解脲支原體生物亞群與男性尿道炎的相關研究

曾文軍 王柳均 鄧珍良 袁紹輝 張小敏 陳劍釗 皮紅泉 陳群

【摘要】 目的 研究解脲支原體（UU）不同生物亞群與男性尿道炎的關系。方法 120例男性尿道拭子標本， 獲取120株UU臨床株， 分析檢查其尿液， 并以多條帶抗原基因為靶位設計分群引物進行UU鑒定生物群。結果 本研究未發現兩生物亞群混合感染標本。UU1生物亞群占UU檢測79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統計學意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1是優勢定植菌。結論 UU1生物亞群可能是優勢定植菌群， UU2生物亞群更容易引起尿道炎癥。

【關鍵詞】 解脲支原體；生物亞群；尿道炎；聚合酶鏈反應

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.09.119

【Abstract】 Objective To study the relationship between different biological subgroups of Ureaplasma urealyticum （UU） and male urethritis. Methods A total of 120 UU clinical strains were obtained from 120 male urethra swabs specimens， and the urine samples were tested and analyzed. Multi-banding antigen target for designing cluster primers was used for UU identification of biota. Results No mixed infection specimens of two biological subsets were found in this study. UU1 biosubsets accounted for 79.17% （95/120） of UU detection， and UU2 biosubsets accounted for 20.83% （25/120） of UU detection. There were 12 cases with clinical symptoms （2 UU1 cases， 10 UU2 cases）， and 108 cases without clinical symptoms （93 UU1 cases， 15 UU2 cases）. The detection rate of UU2 in male urethritis was significantly higher than that of UU1， and the difference was statistically significant （χ2=31.58， P<0.01）. That is， UU2 has higher pathogenicity， and UU1 is the dominant colonization bacteria. Conclusion The UU1 biological subgroups may be the dominant colonization group， and the UU2 biological subgroups are more likely to cause urethritis.

【Key words】 Ureaplasma urealyticum； Biological subgroups； Urethritis； Polymerase chain reaction

UU是男女下生殖道的常見分離菌株， 臨床根據UU的表型和基因型特征分為UU1（即Parvo生物群， 包括1、3、6、14四種血清型）和UU2（即T960生物群， 包括另外2、4、5、7、13 10種血清型）兩種生物亞群。研究發現， 不同生物亞群致病性存在差異， 尤其在男性泌尿生殖道臨床癥狀不一[1]。為探討UU不同生物亞群與男性尿道炎的關系， 本文對120例男性尿道拭子標本， 分離培養的UU菌株進行分群鑒定， 并與相關臨床表現進行分析， 現將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取120例男性尿道拭子標本， 獲取120株UU臨床標本， 患者年齡22～49歲， 平均年齡32.9歲。符合尿道炎診斷12例（診斷標準：尿痛癢、尿道分泌物及油鏡下查見多核白細胞≥5個）， 不符合尿道炎診斷108例。除外淋球菌、霉菌、沙眼衣原體、滴蟲、加特納桿菌、皰疹病毒、乳頭瘤病毒及梅毒、人類免疫缺陷病毒（HIV）感染。

1. 2 標本來源 收集本院門診男性尿道拭子標本， 獲取120株UU臨床株。所有標本均經液體培養、分離、純化及鑒定， 挑取單個典型菌落重復接種于液體培養基增菌后， 菌液置-20℃冰箱中備用。

1. 3 試劑及儀器 UU液體及固體培養基；聚合酶鏈反應（PCR）試劑盒及DNA marker；DNA引物；瓊脂糖；SU-CF-IF型凈化工作臺； PCR儀；電熱恒溫水箱；Clinibio 128C酶標儀；國產洗板機；紫外線燈；UU1生物亞群標準菌株；UU2生物亞群標準菌株。

