TNF—α啟動子基因多態性與子癇前期的相關分析

劉影林　龍峰　周璐　何云　黃燕　洪小蘋

【摘要】 目的：研究腫瘤壞死因子α（TNF-α）啟動子基因多態性與子癇前期的關系。方法：選取本院2014年9月-2017年9月期間收治的子癇前期患者156例作為研究組，另選取同期來本院產檢無并發癥的正常妊娠孕婦150例作為對照組，對兩組研究對象進行TNF-α啟動子基因檢測，分析TNF-α啟動子基因多態性與子癇前期的關系。結果：重度子癇前期患者血清TNF-α表達水平為（3.96±0.78）pg/mL

明顯高于輕度子癇前期的（3.22±0.71）pg/mL；輕度子癇前期患者血清TNF-α表達水平明顯高于對照組的（2.43±0.64）pg/mL，差異均有統計學意義（P<0.05）。研究組TNF-α-238啟動子基因型分布情況與對照組對比，差異均無統計學意（P>0.05）；研究組TNF-α-308啟動子GA和AA基因型分布率均明顯高于對照組，GG基因型分布率明顯低于照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。GG、GA+AA基因型在不同程度子癇前期患者中對比，差異均無統計學意義（P>0.05）。GA+AA基因型患者血清TNF-α表達水平為（4.31±0.46）pg/mL，明顯高于GG基因型的（3.25±0.63）pg/mL，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：TNF-α-308啟動子基因多態性可影響細胞因子的表達水平，可能參與了子癇前期的發病過程。

【關鍵詞】 TNF-α； 基因多態性； 子癇前期； 相關性

【Abstract】 Objective：To study the correlation of tumor necrosis factor α （TNF-α） promoter gene polymorphism and pre-eclampsia. Method：A total of 156 patients with pre-eclampsia treated from September 2014 to September 2017 in our hospital were selected as the study group. In addition，150 normal pregnant women without complications at the same period were selected as the control group.The TNF-α promoter gene was detected in two groups，and the relationship between TNF-α promoter polymorphism and pre-eclampsia was analyzed.

Result：The level of serum TNF-α expression in patients with severe pre-eclampsia was （3.96±0.78）pg/mL，which was significantly higher than （3.22±0.71）pg/mL in mild pre-eclampsia；the level of serum TNF-α expression in the patients with mild pre-eclampsia was significantly higher than （2.43±0.64）pg/mL in the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The TNF-α-238 promoter gene distribution rate in the study group was not significantly different from that in the control group （P>0.05）.The TNF-α-308 promoter GG and AA genotypes distribution rates in the study group were significantly higher than that in the control group；the GA genotype distribution rate was significantly lower than that in the control group，the differences were statistically significant （P<0.05）.There were no significant differences in GG，GA+AA genotype distribution rates in patients with different degree of pre-eclampsia（P>0.05）.The level of serum TNF-α expression in patients with GA+AA genotypes were （4.31±0.46）pg/mL，which was significantly higher than （3.25±0.63）pg/mL in patients with GG genotype，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The TNFα-308 promoter gene polymorphism will affect the level of cell factor expression and be involved into the genesis process of pre-eclampsia.

【Key words】 TNF-α； Gene polymorphism； Pre-eclampsia； Correlation

First-authors address：Shenzhen Maternity and Child Healthcare Hospital Affiliated to Southern Medical University，Shenzhen 518028，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.22.006

