自制與原研消旋卡多曲顆粒體外溶出度的對比研究

王 芳，宋 莉，郭 琪，于 亮，劉玉黔，梁大連**

（1. 山東省藥學科學院 山東省化學藥物重點實驗室，山東 濟南 250101；2. 青島市婦女兒童醫院，山東 青島266071）

消旋卡多曲（thiorphan，結構式見圖1）是由法國Bioprojet公司開發的一種特異性的腦啡肽酶抑制劑，可延長內源性腦啡肽的抗分泌作用[1]，是目前唯一的抗分泌藥。臨床作為口服補液或靜脈補液的輔助治療，用于1月以上嬰兒和兒童的急性腹瀉[2]。

目前，消旋卡多曲顆粒已過專利保護期。在國內，有2家藥廠生產，2015年版中國藥典增加了該制劑的質量標準。對比該品種2015年版中國藥典中的溶出度執行標準和進口藥品注冊標準JX20070085的溶出條件[3]發現，2015年版中國藥典的溶出度執行標準中的色譜條件與有關物質的測定條件相同，均為梯度，而進口藥品注冊標準JX20070085中的溶出度測定的色譜條件與含量測定的條件相同為等度，通過試驗發現HPLC測定本品的溶出度時，只有主成分，沒有干擾峰，且主藥消旋卡多曲出峰時間較短，因此進口藥品注冊標準JX20070085中的溶出度測定的色譜條件較簡單合理。本研究根據“消旋卡多曲散進口藥品注冊標準JX20070085”中溶出度的測定方法結合自研制劑的性質優化其溶出條件，以法國Bioprojet公司生產的Tiorfan?作為原研制劑，采用適合本品種的4 種溶出條件進行試驗研究，考察自制與原研制劑樣品在4 種不同溶出介質：2 % SDS水溶液、0.2 mol/L鹽酸溶液（pH 1.2）、pH 4.5和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中溶出曲線的一致性，為研發出與原研藥質量一致性的仿制藥及后續該品種的一致性評價奠定基礎。

圖1 消旋卡多曲的化學結構式

1 儀器與材料

METTLER AE240電子天平，LC-10T 高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司），ZRS-4 智能溶出儀（天津大學無線電廠）。

消旋卡多曲對照品（批號Y0000896，EP），自制品（規格10 mg，批號F20140102）， Tiorfan?（規格10 mg，批號SXN300，法國Bioprojet公司），市售消旋卡多曲顆粒（規格10 mg，批號120911，四川百利藥業）。磷酸二氫鉀、十二烷基硫酸鈉、磷酸氫二鉀、（國藥集團化學試劑有限公司）、鹽酸（天津大茂化學制劑廠），純凈水（杭州娃哈哈公司），甲醇（山東禹王），乙腈（美國Fisher 公司）。

2 溶出度測定方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo BDS C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：水-乙腈-甲醇（體積比40:38:22）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：231 nm；進樣量：20 μl；柱溫：30 ℃。

2.2 溶液配制

對照溶液：精密稱取消旋卡多曲對照品25.23 mg，置入25 ml量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置入100 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，得對照溶液。

供試品溶液：量取經脫氣處理的溶出介質2.0 % SDS 1000 ml，置溶出杯內，開啟溶出儀使槳板轉速穩定在75 r/min，待溶出介質溫度恒定在（37±0.5）℃后，取供試品1袋，投入溶出杯內，記時；在60 min取溶液濾過，取續濾液作為供試品溶液。

空白輔料溶液：取除消旋卡多曲以外處方量的其他輔料，按消旋卡多曲制備工藝制成不含消旋卡多曲的陰性制劑。同供試溶液制備項下操作，得空白輔料溶液。

2.3 溶出度測定法

取樣品12袋，采用溶出度測定法（中國藥典2015 年版四部溶出度與釋放度測定）第二法（槳法）的裝置，以水1000 ml （含2 % SDS）為溶出介質，轉速為75 r/min，依法操作，分別在5，10，15，20，30，45 和60 min取溶液10 ml，同時補液10 ml，濾過，續濾液作為供試品溶液。另取“2.2”項下的對照品溶液。分別精密量取供試品溶液與對照品溶液20 μl注入色譜儀，記錄色譜圖。計算每袋在不同時間的累計溶出量。

3 方法與結果

3.1 溶出度測定驗證（溶出介質：2.0% SDS水溶液）

圖2 消旋卡多曲的HPLC 色譜圖

3.1.1 專屬性考察 分別取溶出介質、2.2項下的空白輔料溶液、對照溶液和供試溶液各20 μl注入液相色譜儀，在2.1項色譜條件下進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，輔料和溶出介質對消旋卡多曲出峰無干擾。結果見圖2。

3.1.2 線性與范圍 精密稱取消旋卡多曲對照品25.23 mg，置入25 ml量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；然后精密移取1 ml置入10 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，作為貯備液；分別精密移取貯備液0.1，0.25，0.5，0.7，1.0，1.2 ml置入10 ml量瓶，用溶出介質稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取20 μl注入液相色譜儀，分別在2.1項色譜條件下進樣分析，記錄色譜圖。以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：A=13.628C+2.6515，相關系數r=0.9999，結果表明，消旋卡多曲對照品在1.01～12.11 mg/L濃度范圍內呈良好線性關系。

3.1.3 重復性試驗 取2.2項下的消旋卡多曲對照溶液，在2.1項色譜條件下連續進樣6 次，測得消旋卡多曲峰面積RSD為1.6 %（n= 6），結果表明，色譜系統重復性良好。

