿、芒果、香蕉等多種水果的香氣而得名[1-2]，1913年引入中國，現已在我國南方地區大面積種植，2018年被引進貴州安順鎮寧簡噶鄉，作為該地區的扶貧產業。百香果果肉為黃色，味微酸，氣味芳香濃郁，含有17種氨基酸，豐富的蛋白質、脂肪、糖、維生素、鈣、磷、鐵、鉀、SOD酶和超纖維等165種對人體有益物質，更被稱為水果中的“維生素C之王”。維生素C又叫L-抗壞血酸，是一種含不飽和烯酯結構的酸性多羥基化合物，為水溶性維生素，分子式為C6H8O6，相對分子量質為176.13，維生素C具有不飽和共軛結構，在紫外-可見光區有吸收，紫外吸收最大波長在244 nm附近。維生素C呈無色無臭的片狀晶體，易溶于水，不溶于脂溶劑。在酸性環境中穩定，遇空氣中氧、熱、光、堿性物質，特別是有氧化酶及痕量銅、鐵等金屬離子存在時，具有抗氧化作用，是知名度最高的營養素[3]。

1 材料

1.1 實驗材料

樣品購于貴州省安順市鎮寧縣簡噶鄉，屬于2018年該地區新引進的扶貧產業，經貴陽中醫學院藥用植物栽培與鑒定教研室魏升華教授鑒定為西番蓮科西番蓮屬（Passionfora edulisf. flavicarpa Deg）的草質藤本植物。

1.2 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、雙光束紫外可見分光光度計T1901（北京通用儀器有限責任公司）、超聲機（深圳市方奧微電子有限公司）、打漿機（九陽股份有限公司）、雷磁PHS-3CPH計（上海儀電科學儀器股份有限公司）、萬分之一電子分析天平（AY-120，梅特勒-托利多）、十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多）、HPD-25無油真空泵（天津恒奧科技發展有限公司）。

維生素C對照品（批號100425-201504，中國食品藥品檢定研究院），娃哈哈純凈水（貴陽娃哈哈飲料有限公司），甲醇（色譜純，美國天地），蒸餾水，亞硫酸鈉，磷酸二氫鉀。

2 方法

2.1 供試品的制備

把果汁取出，放到打漿機中打漿，混勻，稱取樣品約2 g，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入0.5%亞硫酸氫鈉溶液40 mL，放到超聲機中超聲提取20 min，取出，放冷，用0.5%亞硫酸氫鈉溶液定容，混勻，過濾，待測。

2.2 對照品的制備

精密稱取維生素C對照品14.28 mg，放到50 mL容量瓶中，用入0.5%亞硫酸氫鈉溶液溶解、定容，配制的對照品質量濃度為0.285 6 mg·mL-1對照品儲備液。

2.3 最大吸收波長的確定

精密稱取上述貯備液2 mL，放到25 mL的容量瓶中，用0.5%亞硫酸氫鈉溶液定容，即得維生素C使用液（質量濃度為22.848 μg·mL-1），以維生素C標準使用液為待測樣，以0.5%亞硫酸氫鈉溶液作為空白，于200～350 nm波長范圍內測定吸光度。

從吸收曲線上看，維生素C在244 nm附近有最大吸收波長（244 nm±2 nm都可取作為檢測波長）。所以，選擇246 nm作為檢測波長。見圖1。

圖1 最大吸收波長測定圖譜圖

2.4 色譜條件

百香果中維生素C的最佳色譜條件為：Phenomenex-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：采用等度洗脫，甲醇與0.01 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（調pH至2.4）的比例為5∶95；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長246 nm；柱溫20 ℃；進樣量10 μL。

2.5 方法學考察

2.5.1 系統適用性

按照上述供試品制備條件下制備樣品，并進樣得到樣品的色譜圖如圖2所示，其結果顯示維生素C的分離度，均符合要求，其理論塔板數高于10 000。

圖2 維生素C液相色譜圖

2.5.2 標準曲線的配制

分別吸取維生素C使用液0、1、2、5 mL和10 mL到10 mL的容量瓶中，用入0.5%亞硫酸氫鈉溶液定容，混勻。各濃度標準溶液按2.4色譜條件進樣測定。以標準溶液的質量濃度為橫坐標；對應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并進行回歸計算。研究得出回歸方程為Y=30.448X-1.1883，R2=0.999 9。表明維生素C在0～22.848 μg·mL-1范圍內線性良好。見圖3。

圖3 維生素C標準曲線圖

2.5.3 精密度的測定

按照2.1項下供試品溶液制備樣品連續進樣測定6次，峰面積分別為134.803、130.364、134.715、129.691、125.433和130.497，計算精密度，其精確度RSD為2.68%，儀器符合實驗要求。

2.5.4 重復性

按照2.1項下供試品溶液制備樣品6份進樣測定，分別記錄峰面積，計算含量，分別為126.6、123.1、124.3、127.8、129.0 μg·g-1和 126.0 μg·g-1，其重復性RSD為1.73%，試驗方法符合實驗要求。

2.5.5 加標回收率的測定

稱取樣品1 g，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入5 mL維C標準使用液，加0.5%亞硫酸氫鈉溶液35 mL，放到超聲機中超聲提取20 min，取出，放冷，用0.5%亞硫酸氫鈉溶液定容，混勻，過濾，待測。計算加標回收率范圍在94.43%～105.06%，見表1。試驗方法符合實驗要求。

表1 加標回收率及其結果表

3 結果與分析

通過在最大吸收波長246 nm處測定6個試樣的峰面積，平行測2次，根據標準曲線回歸方程計算百香果中維生素C的含量。百香果維生素C平均含量為12.61 mg/100 g[4]。本次實驗采用高效液相法的測新鮮百香果中維生素C含量處于較低水平，而蔣紅芝[2]測得百香果中維生素C含量高達50 mg/100 g，其原因可能是采摘時間與品種，亦或者是由于產地環境造成的。針對這一原因我們將進行下一步的跟蹤分析，提升鎮寧百香果，本文采用超聲提取與高效液相色譜法測定了鎮寧百香果果肉中維生素C的含量。百香果果肉經超聲提取后，用反相高效液相色譜測定[5]。實驗測得百香果果肉中的維生素C質量濃度為12.61 mg/100 g。這種測量方法具有高效便捷的特點，其測量結果更為真實準確，且溶劑用量少，節約環保，可為開發利用豐富的百香果資源提供理論參考。