馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中有關物質的測定及雜質定性研究

劉荷英 程奇珍 周敏 易巧

摘 要 目的：建立測定馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中有關物質的方法，并對其雜質進行定性。方法：采用高效液相色譜法測定有關物質的含量，色譜柱為ACES C18，流動相為甲醇與4.32 g/L辛烷磺酸鈉溶液（冰醋酸調pH至3.0）的混合溶液（50 ∶ 50，V/V）-甲醇（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測波長為295 nm，柱溫為30 ℃，進樣量為20 μL。采用制備液相色譜法制備雜質純品，色譜柱為YMC-PACK ODS-A，流動相為甲醇-0.01%三氟乙酸（40 ∶ 60，V/V）和甲醇-0.01%三氟乙酸（20 ∶ 80，V/V），流速為8 mL/min，檢測波長為295 nm，柱溫為20 ℃，進樣量為0.8 mL。采用液相色譜串聯質譜法進行結構推測，色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH C18，流動相為甲醇-5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.05%甲酸）（梯度洗脫），流速為0.2 mL/min，柱溫為20 ℃，進樣量為2 μL；采用電噴霧離子源，以質譜全掃描模式檢測母離子，以子離子掃描模式檢測碎片離子。采用氫譜、碳譜進行結構確證和推測。結果：馬來酸噻嗎洛爾檢測質量濃度線性范圍為0.501～10.02 μg/mL（r=0.999 9）；定量限為3.012 ng，檢出限為1.004 ng；精密度試驗的RSD為0.2%，穩定性和重復性試驗的RSD均小于5%。確證了雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的結構，并推測了雜質Ⅳ和Ⅴ的結構。結論：該方法快速、準確、專屬性好，可用于馬來酸噻嗎洛爾滴眼液的質量控制。

關鍵詞 馬來酸噻嗎洛爾；有關物質；降解雜質；高效液相色譜法；制備液相色譜；液相色譜串聯質譜法；氫譜；碳譜；測定；結構推測

中圖分類號 R927.1 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）16-2208-07

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the determination of related substances in Timolol maleate eye drops， and to conduct qualitative analysis of its degradation impurities. METHODS： HPLC method was adopted for determination of related substance. The determination was performed on ACES C18 column with mobile phase consisted of the mixed solution of methanol and 4.32 g/L sodium octane sulfonate （pH adjusted to 3.0 with glacial acetic acid）（50 ∶ 50，V/V）-methanol （gradient elution） at flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 295 nm， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 20 μL. Preparative LC method was used to prepare pure impurities. The determination was performed on YMC-PACK ODS-A column with mobile phase consisted of methanol-0.01% trifluoroacetic acid （40 ∶ 60，V/V） and methanol-0.01% trifluoroacetic acid （20 ∶ 80，V/V） at flow rate of 8 mL/min. The detection wavelength was set at 295 nm， and column temperature was 20 ℃. The sample size was 0.8 mL. LC-MS/MS method was adopted. The determination was performed on Waters ACQUITY UPLC BEH C18 column with mobile phase consisted of methanol-5 mmol/L ammonium formate （0.05% formic acid） （gradient elution） at flow rate of 0.2 mL/min. The column temperature was 20 ℃. The sample size was 2 μL. The electrospray ionization source was conducted， detecting patient ion by MS full scan and fragment ion by daughter ion scan. The structure was confirmed and speculated by 1H-NMR and 13C-NMR. RESULTS： The linear range of timolol maleate was 0.501-10.02 μg/mL （r=0.999 9）. The limit of quantitation was 3.012 ng， and the limit of detection was 1.004 ng. RSD of precision test was 0.2%. RSDs of stability and reproducibility tests were all lower than 5%. The structures of impurityⅠ， Ⅱ and Ⅲ were confirmed， and those of impurity Ⅳ and Ⅴ were speculated. CONCLUSIONS： The method is rapid， accurate and specific. It can be used for the determination of related substance in Timolol maleate eye drops.

