Goldeneye 20A試劑盒檢測發現TPOX基因座三等位基因一例

周單華 胡錫階 章濤 萬衛紅 余艦 劉祖林 余麗梅

[摘要] 本文報道了二聯體檢案中孩子的TPOX基因座上檢測到三等位基因1例。采用Goldeneye 20A試劑盒檢測，3500DX遺傳分析儀電泳，Genemapper基因分型軟件基因分型，確認其基因分型為（8，9，11）。親子鑒定中檢測到三等位基因時，在排除污染前提下，至少需兩種試劑盒檢測確認，以保證鑒定結果及PI計算的可靠性。為提高檢案的準確性，需謹慎對待三等位基因的檢測、峰型判斷、分析和確認，進而也可為產生三等位基因的可能機制提供基礎信息。

[關鍵詞] 三等位基因；Goldeneye 20A試劑盒；親子鑒定；TPOX

[中圖分類號] DF795.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）05（b）-0146-03

A case of tri-allele in TPOX was detected using Goldeneye 20A Kit for the first time

ZHOU Danhua1，2* HU Xijie1，2* ZHANG Tao1，2 WAN Weihong1，2 YU Jian2 LIU Zulin1，2 YU Limei1，2

1.Key Laboratory of Cell Engineering in Guizhou Province， Guizhou Province， Zunyi 563003， China； 2.Centre of Forensic Medicine， the Affiliated Hospital of Zunyi Medical University， Guizhou Province， Zunyi 563003， China

[Abstract] This article reports one case of tri-allele detected in the TPOX locus of a child in duos. The Goldeneye 20A kit was used for detecting. The 3500DX genetic analyzer was used for electrophoresis and Genemapper genotyping software was used confirm its genotyping （8， 9， 11）. When the tri-allelic gene is detected in the paternity test， under the premise of eliminating contamination， at least two kits are required to confirm the test to ensure the reliability of the identification and PI calculation. In order to improve the accuracy of the case report， the tri-allele test， the peak type analysis， the classification and judgment and the confirmation should be handled with care so that provides basic information for the analysis of the possible mechanisms of tri-allele.

[Key words] Tri-allele； Goldeneye 20A kit； Paternity test； TPOX

STR三等位基因于1999年首次被Crouse[1]等報道，在STR Base數據庫等收錄了包括常染色體和性染色體STR基因分型中的三等位基因[2-5]。不同的基因出現三等位基因的頻率不同，已有文獻報道，采用Roche Hi-Pure試劑盒發現南非人群中TPOX基因座出現三等位基因頻率最高的為等位基因10[6]。TPOX基因座位于人類2號染色體，核心系列為AATG，是甲狀腺過氧化物酶基因內的一個基因座，序列圖的位置（Sequence Map Position）為1483 854～1484 085 bp，標準細胞珠007A的等位基因分型為（8，8）。Goldeneye 20A試劑盒[基點認知技術（北京）有限公司]是近年來我國針對中國人群設計研發的STR分型檢測試劑盒，正逐步廣泛地用于法醫物證鑒定。本文首次報道了中國人群中，采用Goldeneye 20A試劑盒檢測發現的稀有TPOX三等位基因。

1 案例資料

本案母親和孩子于2017年6月，經遵義醫學院附屬醫院法醫鑒定中心親子鑒定確認母子關系。母親和孩子的血樣采用Goldeneye 20A試劑盒檢測，陽性質控為標準物9947A；華夏白金試劑盒（美國ABI公司）驗證，陽性質控為標準物007A，TFA血卡直擴，3500DX遺傳分析儀電泳、測序，Genemapper軟件分型，兩次檢測基因座TPOX基因分型都表現為三等位基因。

1.1 陽性質控

Goldeneye 20A和華夏白金試劑盒陽性質控的DNA檢測結果如圖1、圖2（封三）所示，母親和孩子樣本中各基因座均擴增成功，且無污染、無雜峰，符合標準物9947A和007A分型結果。

1.2 母親和孩子基因座檢測的基因分型

Goldeneye 20A和華夏白金兩試劑盒2次檢測顯示，共有基因座的基因分型結果均高度一致（見表1、2），尤其是TPOX基因座等位基因，母親STR分型為（8，9），而孩子STR分型均存在三等位基因（8，9，11）。

1.3 母親和孩子TPOX基因座分型

圖譜如圖3（封三）所示，兩種試劑盒基因分型圖譜在母親的等位基因均表現為（8，9）兩個峰，而孩子都呈現三等位基因（8，9，11）3個峰，其他基因座上基因分型型均為二等位基因峰型。

2 討論分析

本案例中，STR分型結果顯示，母親TPOX基因座的等位基因為（8，9），而孩子在TPOX基因座的等位基因分型為（8，9，11）。劉秋玲等[7]用Powerplex16 system試劑盒，曾報道3例（4個體）TPOX基因座的三等位基因：案例1母親的TPOX分型為（9，11，12）；案例2小孩的分型為（8，9，11）；案例3母親和小孩的分型均為（8，11，12）。本案例類似于案例2，均為孩子出現三等位基因，且基因型相同，但這些文獻報道所用試劑盒為Identifiler等[8-9]，本研究使用Goldeneye 20A試劑盒檢測到TPOX基因座三等位基尚屬首次。且各基因座PCR引物序列不盡相同。三等位基因產生的機制雖然還不是十分清楚，但國內外較為認同的有如下幾種觀點：①同源染色體不分離（nondisjunction），即二倍體生物在減數分裂期形成配子時，分布于同源染色體上的兩個等位基因分別隨機分配到兩個配子中并遺傳給子代，但當染色體運動異時，常會導致其不分離[10-11]；②同源染色體在減數分裂時出現不等價交換；③受精卵發育階段，染色體不分離而形成的不同基因型細胞的嵌合體，包括同源和異源嵌合[12-14]，甚至產生四等位基因異源嵌合體[15]，在SRT分型圖譜上均可出現三等位基因形式。

三等位基因在STR基因分型圖譜可為兩種峰型：一種是兩個峰的峰高加起來與第3個峰高相。另一種則是3個峰的峰高峰面積相等。本案例中形成的峰高峰面積比約為1︰1︰1。TPOX、D2S441、D2S1338均位于2號染色體，但僅在TPOX基因座上出現了三等位基因，可排除三倍體導致的三等位基因。綜上推測，該案例中的三等位基因可能是在母體形成卵細胞的過程中發生了同源染色體不分離的情況，形成的子代基因型為表現為（8，9，11），由于未能提供父親的基因分型，并結合母親的基因型，不考慮多步突變的情況。

因此，親權鑒定中，在排除污染和采用引物不同的試劑盒驗證，判定三等位基因后，一方面三等位基因的基因座PI值計算可參考Mascarell和劉芳等[16-17]人的方法進行，另一方面，在父母存在三等位基因的親子鑒定[18-19]，或刑偵案件的個體識別中[20-21]，利用三等位基因提供的稀有等位基因信息，可以增強證據力度。

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（收稿日期：2018-02-26 本文編輯：任 念）