3.1.4 中間精密度試驗 取自研制劑（批號：F20140102）6袋，改變分析設備，按2.3項下溶出度測定法操作，60 min時取樣，濾過，精密量取各續濾液20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算溶出度RSD為1.5 %，表明本法中間精密度良好。

3.1.5 溶液穩定性試驗 取溶出條件下60 min溶出液，過濾后，取續濾液作為供試品溶液，在不同時間進樣，記錄色譜圖。另取2.2項下的對照品溶液進樣。結果見表1。由表1可見，本品溶出液在24 h內穩定。

表1 溶液穩定性試驗結果

3.1.6 準確度試驗 按處方量空白輔料9 份，分別精密加入消旋卡多曲對照品（5，7 和10 mg），依照2.2項下供試品溶液的處理方法制備各3 份樣品，在2.1項色譜條件下進樣分析，記錄峰面積，測得消旋卡多曲的平均回收率為100.3 %，RSD為0.7 %（n=9），結果表明，方法準確度良好。

3.1.7 色譜條件變化 取2.2項下的對照品溶液，在確定的色譜條件基礎上，考察分別改變流動相比例、流速、柱溫、檢測波長及色譜柱對測定的影響。結果見表2，由表2可知色譜條件有微小變化時，測定不受影響，表明此方法耐用性良好。

表2 色譜條件變化

3.2 市售及原研制劑溶出度比較

取市售消旋卡多曲顆粒及原研制劑，分別使用2015年版中國藥典標準、進口藥品注冊標準JX20070085和自研標準的溶出條件（見表3），按2.3項下溶出度測定法操作。結果見圖3，兩者在相同的溶出條件下溶出行為不相似（f2因子＜50）。

表3 消旋卡多曲顆粒溶出度檢查方法對比

圖3 市售制劑和原研制劑不同溶出度檢查方法的溶出曲線對比

3.3 溶出曲線測定和對比結果

3.3.1 自制與原研制劑對比 取自制和原研樣品各12袋，按2.3項下溶出度測定法操作，分別各樣品，在2.0 % SDS 、0.2 mol/L鹽酸溶液（pH 1.2）、pH 4.5和pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 ml 為溶出介質中的溶出曲線，按外標法以峰面積計算溶出質量濃度；根據各個時間點12 袋的平均累積釋放量（%）分別繪制自制和原研制劑的溶出曲線，見圖4。根據《普通口服固體制劑溶出度實驗技術指導原則》[4]，采用f2相似因子評價自制與原研制劑溶出曲線的相似性[5-10]，根據文獻[11]中相似因子f2的公式計算?自制和原研消旋卡多曲顆粒的f2值，結果見表4。由表4可見，在2 % SDS水溶液、0.2 mol/L鹽酸溶液（pH1.2）、pH 4.5和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液中，相似因子f2均在50～100 內，表明自制和原研消旋卡多曲顆粒在不同介質中的溶出行為一致。

圖4 自制消旋卡多曲顆粒和原研消旋卡多曲顆粒在4 種溶出介質中的溶出曲線

表4 自制和原研消旋卡多曲顆粒溶出曲線相似性分析結果

3.3.2 在不同溶出介質下溶出曲線對比 分別取原研及自制制劑，按2.3項下溶出度測定法操作，分別使用0.5 % SDS、1.0 % SDS、2.0 % SDS 3種不同溶出介質測定兩者的溶出曲線，并采用相似性f2因子法評價不同溶出介質下自制與原研制劑溶出曲線的相似性。結果見圖5。溶出介質為0.5 % SDS、1.0 %SDS、2.0 % SDS時，f2分別為66，68，76。表明不同溶出介質下自制與原研制劑的溶出行為相似（f2＞50）。但本品在0.5 %和1.0 % SDS中溶出過慢，區分能力不高，相比之下2.0 % SDS中溶出比較快，區分能力也比較強，與國外市售對照制劑溶出曲線的相似度較好。

3.3.3 在不同轉速下溶出曲線對比 分別取原研及自制制劑，按2.3項下溶出度測定法操作，分別使用50，75，100 r/min 3種不同轉速測定兩者的溶出曲線，并采用相似性f2因子法評價不同轉速下自制與原研制劑溶出曲線的相似性。結果見圖5。轉速為50，75，100 r/min時，f2分別為53，64，61。表明不同轉速下自制與原研制劑的溶出行為相似（f2＞50）。

圖5 自制與原研制劑不同溶出介質和轉速下溶出曲線對比

4 結論

本實驗對自研標準中的溶出條件的測定方法進行方法學驗證，結果表明，該方法專屬性、耐用性均良好，適合本品的溶出度測定。市售與原研制劑（Tiorfan?）無論用2015年版中國藥典標準、或進口藥品注冊標準JX20070085及自研標準測定，溶出曲線均不一致（f2＜50），兩者體內生物利用度不一致的概率也將高達90%[12]。自制與原研制劑樣品溶出曲線對比試驗研究可見，自制與原研制劑在4 種不同溶出介質中的溶出曲線相似，在不同轉速下也相似，提示自制與原研制劑體外溶出行為一致，表明自制制劑處方合理、樣品質量穩定可靠。依據新的藥品研發標準和要求，對自制制劑做了上述研究，結果表明，自制消旋卡多曲顆粒與原研制劑 “質量一致”。本試驗也為本品以后將要進行的一致性評價及人體生物等效性試驗提供了參考依據。