KEYWORDS Timolol maleate； Related substance； Degradation impurity； HPLC； Preparative LC； LC-MS/MS； 1H-NMR； 13C-NMR； Determination； Structure speculation

馬來酸噻嗎洛爾滴眼液是治療原發性開角型青光眼及無晶狀體眼性青光眼的藥物。該滴眼液及其原料藥的現行標準均收載于2015年版《中國藥典》（二部）[1]，滴眼液標準中無有關物質檢查項，原料藥標準中采用薄層色譜法控制有關物質，而該方法靈敏度和專屬性均較差。2017年版《英國藥典》[2]中馬來酸噻嗎洛爾滴眼液及其原料藥標準均設置了有關物質檢查項，以高效液相色譜法（HPLC）測定雜質B、C、D、E、F和其他雜質，并收載了雜質A、B、C、D、E、F、G、H、I、J的結構?！睹绹幍洹罚?0版）[3]中僅對馬來酸噻嗎洛爾原料藥標準設置了有關物質檢查項，也以HPLC法測定雜質B、C、D、E、F和其他雜質，但色譜條件與2017年版《英國藥典》[2]不同?！度毡舅幍洹罚?7版）[4]中僅收載了馬來酸噻嗎洛爾原料藥標準，該標準采用HPLC法，以主成分自身對照法計算單個雜質和總雜質的含量?！稓W洲藥典》（9.0版）[5] 中僅收載了馬來酸噻嗎洛爾原料藥標準，其有關物質測定方法與2017年版《英國藥典》[2]完全一致。目前，國內外有關文獻[6-10]報道的馬來酸噻嗎洛爾滴眼液或原料藥中有關物質的測定方法均為HPLC法。有研究將系統適用性試驗中通過堿破壞后的樣品與《歐洲藥典》（9.0版）[5]對比以確定雜質B、D、G[6]；另有研究采用HPLC法測定了馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中主成分和3個可能的降解雜質（其結構與雜質B、D、G結構一致）[10]。此外，未見其他有關馬來酸噻嗎洛爾降解雜質的報道。有研究認為，馬來酸噻嗎洛爾進入人體后，噻嗎洛爾嗎啉環上的碳原子首先被羥化，而后進一步代謝為噻嗎洛爾乙醇胺[11]。目前，國內企業生產的馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中添加的抑菌劑有4種，分別為羥苯乙酯、苯扎溴銨、硫柳汞和醋酸苯汞[12]，有關物質測定時需排除抑菌劑的色譜峰干擾。本課題組參考2017年版《英國藥典》[2]馬來酸噻嗎洛爾原料藥標準中有關物質測定的色譜條件，建立了馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中有關物質的測定方法，同時通過強制降解試驗考察了馬來酸噻嗎洛爾滴眼液中的主要降解雜質，并以液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）、氫譜（1H-NMR）、碳譜（13C-NMR）對雜質的結構進行了確證或推測，旨在為其質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

U3000型HPLC儀，包括U3000四元泵、U3000柱溫箱、U3000二極管陣列檢測器（DAD）等（美國戴安公司）； LC-6AD型LC儀，包括LC-6AD二元泵、SIL-20A自動進樣器、CTO-20A柱溫箱、SPD-M20A DAD、FRC-10A餾分收集器（日本島津公司）；Xevo TQ-S型液相色譜-串聯三重四級桿質譜儀，包括Acquity UPLC自動進樣器、Acquity UPLC 四元泵、Acquity UPLC 柱溫箱、Acquity UPLC DAD（美國沃特世公司）；Bruker 600 MHz核磁共振譜儀（德國布魯克公司）；MS105型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 藥品與試劑

馬來酸噻嗎洛爾滴眼液[武漢五景藥業有限公司，批號：16050101、16040105、16040106，規格：5 mL ∶ 25 mg（按噻嗎洛爾計）]；馬來酸噻嗎洛爾原料藥（武漢五景藥業有限公司，批號：150207，純度：>99%）；噻嗎洛爾系統適用性對照品（《歐洲藥典》（9.0版），歐洲藥品質量管理局，ID：001EI2，規格：5 mg/支，含馬來酸噻嗎洛爾和雜質B、C、D、F的混合物）；辛烷磺酸鈉（離子對色譜用試劑，北京百靈威科技有限公司）；甲醇、甲酸、三氟乙酸、甲酸銨均為色譜純，冰醋酸等其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 有關物質測定的HPLC色譜條件

色譜柱：ACES C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇與4.32 g/L辛烷磺酸鈉溶液（冰醋酸調pH至3.0）的混合溶液（50 ∶ 50，V/V）（A）-甲醇（B），梯度洗脫（0～14 min，97.5% A；14～15.5 min，97.5% A→70% A；15.5～25 min，70% A；25～25.5 min，70% A→97.5% A；25.5～32 min，97.5% A）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：295 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 制備雜質純品的LC色譜條件

