甘草酸二鉀護理液皮膚修復作用的研究

施米麗，金家瑞，郭美仙，田佳麗，劉曉波

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甘草酸二鉀護理液皮膚修復作用的研究

施米麗，金家瑞，郭美仙，田佳麗，*劉曉波

（大理大學藥學與化學學院，云南，大理 671000）

研究甘草酸二鉀護理液及含甘草酸二鉀衛生巾對擦傷皮膚的修復作用。用SD大鼠，制造皮膚擦傷模型，將動物隨機分為陽性對照組、陰性對照組、甘草酸二鉀護理液高、中、低劑量組、甘草酸二鉀衛生巾組，一定時間后，檢測創面愈合率，通過HE染色觀察損傷皮膚組織病理學變化。造模后第7 d和第14 d護理液高、中劑量組和衛生巾組大鼠的皮膚愈合率和組織學評分與陰性組比較具有統計學意義（< 0.05）。甘草酸二鉀護理液及含甘草酸二鉀衛生巾具有促進皮膚修復的作用。

皮膚修復；護理液；HE染色

女性月經期由于子宮內膜脫落而產生創面，生殖道處于損傷狀態，抵抗力較差，由于行走摩擦等導致外陰道擦傷，如果衛生巾選擇不當，很容易造成病菌感染而引起婦科炎癥[1]。因此設計符合人體功能，并具有抗菌功能、無耐藥性、無毒副作用的衛生巾，尤其是開發具有外陰道修復功能的衛生巾產品是非常有必要的。

豆科植物甘草是最常用的中草藥之一，它是一種常用的中藥藥材，其主要活性成分是甘草酸和甘草次酸等。其中甘草酸具有一定的水溶性，其水溶液具有較好的光熱穩定性，能修復皮膚炎癥，因此被添加到一些修復護膚產品中[2]。研究發現低濃度的甘草酸能保護人皮膚成纖維細胞損傷。研究證明甘草酸還具有抗氧化、清除自由基的功效[3]。甘草酸已被廣泛應用于防曬、美白、養護型等護膚產品中。目前，臨床研究表明，甘草酸苷注射液具有治療皮膚修復的作用，但有關甘草酸二鉀治療皮膚修復作用的報道并不多。甘草酸二鉀為白色粉末，有高甜度、水溶性好、低熱能，起泡性、溶血作用較低，安全無毒等特點。同時，甘草酸二鉀具有消炎、抗潰瘍、抗氧化、抑菌、治療創傷、有效清超氧離子和羥基自由基的作用[4]。

根據甘草酸苷注射液皮膚修復的特性，甘草酸二鉀在皮膚修復方面有較大的潛在應用價值[5]。本研究制造皮膚損傷模型，通過檢測創面愈合率，HE染色觀察損傷皮膚組織病理學變化，評價含有甘草酸二鉀護理液及其含甘草酸二鉀衛生巾對皮膚修復作用，為其在具有修復作用的衛生巾方面的應用提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物

SD 大鼠（200~250 g，150只雌雄各半），由昆明楚商科技有限公司提供。

1.2 主要儀器

CHK2-F-GS顯微鏡（日本 OLYMPUS公司）；BX41圖像采集系統（日本OLYMPUS公司）；HK610脫毛器（利潔時家化（中國）有限公司）；HH-1508RIII石蠟切片機（杭州艾普儀器設備有限公司）。

1.3 藥品和試劑

重組牛堿性成纖維細胞生長因子凝膠（珠海億勝制藥有限公司，批號：S20040001）；甘草酸二鉀護理液、含甘草酸二鉀護理液衛生巾（云南白藥清逸堂實業有限公司，批號：2015100801）；生理鹽水（貴州天地藥業有限責任公司，批號：A15031602）；蘇木精（美國Sigma公司，批號：041M0014V）；伊紅（美國Sigma公司，批號：MKBS2614V）；磷酸氫二鉀(成都化學試劑產，批號：950608)；磷酸氫二鈉（北京化工廠，批號：850619）；水合氯醛（青島宇龍海藻有限公司，批號：20150412）；甲醛溶液（天津市福晨化學試劑廠，批號：20131007）。

2 方法

2.1 造模

用10 %的水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉，待大鼠麻醉后，用脫毛機背部脫毛4 cm×4 cm，常規消毒。在大鼠脫毛區造成皮膚損傷，各組大鼠均在背部相同位置處制造皮膚損傷模型，術后2 h正常飲食。