1. 4 UU生物群鑒定[2， 3] ①菌株DNA提?。鹤缘蜏乇渲腥〕鰳藴屎团R床菌株液體培養基后解凍， 吸取500 μl菌液， 10000 r/min離心15 min， 吸棄上清液；加入100 μl的蛋白酶K溶液；55℃水浴1 h；95℃保溫滅活蛋白酶K10 min；10000 r/min 離心1 min， 取上清液作PCR模板試驗。②PCR擴增及瓊脂糖凝膠電泳：UU1生物亞群擴增產物為403 bp， UU2生物亞群為448 bp。PCR體系均為20 μm引物各2 μl， 3 U/μl Taq酶1μl， 10×PCR Buffer （含Mg2+）5 μl， 3 mM dNTP混合物5 μl， DNA模板3 μl， ddH2O 40 μl， 總反應體積100 μl。UU分群引物：上游：5'-GTATTTGCAATCTTTATATGTTTTCG-3'；下游：5'-CAGCTGATGTAAGTGCAGCATTAAATTC-3'。PCR反應條件為95℃預變性3 min、95℃變性1 min、54℃退火1 min、72℃延伸1 min， 共40個循環， 72℃延伸10 min。擴增產物用2%瓊脂糖凝膠電泳， 于紫外線燈上觀察及鑒定。

1. 5 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2 檢驗。 P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

本研究未發現兩生物亞群混合感染標本。UU1生物亞群占UU檢測79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統計學意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1是優勢定植菌。見表1。

3 討論

近年UU實驗分離率呈上升趨勢， 臨床上分為UU1與UU2兩種生物亞群。由于UU是一種條件致病菌， 影響其致病原因多， 主要有[4]：①與血清型相關；②與UU濃度及感染時間相關；③與宿主狀態有關。UU作為一種條件致病微生物， 定植于宿主黏膜表面的UU會釋放出NH3、各種磷脂酶、蛋白水解酶、過氧化物等導致機體損傷和炎癥反應[5]。

UU在人群分離率極高， 即便經過抗菌消炎治療轉陰， 經過一段時間復查又會轉陽性[6]。如何判斷UU是感染狀態或攜帶狀態， 是臨床急需解決的問題。雖然人們為探討不同血清型UU的致病性進行大量研究， 但都無足以令人信服的證據說明某種血清型肯定和某種疾病有關。辛亞維等[7]研究結果發現， UU2生物亞群在不孕患者中檢出比率高于正常女性， 并且具有一定相關性， 這可能與UU2生物亞群促單核細胞分泌巨噬細胞移動抑制因子（MIF）的能力高于UU1生物亞群有關， MIF的增加使機體對UU產生超敏反應， 引起炎癥和機體損傷。研究發現[4]， 從宮頸發生鱗狀上皮內病變女性患者的陰道后穹窿處分泌物、宮外孕患者的輸卵管內膜和宮頸分泌物、不育男性精液分離出來的UU均以UU2生物亞群為主， 且感染UU2生物亞群的輸卵管發生纖毛粘附和脫落率高達90%， 而UU1僅僅10%?？赡茉蛑粸閁U2生物亞群的致病因子或致病島對宿主破壞性更大， 致病性更強[8]。多數研究傾向于UU2生物亞群具備一定的致病力， 而UU1可能是優勢定植菌群。

UU2生物亞群相較UU1生物群更容易引起炎癥， 與非淋菌性尿道炎、前列腺炎、盆腔炎關系更密切[9]。本研究結果顯示， UU1生物亞群占UU檢測79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統計學意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1生物亞群是優勢定植菌。早期研究發現， 男女不孕不育患者UU2與抗精子抗體及抗子宮內膜抗體關系更密切[2， 3]， 更容易導致不孕不育。錢迎芬[10]研究發現， UU2具有毒性作用， 導致亞群比例失調而引發炎癥， 臨床分群對診療甚為必要。張俏忻等 [11]研究發現， 男性不育人群與正常人群支原體感染無差異性， 但與UU1比較， UU2感染更容易引起精子質量下降和白細胞異常增加， 可導致男性不育的發生。UU1生物亞群可能為寄居泌尿生殖道的正常菌群， 而UU2生物亞群則有一定的致病力支原體， 本文研究中也驗證了上述觀點。但亦有研究發現， 男性尿道UU感染攜帶中UU2檢出率高于UU1[12]， 這可能與地區分布、研究對象及樣本量因素差異有關。李會平等[13]研究證明， 積極治療UU生殖道感染有助于提高抗精子抗體及抗子宮內膜抗體轉陰率， 阻止抗體形成， 對免疫性不孕治療有重要意義。臨床用藥方面， UU兩大生物群對多西環素敏感性較高， UU2較UU1有更高的耐藥性[14]。

總之， UU2生物亞群與尿道炎的關系更密切， 其致病機理有待更進一步深入研究。臨床開展UU定量與分型， 有利于區別對待UU不同生物亞群的臨床診治， 合理應用抗菌素， 對開展優生優育有重要意義。

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[收稿日期：2017-11-02]