色譜柱：YMC-PACK ODS-A（250 mm×20 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.01%三氟乙酸溶液（40 ∶ 60，V/V）（流動相①）和甲醇-0.01%三氟乙酸溶液（20 ∶ 80，V/V）（流動相②）；流速：8 mL/min；檢測波長：295 nm；柱溫：20 ℃；進樣量：0.8 mL。

2.3 雜質結構推測的LC-MS/MS條件

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：甲醇（A）-5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.05%甲酸）（B），梯度洗脫（0～5 min，20% A→35% A；5～8 min，35% A→60% A；8～8.1 min，60% A→20% A；8.1～11 min，20% A）；流速：0.2 mL/min；柱溫：20 ℃；進樣量：2 μL。

2.3.2 質譜條件 離子源：電噴霧離子源（ESI）/大氣壓化學離子源（APCI），正離子化（ESI+）；去溶劑溫度：400 ℃；干燥氣流量：8 L/h；毛細管電壓：1.5 kV；錐孔電壓：40 V；母離子掃描模式：質譜全掃描模式檢測母離子，掃描范圍：m/z 100～1 000；碰撞能量：30 V；子離子掃描模式：子離子掃描模式檢測碎片離子，掃描范圍根據母離子質荷比而定。

2.4 溶液的制備

2.4.1 供試品溶液 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品適量，加水稀釋制成每1 mL中含馬來酸噻嗎洛爾2.5 mg的溶液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4.2 自身對照溶液 精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 空白輔料溶液 按馬來酸噻嗎洛爾滴眼的制備工藝制備不含馬來酸噻嗎洛爾的陰性樣品，取適量按“2.4.1”項下方法制備空白輔料溶液。

2.4.4 系統適用性溶液 取噻嗎洛爾系統適用性對照品1支，精密加入“2.1”項下流動相（A）2 mL溶解，搖勻，即得。

2.5 系統適用性試驗

分別量取“2.4”項下供試品溶液、自身對照溶液、空白輔料溶液、系統適用性溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，雜質峰之間、主成分與雜質峰之間均能達到基線分離，分離度均大于1.5，空白輔料對測定無干擾。

2.6 強制降解試驗

2.6.1 堿破壞 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品和陰性樣品各5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加2 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，置于100 ℃水浴上加熱1 h，放冷后加2 mol/L鹽酸溶液2 mL中和，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2A、圖2B。

2.6.2 氧化破壞 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品和陰性樣品各5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加30%過氧化氫溶液2 mL，室溫放置1 h，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2C、圖2D。

2.6.3 酸破壞 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品和陰性樣品各5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加2 mol/L鹽酸溶液2 mL，置于100 ℃水浴上加熱1 h，放冷后加2 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL中和，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2E、圖2F。

2.6.4 光照破壞 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品和陰性樣品各5 mL，分別置于10 mL量瓶中，于4 500 lx紫外燈下照射24 h，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2G、圖2H。

2.6.5 高溫破壞 精密量取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品和陰性樣品各5 mL，分別置于10 mL量瓶中，置于100 ℃水浴上加熱1 h，放冷后加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖2I、圖2J。

由圖2可知，馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品在堿破壞條件下可降解出雜質Ⅰ和雜質Ⅱ，相對于噻嗎洛爾峰的保留時間分別為0.24和0.63；在氧化破壞條件下降解出雜質Ⅲ和雜質Ⅳ，相對于噻嗎洛爾峰的保留時間分別為0.11和0.32；在酸破壞條件下主要降解出雜質Ⅴ，相對于噻嗎洛爾峰的保留時間為0.50；在光照和高溫破壞條件下均降解出雜質Ⅱ和雜質Ⅲ。陰性樣品經上述破壞后均發生降解，但其降解產物的色譜峰不干擾雜質Ⅰ～Ⅴ的測定。

2.7 線性關系考察

精密稱取馬來酸噻嗎洛爾原料藥10.02 mg，置于100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mL，置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度分別為0.501、1.002、2.505、5.010、10.02 μg/mL的線性關系考察系列溶液。精密量取上述線性關系考察系列溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以馬來酸噻嗎洛爾質量濃度（x，μg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為y=0.388x-0.002（r=0.999 9）。結果表明，馬來酸噻嗎洛爾檢測質量濃度線性范圍為0.501～10.02 μg/mL。

