金沙江和長江長薄鰍人工繁殖及胚胎發育

張運海 丁瑤 顧正選 黃學瀟 余澤文 舒敏

摘要：2017年6-7月分別對采集于金沙江攀枝花江段和長江瀘州江段的長薄鰍（Leptobotia elongata）進行人工繁殖試驗，同時對金沙江攀枝花江段的長薄鰍進行胚胎發育的觀察。結果表明，共催產長薄鰍4組，共獲得魚苗1.8萬尾，長薄鰍雌性親本成熟較雄魚早，雌雄發育同步期在6月底。在水溫24 ℃條件下對胚胎進行觀察，發現受精卵發育為原腸胚的時間為5.0 h，平均出膜時間為31.0 h，出膜仔魚平均長度為5.2 mm，出膜前魚體長度與卵膜直徑相當，在卵膜內能夠伸直魚體自由游動，這與其他鰍科魚類以及多數鯉科魚類有所不同。

關鍵詞：長薄鰍（Leptobotia elongata）；金沙江；長江；人工繁殖；胚胎發育

中圖分類號：S917 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2018）08-0104-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.08.026

Artificial Propagation and Embryonic Development Observation of Leptobotia elongata from Jinsha River and Yangtze River

ZHANG Yun-hai，DING Yao，GU Zheng-xuan，HUANG Xue-xiao，YU Ze-wen，SHU-Min

（Wuhan Sinoeco Ecological Science and Technology Co.， Ltd.， Wuhan 430083， China）

Abstract： Artificial propagation of Leptobotia elongata collected from the Panzhihua section of Jinsha river and Luzhou section of Yangtze river were studied from June to July in 2017. At the same time the embryonic development of Leptobotia elongata from Panzhihua section of Jinsha River were observed. In the experiment of artificial inducing spawning of 4 parents 18 000 fries were received，the study indicated that the females matured earlier than the males，The time they both reach sexual maturity may be in the end of June. Gastrula began in 5.0 h at 24 ℃，and the average hatching time was 31.0 h，the average length of the larvae was 5.2 mm. Before hatching the length of larvae and the diameter of egg membrane was about equal. the fish was able to stretch and swim freely in the egg membrane. This was different from other Cobitidae and most of Cyprinidae.

Key words： Leptobotia elongata； Yangtze river； Jinsha river； artificial propagation； embryonic development

長薄鰍（Leptobotia elongata）隸屬于鯉形目鰍科沙鰍亞科薄鰍屬，別名花魚、花斑鰍、花泥鰍、紅沙鰍鉆、火軍、花鰍等，是中國長江中上游特有珍稀魚類，也是目前已知的鰍科魚類中體型最大的一種[1]。長薄鰍主要攝食底層小型魚類及底棲動物。近年來，水生態系統遭受嚴重威脅，特別是長江上游江段及金沙江江段，由于水電站的梯級開發，使得野生魚類生境發生劇烈變化；加之過度捕撈，使長薄鰍的野生種群受到嚴重威脅。目前長薄鰍在《中國物種紅色名錄》《中國瀕危動物紅皮書 魚類》中均被列為易危（VU）等級。為了對水電影響江段野生魚類資源進行補償，中國多個水電站采取人工增殖放流的方式對流域漁業資源進行修復。2017年分別在四川省樂山的安谷水電站魚類增殖放流站和四川攀枝花的觀音巖水電站魚類增殖放流站進行長薄鰍的人工繁殖，并取得成功。

1 材料與方法

1.1 材料

所用的試驗材料為天然水域人工采集的野生親本，其中觀音巖水電站魚類增殖放流站的長薄鰍親本采集于金沙江攀枝花江段，采集時間為2016年5月27日，采集后對魚體進行消毒處理，消毒后將親本暫養于循環水養殖系統中，催產時間為2017年6月14日；安谷水電站魚類增殖放流站的長薄鰍采集于長江瀘州江段，采集時間為2017年7月11日，由于親本發育良好，采集后立即運回增殖放流站進行人工催產。

1.2 方法

1.2.1 親本選擇 選擇體表無傷，活力較強的個體作為親本，通常繁殖季節雌性長薄鰍腹部柔軟膨大，可見明顯的卵巢輪廓，雄魚腹部輪廓不明顯，生殖孔微紅，輕壓雌鰍腹部有乳白色精液流出，并且遇水即溶解。

1.2.2 人工催產 采用PG、HCG、LHRH-A3 3種催產藥物進行催產，其中第一針所用的催產劑為LHRH-A3，注射劑量為2 μg/kg，雄魚不注射。第二針采用混合催產劑，其中PG用量為8 mg/kg，LHRH-A3用量為15 μg/kg，HCG用量為800～1 000 IU/kg，雄魚視發育情況（精子遇水擴散快則發育好，慢則發育一般）注射劑量為雌魚的1/3～1/2，針距6 h，催產水溫23～25 ℃。注射催產劑后將親本放入催產池，開流水刺激，密切觀察親本動態，若出現追逐，可將雌魚撈起，輕輕擠壓腹部，若有卵粒流出便可進行人工授精。

