Notch-1和TMEM16A在食管鱗癌組織中表達及臨床意義

劉玉含 閆 琛 康運凱 魏 攀

(鄭州人民醫院檢驗科，河南 鄭州 450003)

食管癌主要類型為食管鱗狀上皮細胞癌，約占90%。食管癌發生涉及多個原癌基因、抑癌基因及其相關蛋白質的改變〔1〕。Notch-1是Notch信號通路中4個Notch同源體之一，在細胞分化、發育、增殖和凋亡過程中起重要作用，在甲狀腺癌等一些惡性腫瘤中呈現抑癌基因表達〔2〕。TMEM16A是TMEM16膜蛋白家族成員之一，是鈣激活依賴性的氯離子通道分子基礎，在結腸癌等一些惡性腫瘤中異常高表達〔3〕。本文旨在探討Notch-1和TMEM16A蛋白在食管鱗癌發病機制中的作用及二者的相關性。

1 材料和方法

1.1材料 2012～2013年鄭州人民醫院存檔的手術切除食管鱗癌標本共55例，術前均未接受放療、化療或免疫治療。其中男35例，女20例；年齡<60歲為13例，≥60歲為42例。取距病變組織5 cm以上的食管正常組織55例為正常對照組。標本均經10%甲醛溶液固定過夜，次日取材、脫水、石蠟包埋，連續切片，行HE染色及免疫組化染色。

1.2主要試劑 兔抗人TMEM16A多克隆抗體購自英國Abcam公司，羊抗人Notch-1多克隆抗體、免疫組化S-P試劑盒和DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3方法 采用免疫組化法對Notch-1和TMEM16A進行染色，操作步驟按照試劑說明書進行。用0.01 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)替代一抗為陰性對照。以英國Abcam公司提供的陽性切片為陽性對照。Notch-1主要表達于細胞質中，以細胞質內出現棕黃色或黃褐色顆粒判讀為陽性細胞；TMEM16A表達于細胞膜上和細胞質中，以細胞膜上或細胞質內出現棕黃色或黃褐色顆粒判讀為陽性細胞。

1.4評價標準 觀察并記錄組織切片中的兩項指標，染色陽性細胞占細胞總數的百分率和陽性細胞著色程度，綜合評估試驗結果。組織切片中陽性細胞占細胞總數的百分比可分為4級：陽性細胞<10%，0分；10%～25%，1分；26%～50%，2分；>50%，3分。組織切片中細胞染色強度分為3級：未著色，0分；淡黃色，1分；棕褐色2分。2項指標的結果相乘得到0分為(-)，≥1分為(+)。染色結果及評分由2位經驗豐富的病理科醫生獨立操作進行。

1.5統計學分析 采用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗、Spearman相關分析。

2 結 果

2.1Notch-1和TMEM16A在正常食管和食管鱗癌中的表達 正常對照組和食管鱗癌組Notch-1、TMEM16A陽性率分別為96.36%(53/55)、14.55%(8/55)；47.27%(26/55)、55.36%(31/55)；二者比較差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.2Notch-1和TMEM16A表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關系 二者蛋白表達均與食管鱗癌分化程度和淋巴結轉移有關；Notch-1蛋白表達還與TNM分期、浸潤深度有關(P<0.05)。見表1。

2.3食管鱗癌組織中Notch1和TMEM16A蛋白表達的相關性 Notch1與TMEM16A陽性表達呈明顯負相關(r=-0.497，P=0.001)。

表1 食管鱗癌組織中Notch-1和TMEM16A陽性表達在不同臨床病理特征中的關系(%)

3 討 論

Notch基因最早是在果蠅中被發現，Notch信號通路是一種保守的信號轉導通路，在多種組織及器官的早期發育過程中，可調節多種細胞的生長、發育、增殖和凋亡〔4〕。目前已發現的人Notch信號受體有4種(Notch-1、Notch-2、Notch-3和Notch-4)，其中最主要的為Notch-1，Notch-1信號激活可抑制血管內皮細胞萌芽及血管管腔擴大，從而抑制血管新生；信號阻斷可誘發血管內皮細胞增生〔5〕。除了調控血管內皮細胞的增生和凋亡外，Notch-1信號異常表達還可誘導腫瘤。目前在人類的許多惡性腫瘤中均發現Notch-1受體的異常表達，但在不同組織的腫瘤及腫瘤發展的不同階段，Notch-1的作用可能不同：在結腸癌〔6〕中，Notch-1呈高表達狀態，可促進腫瘤生成，起癌基因作用，在肺癌〔7〕中，Notch-1呈低表達狀態，起抑癌基因作用。

本實驗結果提示Notch-1可能在食管鱗癌發病機制中起抑癌基因的作用。Notch-1有望成為食管鱗癌早期診斷和評估預后的輔助指標之一。

鈣激活氯離子通道(CaCCs)是一類離子通道蛋白，廣泛分布于人體的多種組織，尤其是分泌器官上皮細胞，如氣管和消化道黏膜上皮〔8〕，在多種生理功能中發揮重要作用，TMEM16A是CaCCs的分子基礎〔9〕。TMEM16A基因定位于人染色體11q13區域上，含有26個外顯子，其編碼的TMEM16A蛋白含有986個氨基酸，相對分子量為114 000 kD。研究發現TMEM16A高表達于結腸癌〔10〕、眼瞼基底細胞癌〔11〕和胃腺癌〔12〕等多種惡性腫瘤組織中。

本實驗結果提示TMEM16A可能與食管鱗癌的發生、發展相關。TMEM16A的高表達對判斷食管鱗癌患者的腫瘤分化程度有重要的參考價值，TMEM16A可作為評價腫瘤預后的標準之一。

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11馬瀏莉.眼瞼基底細胞癌術后組織中ILK、Tmem16a與Ki67表達的關系及意義〔J〕.青海醫學院學報，2014；35(4)：272-5.

12楊 軍，劉 妮，康安靜，等.TMEM16A在胃腺癌中的表達及意義〔J〕.南方醫科大學學報，2012；32(6)：794-7.