2.8 定量限與檢出限考察

精密稱取馬來酸噻嗎洛爾原料藥25.10 mg，置于10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3、1 mL，置于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得馬來酸噻嗎洛爾質量濃度分別為150.60、50.20 ng/mL的溶液。分別量取上述溶液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算定量限（信噪比為10 ∶ 1）、檢出限（信噪比為3 ∶ 1）。結果，馬來酸噻嗎洛爾的定量限為3.012 ng，檢出限為1.004 ng。

2.9 精密度試驗

取“2.4.2”項下自身對照溶液（批號：16050101）20 μL，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，馬來酸噻嗎洛爾峰面積的RSD為0.2%（n=6），表明本方法精密度良好。

2.10 穩定性試驗

取“2.4.1”項下供試品溶液（批號：16050101）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、10、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，雜質Ⅱ、雜質Ⅲ、其他雜質1、其他雜質2峰面積的RSD分別為2.8%、2.1%、3.6%、2.9%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內基本穩定。

2.11 重復性試驗

取馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品（批號：16050101）適量，按“2.4.1”和“2.4.2”項下方法分別制備供試品溶液和對照溶液，各6份，分別精密量取兩種溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并按不加校正因子的主成分自身對照法計算樣品中各雜質的含量。結果，雜質Ⅱ、雜質Ⅲ、其他雜質1、其他雜質2的平均含量分別為0.02%、0.05%、0.01%、0.03%，峰面積的RSD分別為3.4%、3.0%、4.8%、3.8%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.12 樣品有關物質測定

取3批馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品各適量，按“2.4.1”和“2.4.2”項下方法分別制備供試品溶液和對照溶液，各3份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并按不加校正因子的主成分自身對照法計算樣品中各雜質的含量，結果見表1。

2.13 雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的結構確證

取馬來酸噻嗎洛爾原料藥0.1 g，置于10 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，置于100 ℃水浴上加熱6 h，放冷后加1 mol/L鹽酸溶液1 mL中和，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，得濾液①（續濾液）。量取濾液①0.8 mL，按“2.2”項下色譜條件進樣，采用流動相①進行分離，分別收集雜質Ⅰ、Ⅱ的流出液。取馬來酸噻嗎洛爾原料藥0.1 g，置于10 mL量瓶中，加30%過氧化氫溶液1 mL，室溫放置4 h，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，得濾液②（續濾液）。量取濾液② 0.8 mL，按“2.2”項下色譜條件進樣，采用流動相②進行分離，收集雜質Ⅲ的流出液。將雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的流出液分別于40 ℃水浴上旋轉蒸發至干，殘渣加少量水復溶，凍干，得雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的純品。采用 LC-MS/MS法對雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的結構進行初步推測（分別取雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的純品適量，加水溶解，制成雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ質量濃度均為1 μg/mL的溶液，按“2.3”項下色譜與質譜條件進樣分析，得質譜掃描的母離子和子離子信息），并采用1H-NMR和13C-NMR對雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的結構進行確證（溶劑為氘代二甲基亞砜），結果見表2。

2.14 雜質Ⅳ的結構推測

筆者在試驗中發現，雜質Ⅳ不穩定，在制備純品過程中極易發生降解，很難制備其純品，因此僅通過LC-MS/MS法進行結構推測。精密量取“2.6.3”項下經氧化破壞的馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液2 μL，按“2.3”項下色譜與質譜條件進樣分析（為避免污染離子源，通過閥切換將0～1.2 min、2.8～4.6 min的樣品溶液切換到廢液，不進MS儀），根據各色譜峰的DAD光譜圖判斷雜質Ⅳ的峰位（色譜圖見圖3，總離子流圖見圖4）。雜質Ⅳ在該LC-MS/MS條件下分裂為兩個峰，兩個峰的DAD光譜圖與一級質譜以及二級質譜圖完全相同（雜質Ⅳ的DAD光譜圖見圖5，全掃描質譜圖見圖6，子離子掃描質譜圖見圖7），推測兩個峰為旋光異構體。由圖6、圖7可知，雜質Ⅳ的母離子為m/z 333.4，推測為[M+H]+峰；子離子分別為m/z 260.1、214.2、173.2、161.1、130.2、117.1、112.1、74.0，推測雜質Ⅳ為噻嗎洛爾噻唑環上的硫原子氧化產物，為l-（叔丁氨基）-3-[（4-嗎啉基-1，2，5-噻二唑-1-氧-3-基）氧]-2-丙醇。因其2位碳原子為手性原子，推測其質譜裂解途徑見圖8。