子癇前期（Pre-eclampsia，PE）是妊娠期特有的一種病癥，屬于妊娠期高血壓范疇，據報道PE的發病率為5%～10%，主要表現為妊娠期間一過性蛋白尿、高血壓、水腫等癥狀，妊娠終止后癥狀隨之消失，PE可引起嚴重的母胎并發癥，也是造成孕婦、圍產兒死亡的重要原因[1-3]。隨著近年來對子癇前期的不斷深入研究，雖然對子癇前期的發病機制尚未完全明確，但部分學者提出一些病因學說，如胎盤缺血缺氧學說、免疫學說、遺傳學說以及氧化應激學說等，從不同角度試圖去解釋子癇前期的發病原理[4]。目前認為子癇前期的發病機制極其復雜，是多種因素共同作用的結果，但遺傳因素是子癇前期發病的主要因素[5]。腫瘤壞死因子α（TNF-α）是一種炎性因子，目前認為TNF-α啟動子基因多態性及其編碼的蛋白表達水平與機體自身免疫遺傳疾病具有密切關系，參與了疾病的發生和發展[6]。多數學者認為TNF-α啟動子基因與子癇前期的發生和發展具有密切關系[7]。該研究對本院子癇前期患者進行研究，對比無并發癥正常孕婦，觀察TNF-α啟動子基因多態性與子癇前期的關系，進一步為臨床治療子癇前期提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年9月-2017年9月期間收治的子癇前期患者156例作為研究組。納入標準：（1）經檢查和診斷均符合子癇前期診斷標準[8]；（2）均自愿參加本次研究并簽署知情同意書；（3）年齡20～40歲的育齡產婦；（4）均為初婚初孕的單胎產婦。排除標準：（1）合并其他妊娠疾病影響研究；（2）不愿參加研究；（3）有輸血史；（4）少數民族。另選取同期來本院產檢無并發癥的正常妊娠孕婦150例作為對照組。該研究已經本院醫學倫理委員會批準通過。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 研究中的血液樣本是在孕婦孕晩期（妊娠第28～40周）產檢時所采集，抽取研究對象外周血4 mL。其中2 mL注入干燥管，室溫下放置20 min后采用離心機旋轉離心（3 000 r/min），

10 min后取上層血清置入-80 ℃的冰箱中備用。剩余2 mL血液注入EDTA抗凝管，放置于-80 ℃冰箱中備用。

1.2.2 檢測方法 （1）TNF-α-238、TNF-α-308位點基因多態性檢測：采用多聚酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析法分析TNFα啟動子基因多態性。TNF-α-238上游引物：5-CAAACACAGGCCTCAGGA-3；下游引物：5-GGGCGGGGAAAGAATCATTC-3；擴增產物長度456 bp，限制性內切酶為BamH I。TNFα-308上游引物：5-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3；下游引物：5-TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3；擴增產物長度107 bp，限制性內切酶為Ncol I。

（2）TNF-α血清表達水平檢測：采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測研究對象TNF-α血清表達水平，采用由北京博邁杰科技有限公司提供的試劑盒及相關試劑，嚴格按試劑盒操作說明書進行操作。

1.3 觀察指標 觀察兩組血清TNF-α表達水平，分析不同程度子癇前期患者血清TNF-α表達水平情況。觀察兩組TNF-α啟動子基因多態性情況，分析不同程度子癇前期患者TNF-α啟動子基因多態性情況，探討TNF-α啟動子基因多態性與子癇前期的關系。

1.4 統計學處理 采用SPSS 18.0軟件，對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗；采用Pearson相關性分析計算相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的基線資料對比 研究組年齡21～38歲，平均（28.4±4.2）歲；疾病程度：輕度子癇前期72例，重度子癇前期84例。對照組年齡20～38歲，平均（28.2±4.1）歲。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 不同程度子癇前期患者血清TNF-α表達水平對比 重度子癇前期患者血清TNF-α表達水平為（3.96±0.78）pg/mL，明顯高于輕度子癇前期的（3.22±0.71）pg/mL；輕度子癇前期患者血清TNF-α表達水平明顯高于對照組的（2.43±0.64）pg/mL，差異均有統計學意義（P<0.05）。

2.3 兩組TNF-α啟動子基因型分布情況對比 研究組TNF-α-238啟動子基因型分布情況與對照組對比，差異均無統計學意（P>0.05）；研究組TNF-α-308啟動子GA和AA基因型分布率均明顯高于對照組，GG基因型分布率明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.4 不同程度子癇前期患者TNF-α-308基因型分布情況對比 GG、GA+AA基因型在不同程度子癇前期患者中對比，差異均無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.5 不同基因型子癇前期患者血清TNF-α表達水平對比 GA+AA基因型患者血清TNF-α表達水平為（4.31±0.46）pg/mL，明顯高于GG基因型的（3.25±0.63）pg/mL，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