1.2.3 人工授精 由于長薄鰍精子量較少，擠出的精液很容易黏連在體壁上難以落入采卵盆中，因此采集精液時，一人將雄魚抓起，腹部朝上，一人配合擦干生殖孔周圍水分，輕壓雄魚腹部，用干燥的吸管吸取精液，吸取精液后將精液滴入預先配置好的精子保存液中，保存液參照丁淑荃等[2]的精子保存液配方。

將雌魚抓起，并擦干生殖孔及尾部的水分，一只手從背部抓住雌魚，一只手從尾部抓住，同時將尾部略朝背側彎曲，以免造成魚卵沿尾部流下造成魚卵損失，注意從頭向尾部方向慢慢推壓腹部，將魚卵擠入干燥的白瓷盆中，可連續推壓多次，直到擠不出魚卵為止，避免用力過度造成雌魚損傷。

精卵采集完成后將保存液中的精子加入魚卵中，用羽毛沿一個方向輕輕攪拌均勻，加入充分曝氣的潔凈清水激活精子完成受精，加入的水量為魚卵量的2倍左右，緩慢攪拌1 min讓精卵充分結合，然后將用清水將魚卵帶水漂洗干凈。

1.2.4 人工孵化及胚胎發育觀察 受精完成后將魚卵倒入孵化桶進行孵化，剛開始水流適當加大，每隔15～20 min取樣觀察受精卵發育情況，拍照并記錄發育時期，待原腸胚中期統計受精率。魚苗破膜前期減小孵化桶的水流直到魚苗完全出膜，觀察魚苗形態并統計出苗率。發育時期的劃分參照文獻[3]，有一半以上個體達到特定時期發育特征方可記錄發育時間。

2 結果與分析

2.1 人工繁殖效果

分別于2017年6月14日和2017年7月11日對金沙江攀枝花江段和長江瀘州江段采集的長薄鰍親本進行人工催產（表1）。催產金沙江攀枝花江段采集的長薄鰍親本2組，催產水溫25 ℃，效應時間7 h，催產率100%，獲得魚卵3萬粒，受精率50%左右，出苗1萬尾左右，平均出苗率33%；催產長江瀘州江段采集的長薄鰍親本2組，催產水溫24 ℃，效應時間7.5 h，催產率100%，其中第一組受精率65%，第二組受精率95%，第一組由于魚卵過熟沒有出苗，第二組出苗率80%，獲得魚苗8 000尾左右。

2.2 胚胎發育觀察

長薄鰍卵受精后吸水膨脹，吸水后平均卵徑約4.1 mm，比重與水相當，魚卵無黏性，屬典型漂流性卵。受精后約40 min動物極逐漸隆起形成胎盤。此后進入卵裂期，每隔20 min左右卵裂一次，3.0 h后卵裂期進入尾聲，細胞逐漸變得很小以至于難以分辨，逐漸隆起，形成最初的胚層，3.5 h后胚層逐漸抬高，形似西洋紳士帽，覆蓋于卵黃囊上方，此后胚層逐漸降低并向卵黃囊頂部靠近，隨著囊胚層與卵黃囊的界限逐漸模糊，胚層下包開始意味著囊胚期的結束。受精后5.0 h，胚層逐漸下包至卵黃囊的1/2處，標志著原腸胚期的開始，受精后7.0 h胚層下包至卵黃囊的2/3處，進入原腸胚中期，受精后9.5 h胚層下包距卵黃囊底部約1/4，進入原腸胚晚期，此時胚層不對稱，表明胚體分化開始。受精后11.0 h卵黃囊幾乎完全被胚層包住，胚體逐漸形成，似一條粗線，神經板開始發育。受精后12.0 h胚層完全包裹卵黃囊，胚孔封閉，胚體清晰可見。受精后13.0 h胚體中部開始出現肌節。受精后14.0 h胚體近腦端開始出現橢圓形眼囊。受精后15.0 h眼囊后方出現一卵圓形的耳囊，脊索已經非常明顯。受精后16.5 h胚體末端逐漸脫離卵黃囊，形成獨立的尾牙。受精后22.5 h，魚苗脊索伸直，開始出現耳石，此時魚苗開始扭動身體。受精后28.0 h，魚苗開始通過頭部撞擊和尾部擺動使得卵膜破裂，進而變成出膜仔魚，出膜后魚體平臥，身體透明，出膜仔魚平均全長5.2 mm，具體發育時期及特征見表2。