2.15 雜質Ⅴ的結構推測

由于雜質Ⅴ含量較低，試驗中發現對酸破壞條件進行優化后仍無法提高其含量，很難制備其純品，因此僅通過LC-MS/MS法進行結構推測。同時，馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品經酸破壞后，輔料羥苯乙酯峰與雜質Ⅴ峰保留時間相近，為避免干擾，用原料藥進行酸破壞后分析。稱取馬來酸噻嗎洛爾原料藥約10 mg，置于10 mL量瓶中，加2 mol/L鹽酸溶液2 mL，置于100 ℃水浴上加熱1 h，放冷后加2 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL中和，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣，結果原料藥經酸破壞后產生的主要雜質峰與馬來酸噻嗎洛爾滴眼液樣品經酸破壞后產生的主要雜質峰的保留時間和DAD光譜圖一致，均為雜質Ⅴ。再量取上述續濾液2 μL，按“2.3”項下色譜與質譜條件進樣分析（為避免污染離子源，通過閥切換將0～1.5 min、4.0～9.0 min的樣品溶液切換到廢液，不進MS儀），根據各色譜峰的DAD光譜圖判斷雜質Ⅴ的峰位和推測結構（色譜圖見圖9，總離子流圖見圖10，雜質Ⅴ的DAD光譜圖見圖11，全掃描質譜圖見圖12，子離子掃描質譜圖見圖13）。由圖12、圖13可知，雜質Ⅴ的母離子為m/z 313.4，子離子分別為m/z 184.1、152.1、130.2、74.1，推測雜質Ⅴ為噻嗎洛爾嗎啉環脫氫產物，可能為1-（叔丁基氨基）-3-{[4-（4H-1，4-噁嗪-4-基）-1，2，5-噻二唑-3-基]氧}-2-丙醇，推測其質譜裂解途徑見圖14。

3 討論

國外僅有1篇文獻報道了噻嗎洛爾的核磁數據[13]；雖然2017年版《英國藥典》[2]和《美國藥典》（40版）[3]中均收載了其多個已知雜質，但均無噻嗎洛爾降解雜質的核磁數據。本研究中，經1H-NMR和13C-NMR確證，堿破壞產生的雜質Ⅰ和Ⅱ結構分別與2017年版《英國藥典》[2]中的雜質B和D一致，雜質B化學名為3-[（1，1-二甲基乙基）氨基]-2-{[4-（嗎啉-4-基）-1，2，5-噻二唑-3-基]氧基}丙烷-1-醇，雜質D化學名為4-（嗎啉-4-基）-1，2，5-噻二唑-3-醇；氧化破壞產生的雜質Ⅲ結構與2017年版《英國藥典》[2]中的雜質G一致，化學名為4-（嗎啉-4-基）-1，2，5-噻二唑-3（2H）-1-氧化物。

對于樣品中含量較低或不穩定的雜質，可采用LC-MS/MS法進行結構推測，本研究即采用LC-MS/MS法推測了雜質Ⅳ、Ⅴ的結構。目前已有多篇文獻報道了LC-MS/MS法用于雜質的結構推測[14-16]，但該法僅通過質譜推測結果可能產生偏差。對于降解雜質的定性研究，一般可通過強制降解試驗來加速藥物降解，以提高降解雜質的含量，藥物經破壞后雜質含量若能達到20%以上，則易通過制備LC法來分離和純化雜質，得到雜質純品后可經核磁、紅外、紫外等方法進行結構確證，準確度較高。

馬來酸噻嗎洛爾滴眼液在氧化破壞、堿破壞、酸破壞條件下均可發生較明顯的降解，其中在氧化破壞和堿破壞條件下降解較快、降解率較高。馬來酸噻嗎洛爾氧化破壞時硫原子首先發生氧化破壞，生成雜質Ⅳ，后醚鍵水解生成雜質Ⅲ；堿破壞時易生成雜質Ⅰ，后醚鍵水解生成雜質Ⅱ；酸破壞時加熱后嗎啉環脫氫生成雜質Ⅴ。其中，雜質Ⅳ、Ⅴ均為未知雜質，且均為首次報道。

綜上所述，本方法快速、準確、專屬性好，可為馬來酸噻嗎洛爾滴眼液的質量控制提供參考。

參考文獻

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（收稿日期：2018-02-14 修回日期：2018-06-15）

（編輯：陳 宏）