酶聯免疫斑點檢測技術對結核性腦膜炎的診斷價值探討

張福興 曲靖市中醫醫院檢驗科 （云南 曲靖 655000）

內容提要： 目的：探討酶聯免疫斑點檢測技術（Elispot）對結核性腦膜炎的診斷價值，為結核性腦膜炎臨床診斷提供參考資料。方法：選取2012年5月～2015年9月在本院腦病科住院治療的122例疑似結核性腦膜炎患者，根據最終治療與隨訪結果，將所有患者分為觀察組（結核性腦膜炎組）65例與對照組（非結核性腦膜炎）57例，均行Elispot檢測腦脊液、外周血標本的檢測陽性率。結果：觀察組腦脊液、外周血標本陽性率均顯著高于對照組（95.38%vs3.51%，83.08%vs0），經χ2檢驗差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論：采用腦脊液和外周血Elispot檢測用于結核性腦膜炎早期診斷有助于提高診斷陽性率，是一種比較理想的實驗室檢測方法。

結核性腦膜炎（tuberculous meningitis，TBM）是由結核桿菌引起的一種非化膿性炎癥性疾病，其發病率占神經系統結核的70%左右，近年來受結核桿菌基因突變、抗結核藥物研究滯后等因素的影響，本病發病率與病死率呈逐年升高趨勢[1]。治療時間越早患者預后越好，許多結核性腦膜炎患者發病早期無典型癥狀，而且微生物學檢查的陽性率較低，因此臨床診斷難度較大。為此人們需要探索一種更加準確、可靠、便捷的診斷方法[2]。酶聯免疫斑點檢測技術（Enzymelinked im m unospotassay，Elispot）是從單細胞水平檢測細胞因子或分泌抗體的新型檢測技術，國外報道顯示該技術的診斷敏感度在83%～97%之間，特異度則高達100.0%，我國作為結核病高發國家。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本研究所選病例為2012年5月～2015年9月在本院腦病科住院治療的122例疑似結核性腦膜炎患者，納入標準：①為初治病例；②臨床表現為發熱、頭痛、腦膜刺激征等，影像學表現為腦積水、基底節區滲出等，結合癥狀表現高度懷疑為結核性腦膜炎；③對本次研究目的及意義完全知情，并自愿簽署知情協議書；排除標準：①合并肝腎功能受損；②入院前使用過免疫抑制劑或增強劑治療；③臨床資料不完整或中途退出、失訪。根據所有患者的最終治療與隨訪結果，將符合以下診斷標準者納入結核性腦膜炎組：①腰椎穿刺和腦脊液（CSF）檢查分歧桿菌培養陽性；②合并其他部位結核，有細菌學或病理學證據支持；③診斷性抗癆治療有效，隨訪1年病情無反復。最終符合結核性腦膜炎的病例合計65例，分配至觀察組，其他57例為非結核性腦膜炎，分配至對照組，經過對癥治療或抗癆以外其他治療最終獲得痊愈。觀察組中有男性患者35例，女性患者30例，年齡13～69歲，平均（44.28±8.90）歲，對照組中有男性患者29例，女性患者28例，年齡15～66歲，平均（42.15±9.05）歲，兩組患者性別及年齡分布基本相同，基線資料比較無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患者均按照以下步驟行Elispot檢測：1.2.1制備細胞工作液。采集腦脊液6mL，新鮮外周血8mL，注入含肝素抗凝劑的試管內，采用Elispot檢測專用試劑盒并在二級生物安全柜內進行操作，加入適量細胞培養液混合離心10min，吸取中間層白細胞轉移到15mL離心管中，加入無血清培養液調整細胞密度到0.1×106個/mL待檢。

1.2.2 Elispot檢測。每個待檢標本均啟用2個檢測孔，分別加入靶向抗原，陰性對照孔加入不含抗原的細胞培養液，陽性對照孔內加植物血凝素，各孔加入預先制備好的細胞工作液，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，最后進行斑點統計與結果判定。每一反應孔中斑點數減去陰性孔中斑點數為反應結果，結果≥40為陽性。

1.3 觀察指標

將觀察組與對照組的Elispot檢測結果進行比較，統計各組腦脊液與Elispot檢測陽性率，同時比較各項指標檢測水平。

1.4 統計學分析

采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析，計數資料用構成比或率表示，以χ2檢驗，統計學檢驗水準設定為：α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

兩組患者腦脊液與外周血Elispot檢測結果對比。觀察組與對照組腦脊液、外周血Elispot檢測陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1. 兩組患者腦脊液與外周血Elispot檢測結果對比

3.討論

結核性腦膜炎是一種臨床常見感染性疾病，病因為結核桿菌感染，在肺外結核中有許多患者會累及神經系統，其中就以結核性腦膜炎最為常見[3]。近年來隨著抗生素濫用的增多導致結核桿菌基因突變愈加嚴重，加之抗結核藥物研制相對滯后，導致結核性腦膜炎發病率與患者死亡率持續攀升。據不完全統計，我國結核感染人數已超過5億，其中結核性腦膜炎占6%甚至更高，而且大部分患者為兇險的Ⅱ期和Ⅲ期，預后普遍較差[4]。早發現、早診斷、早治療是改善預后，降低病死率的關鍵，目前常用的實驗室診斷方法中，涂片鏡檢陽性率不高，而且培養周期長，PCR法要求嚴格且假陽性率高，各種輔助手段缺乏特異性，難以實現精準、快速的早期診斷，容易增加臨床治療難度，造成顱腦不可逆損傷[5]。

人體感染結核桿菌后，巨噬細胞釋放抗體，周圍T淋巴細胞產生免疫應答釋放多種淋巴因子，IFN-γ是抗結核桿菌感染免疫中的關鍵性細胞因子，Elispot檢測即利用被結核桿菌致敏的免疫細胞診斷結核桿菌感染，計數具有分泌IFN-γ功能的T細胞數量。由于該低分子多肽只存在于結核桿菌基因RDI區，因此該方法的檢測靈敏度與特異度均較高，可用于臨床療效觀察的參考指標[6]。

綜上所述，采用Elispot法檢測結核桿菌效應T細胞在腦脊液或外周血中的表達水平，能夠為結核性腦膜炎早期診斷提供重要的參考信息，但是本次研究中也體會到與外周血采集過程相比，腦脊液的采集相對困難，可能會影響陽性反應，這需要今后大樣本數據的積累以及進一步研究證實。