爐甘石乳膏中苯酚的含量測定研究

徐偉娜，劉葵葵，顏 紅，劉 林，楊清華

（山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，山東 濟南250101）

爐甘石為臨床常用的外用藥，其主要成分為碳酸鋅及少量的氧化鈣、氧化鎂、氧化鐵等。爐甘石最常見的劑型為洗劑，是《中國醫院制劑規范》收載的品種，已有長時間的臨床應用，在治療皮膚瘙癢、潰瘍和紅腫方面有良好的效果[1-3]。但爐甘石洗劑由于含藥粉末較多，放置易出現沉淀、結塊、不易搖勻等現象，影響藥物分劑量的準確性和臨床療效。為此可將其制成凝膠或乳膏，使其具備穩定性良好，易于涂布，方便攜帶等優點。苯酚是爐甘石乳膏中重要的成分之一，可起到抑菌、殺菌、止癢作用。迄今為止，爐甘石乳膏中苯酚的含量測定未見報道。本文研究爐甘石乳膏中苯酚的提取方法，建立高效液相色譜法（HPLC）測定爐甘石乳膏中苯酚的含量。測定了3批自制樣品中苯酚的含量，并與原研產品含量進行比較。該方法簡單、方便，準確性高，可為爐甘石乳膏中苯酚的含量測定提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津高效液相色譜儀（日本島津）；BT125D電子天平（Sartorius）；臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；KQ200B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器公司）。

1.2 試藥

苯酚對照品（國家標準物質中心，批號A1705109）；甲醇（國藥集團）；爐甘石乳膏原研產品（批號：1L，The Boots Company PLC Nottingham）；爐甘石乳膏（自制，批號171101，171102，171103）；爐甘石乳膏陰性對照（自制，不含苯酚）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用Agilent XDB C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）色譜柱，以甲醇-水（40:60）為流動相，流速1.0 ml/min，檢測波長271 nm，柱溫30 ℃，進樣體積50 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取苯酚對照品20 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為貯備液；精密移取貯備液2.5 ml至100 ml量瓶，流動相定容至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品約0.5 g，精密稱定，置入具塞錐形瓶，精密加入流動相 40 ml，超聲5 min，至軟膏在溶液中分散均勻。3000 r/min離心5 min，取上清，0.45 μm濾膜過濾，精密量取續濾液2 ml至10 ml量瓶，流動相定容至刻度，搖勻。

2.2.3 陰性對照液的制備 取爐甘石乳膏陰性對照約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項方法操作，制備陰性對照液。

2.3 方法學試驗

2.3.1 專屬性試驗 分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照液各50 μl，注入液相色譜儀，結果見圖1～3。結果表明，基質峰與溶劑均不干擾苯酚的測定。

圖1 對照品溶液HPLC圖譜

圖2 供試品溶液HPLC圖譜

圖3 陰性對照溶液HPLC圖譜

2.3.2 檢測限和定量限 精密稱取苯酚適量，甲醇溶解，加流動相定量稀釋成不同倍數的系列溶液，按2.1項色譜條件測定。測得苯酚的定量限為3.12 ng（S/N≈10），檢測限為0.94 ng（S/N≈3）。

2.3.3 溶液穩定性試驗 取對照品溶液和供試品溶液分別于0，2，4，6，8，12，18，24 h進樣，考察對照品溶液和供試品溶液的穩定性，結果表明，24 h內對照品和供試品溶液均穩定，峰面積的RSD分別為1.21 %和0.78 %。

2.3.4 線性試驗 分別精密移取2.2.1項下對照品貯備液1，2，2.5，3，5，6 ml至100 ml量瓶，流動相定容至刻度，搖勻，以濃度對峰面積做線性回歸，得回歸方程：A=43 439x-6628.8，r=0.9993。結果表明，苯酚濃度在2.058～12.348 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.3.5 精密度實驗 取2.2.1項下對照品溶液，連續進樣6次測定，計算苯酚的峰面積RSD為0.70 %，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復性實驗 取供試品（批號171101）約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，平行配制6份，分別取50 μl注入液相色譜儀，考察方法的重復性，計算含量RSD為1.02 %，表明方法重復性良好。

2.3.7 中間精密度實驗 取供試品（批號171101）約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項方法制備供試品溶液，平行配制6份，分別取50 μl注入液相色譜儀，外標法計算苯酚含量；取同一批號（批號171101）樣品約0.5 g，精密稱定，另一名分析員獨立建立系統，在不同儀器、不同日期進行含量測定研究。按2.2.2項下方法平行配制6份供試品溶液，分別取50 μl注入液相色譜儀，外標法計算苯酚含量。12次進樣結果的RSD為1.52 %，表明含量測定的中間精密度良好。

2.3.8 回收率試驗 取3份已知苯酚含量的爐甘石乳膏（批號171101），每份約0.5 g，精密稱定，每份分別精密加入含1 mg/ml的苯酚溶液0.8，1.0，1.2 ml，按2.2.2項方法制備供試品溶液，每個濃度平行制備3份溶液，按2.1項色譜條件測定苯酚含量，并計算加樣回收率。苯酚的平均回收率為100.2 %，RSD為0.98 %。

2.3.9 耐用性試驗 比較不同廠家的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（Agilent XDB 250 mm×4.6 mm，5 μm；Kromasil 250 mm×4.6 mm，5 μm；Alltima 250 mm×4.6 mm，5 μm），不同的色譜柱對苯酚含量測定沒有較大影響。微調流動相比例，不同柱溫（25，30，35 ℃），不同流速（0.8，1.0，1.2 ml/min），苯酚的保留時間略有變化，對苯酚含量測定沒有較大影響。乳膏超聲提取時間（2，5，8 min）不同，超聲提取時間為2 min，乳膏分散不均勻，苯酚不能從乳膏中充分提??；超聲提取時間為5 min和8 min，苯酚可達到充分提取，因此選擇超聲提取時間為5 min。

2.3.10 樣品測定 分別取自制樣品和原研產品，按2.2.2項方法制備供試品溶液，測得3批樣品中苯酚的含量分別為2.04，2.07，2.06 mg/g，原研產品的含量為2.02 mg/g，原研產品與自制樣品中苯酚含量相差不大，說明本測定方法準確可行。

3 討論

在爐甘石乳膏中加入苯酚可延長制劑使用的有效期限，保持制劑穩定，同時增強其殺菌、抑菌、止癢作用[4]，但有文獻報道苯酚濃度在0.5 %～1.5 %即會對皮膚黏膜有強烈刺激性及腐蝕性[5]，需對苯酚濃度進行監測，防止苯酚濃度過高對皮膚產生損害。苯酚含量的測定方法很多，2015版中國藥典中苯酚含量測定方法為滴定法，文獻報道有紫外分光光度法[6-7]、毛細管氣相色譜法[8]及HPLC[9-12]等。采用滴定法測定含苯酚制劑的含量，操作復雜、花費時間長，不易判斷終點顏色變化；爐甘石乳膏基質成分復雜，毛細管氣相色譜法不適合本品中苯酚的含量測定。我們采用HPLC測定乳膏中苯酚的含量，方法準確、簡單。

根據苯酚的特性，我們采用流動相溶液經超聲提取乳膏中的苯酚，超聲使乳膏均勻分散，苯酚溶解在甲醇-水溶液中。本法操作簡便、快捷，準確性高、重復性好，基質對苯酚含量測定無干擾。因此，可作為爐甘石乳膏中苯酚含量測定的方法。