3 小結與討論

3.1 長薄鰍人工繁殖季節

6月14日催產的金沙江攀枝花江段的雌性親本發育較好，雄性親本催產后精子量少，遇水擴散狀況不佳，因此該批魚卵受精率低；7月11日長江瀘州江段的雄性親本發育達到最佳，但雌性親本出現魚卵過熟現象，過熟魚卵流動性過強，部分魚卵開始坍塌，受精后胚胎發育止于囊胚期，之后受精卵逐漸消融。由2次人工繁殖試驗可以看出，長薄鰍雌雄發育不同步，雌性成熟較雄性早。5月底金沙江攀枝花江段雄性親本還未達到最佳成熟期，加之長薄鰍精巢呈現細長的分支裝結構，不易擠出精子，難以滿足干法授精的操作要求，采用適當的精子保存液稀釋后再進行授精能夠解決這一問題，由2次繁殖結果推測，長薄鰍最佳繁殖季節應該在6月底，此時長薄鰍雌雄親本發育較為同步，具體時間還需要通過進一步試驗來驗證。

3.2 親本暫養

研究發現5月27日采集于金沙江攀枝花江段的長薄鰍親本，在增殖放流站循環水系統中暫養17 d后，很大程度上親本出現性腺退化現象。原因可能是野生魚類親本從天然水域過度到循環水養殖系統中時，由于養殖環境發生變化，引起魚類的應激反應，使得性腺退化[4-8]。這種現象在其他鰍科魚類中也有出現[9]，因此筆者推測，這可能與大多數鰍科魚類的生活習性較其他游泳性魚類不同有關，常規養殖環境很難模擬自然狀態下鰍科魚類的生活環境。因此通過野外生態調查，了解長薄鰍的生活及生態習性，進而模擬長薄鰍自然狀態下的生活環境是阻止長薄鰍人工養殖條件下性腺退化的可行途徑。

3.3 長薄鰍胚胎發育特點

長薄鰍卵沒有黏性，屬于漂流性卵，這一點類似于中華沙鰍[10]，而與大多數產黏性卵的高原鰍不同[11-13]；本研究長薄鰍受精卵吸水后卵膜徑相較于梁銀銓等[14]研究結果略大，這可能與長薄鰍個體大小、成熟情況或采樣點不同有關。其次長薄鰍胚體長度在出膜前小于卵膜徑，能夠自由擺動身體，這一點與其他鰍科魚以及多數鯉科魚類有所差異。本研究長薄鰍胚胎發育時間較梁銀銓等[14]研究結果有所提前，這可能與研究胚胎發育時水溫略高有關。

參考文獻：

[1] 丁瑞華.四川魚類志[M].成都：四川科學技術出版社，1994.104-106.

[2] 丁淑荃，萬 全，李 飛，等.蛇鮈精子保存液的篩選及其效果研究[J].生物學雜志，2012，29（6）：62-64.

[3] 殷名稱.魚類早期生活史研究與其進展[J].水產學報，1991，15（4）：348-358.

[4] 王志堅，殷江霞，張耀光.長薄鰍的精巢發育和精子發生[J].淡水漁業，2009，39（1）：3-7.

[5] 王志堅，殷江霞，張耀光.長薄鰍的卵巢發育和卵子發生[J].淡水漁業，2011，41（4）：32-37.

[6] 梁銀銓，胡小建.長薄鰍人工繁殖技術的研究[J].水生生物學報，2001，25（4）：422-424.

[7] 鄧際華，張俊臣，周 敏，等.長薄鰍北方室內繁殖試驗[J].現代化農業，2006（12）：28-29.

[8] 劉 陽，朱挺兵，吳興兵，等.短須裂腹魚胚胎及早期仔魚發育觀察[J].水產科學，2015，34（17）：683-688.

[9] 王衛民，張家波.泥鰍的大規模人工繁殖試驗[J].水利漁業，1999， 19（1）：9-10.

[10] 李 強，姚明予，周 波，等.中華沙鰍人工繁殖技術初探[J].2011，41（5）：92-95.

[11] 耿龍武，姜海峰，佟廣香，等.達里湖高原鰍人工繁殖技術初步研究[J].水產學雜志，2015，28（6）：15-17.

[12] 李 榮，吳湘香，吳世勇，等.西昌高原鰍人工繁殖技術研究[J].長江流域資源與環境，2016，25（Z1）：38-41.

[13] 洪 斌.長江紫薄鰍親本培育及人工繁殖技術[J].安徽農學通報，2016，22（10）：123-129.

[14] 梁銀銓，謝從新，胡小建，等.長薄鰍胚胎發育的觀察[J].水生生物學報，1999，23（6）：631-635.