子癇前期是婦產科較為常見的疾病，發生于妊娠期的特殊疾病之一，個體的遺傳、免疫因素決定著疾病的發生和發展[9]。目前子癇前期具有家族遺傳傾向已經得到臨床專家學者的認可。隨著免疫學和遺傳學的不斷發展進步，目前對子癇前期疾病的探索已經發展至基因層次，為探討子癇前期遺傳、免疫學的發病機制提供了新的思路和方案，通過對基因多態性和免疫學關系的研究，可使筆者從基因水平上認識子癇前期的發病機制，為治療子癇前期提供新的依據[10-11]。人類TNF-α基因在第六號染色體的短臂上（6p21.3），人類白細胞抗原（HLA）Ⅲ區域內，與HLA基因連鎖。在TNF-α啟動子區域存在高度多態性，目前多數研究發現TNF-α啟動子-308位點基因多態性與多種免疫疾病有密切關系[12-13]。如系統性紅斑狼瘡、乙型肝炎、Gracess眼病、再生障礙性貧血等。研究還發現，TNF-α-308A是免疫性疾病的易感基因，而TNF-α-308G則是免疫性疾病的保護基因。

TNF-α-238、TNF-α-308位點存在3種基因型，包括GG、GA以及AA。該研究對本院子癇前期患者進行研究，發現子癇前期患者以及正常孕婦均存在3種基因型的表達。兩組研究對象TNF-α-238位點基因型分布頻率對比，差異無統計學意義（P>0.05），提示TNF-α-238位點基因對子癇前期的發生無明顯影響。研究組患者TNF-α-308GA和AA型的分布頻率均明顯高于正常對照組，而研究組TNF-α-308GG型的分布頻率明顯低于正常對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），結果表明TNF-α-308GA和AA陽性者的子癇前期發病率明顯較高，而TNF-α-308GG陽性者的子癇前期發病率明顯降低。提示TNF-α-308GA和AA可能是子癇前期的易感基因，而TNF-α-308GG可能是子癇前期的保護基因。上述研究結果提示TNF-α-308位點基因與子癇前期的發生發展具有一定關系，可能機制為：（1）TNF-α-308位點存在于人第六號染色體短臂上，在HLA Ⅲ類基因內，TNF-α-308A與DRB1*0301存在連鎖不平衡[14-15]。（2）TNF-α自身基因多態性可能會影響細胞因子的表達，使TNF-α水平升高，增加滋養細胞的凋亡，對內皮細胞產生毒素，使內皮細胞損傷，凝血因子釋放，引起子癇前期的發生[16]。在本文中還對不同程度的子癇前期患者進行對比，分析不同程度子癇前期患者TNF-α-308基因型分布頻率情況，結果顯示，TNF-α-308GA+AA和TNF-α-308GG基因型分布頻率在輕度子癇前期和重度子癇前期患者中對比，差異均無統計學意義（P>0.05），提示TNF-α-308GA+AA和TNF-α-308GG僅與子癇前期的發生有關，與子癇前期的發展并無關系。子癇前期是由于各種因素綜合作用的結果，除了遺傳因素最為重要以外，還包括免疫、血管內皮損傷、營養等因素[17]。遺傳因素在子癇前期的發展中起到根本性作用，但子癇前期病情的嚴重程度卻受到多種因素的影響，決定性因素尚未明確，需要進一步深入研究[18]。

在個體中細胞因子的功能是由基因所決定的，而細胞因子在不同個體中的差異性是由細胞因子調節區多態性所決定[19]。在本文研究中，TNF-α-308位點基因（GA+AA）型的表達水平明顯高于GG型表達水平，可見TNFα-308位點基因編碼的細胞因子與TNF-α的血清表達水平有關。TNF-α-308多態性與血清學表達的機制尚未完全明確，但可能與下列原因有關：（1）TNF-α基因型與HLA Ⅲ區域位點連鎖，HLA多態性突變會影響TNF-α的分泌[20]。（2）TNF-α在轉錄后表達，受到多態性的調控，從而改變DNA二級結構，影響轉錄因子的結合[21]。在本研究中，重度子癇前期患者TNF-α表達水平明顯高于輕度子癇前期的TNF-α水平，提示TNF-α表達水平與子癇前期的發展有密切關系?？赡苁怯捎赥NF-α是子癇前期發病過程中的重要因子，病情越嚴重，對免疫功能損傷越嚴重，伴有免疫反應，導致TNF-α水平增加[22]。

綜上所述，TNF-α-308啟動子基因多態性可影響細胞因子的表達水平，可能參與了子癇前期的發病過程。

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（收稿日期：2018-04-19） （本文編輯：李瑩瑩）