2.2 分組

動物隨機分成6組，陰性對照組（NS組）；陽性對照組（表皮生長因子EGF）；護理液高、中、低劑量組；護理液衛生巾組，每組25只，雌性各半。

2.3 給藥

分組后給大鼠涂藥，陽性對照組（給予表皮生長因子，涂抹均勻為止）；陰性對照組（給予0.9 mL的生理鹽水）；護理液衛生巾組（包扎4 cm×4 cm衛生巾）；護理液高劑量組（給予100%護理液1.8 mL）；護理液中劑量組（給予100%護理液0.9 mL）；護理液低劑量組（給予50%護理液0.9 mL）。給完藥之后用紗布包扎，5 h以后取下紗布，每天換一次藥。分別于1、5、7、14、35 d進行指標觀察取材。

2.4 取材

于造模后的1、5、7、14、35 d各組均處死5只大鼠，剪取4 cm×4 cm皮膚，投入到預先備好的10%福爾馬林中固定，供組織石蠟切片用。

3 指標檢測

3.1 創面愈合率

于造模后的（1、5、7、14、35 d）測量各組大鼠缺損處創面面積。根據公式計算：創面愈合率(%) = (最初創面面積－未愈創面面積) /最初創面面積 ×100%。

3.2 組織病理學觀察

常規 HE 染色切片在放大 200 倍光鏡下通過觀察：表皮再生、成纖維細胞、新生毛細血管、粒細胞浸潤數量。

3.3 組織病理學評分

標本常規石蠟包埋切片，切片厚度4 μm，行常規蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察HE 染色切片組織病理學變化（HP × 200），并參照 Eldad 等[6-7]所采用的方法，制定皮膚創面愈合的組織病理學評價標準，結果見表1。

表1 組織病理學評價標準

3.4 統計學方法

4 結果

4.1 創面愈合率

由表2可知，造模給藥后第1 d，大鼠陽性對照組的創面愈合率與陰性對照組相比較，具有明顯提高（＜0.05），其他各組較陰性對照組提高不明顯（＞0.05）。造模后第5 d，陽性對照組的創面愈合率與陰性對照組比較顯著提高（＜0.01），其他各組的愈合率比陰性對照組高但提高不明顯（＞0.05）。造模后第7 d，陽性對照組的創面愈合率與陰性對照組比較顯著提高(＜0.01)，衛生巾組和護理液高劑量組的創面愈合率與陰性對照組比較明顯增加(＜0.05)，護理液中、低劑量組的創面愈合率比陰性對照組低。造模后第14 d，陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組與陰性對照組的創面愈合率比較顯著增加(＜0.01)，護理液低劑量組與陰性對照組的創面愈合率比較明顯增加(＜0.05)，護理液中劑量組愈合率比陰性對照組高但增高不明顯（＞0.05）。造模后第35 d，陽性對照組愈合率達到100%，各組創面愈合率差不多，沒有明顯差異。以上結果顯示，護理液高劑量組和衛生巾組在給藥第7 d和第14 d后，具有很好的修復效果。

表2 造模后1、5、7、14、35 d各組創面愈合率( ± s，n = 5)

注：與陰性對照進行比較，*＜0.05**＜0.01。

4.2 組織病理學觀察

由表3和圖1可知，大鼠造模后第1 d，表皮幾乎沒有修復，無肉芽組織增生，各組病理學評分沒有差異性（＞0.05）；造模后第5 d，各組表皮薄，少量修復，成纖維細胞很少，有少許的新生毛細血管，有少許的中性粒細胞侵潤，各組病理學評分沒有差異性（＞0.05）；造模后第7 d，各組表皮部分修復，有較多的肉芽組織增生，有新生毛細血管和成纖維細胞，有中性粒細胞侵潤。陽性對照組，護理液高劑量組和中劑量組的組織病理學評分與陰性對照組比較明顯的增高且有顯著性差異（＜0.05＜0.01）。造模后第14 d，各組表皮大部分修復，有許多的新生毛細血管和成纖維細胞，中性粒細胞侵潤較少。陽性對照組，護理液高劑量組的組織病理學評分與陰性對照組比較明顯的增高且有顯著性差異（＜0.05）。造模后第35 d，各組表皮已經全部修復，只有少許的肉芽組織，各組病理學評分沒有差異性（＞0.05）。結果提示：造模1 d后，看不到皮膚修復征兆，藥物沒有效果。第5 d后，陽性藥、護理液衛生巾、護理液中劑量組和低劑量都有修復效果，但修復效果一般。第7 d后，各組皮膚修復得較好，陽性藥、護理液高劑量和低劑量都有修復效果，且修復效果很好。第14 d后，各組皮膚修復得較好，陽性藥、護理液高劑量都有很好的修復效果。第35 d后，各組皮膚基本已經全部修復。實驗結果顯示，護理液高劑量組和衛生巾組在給藥7 d和14 d后，有很好的修復效果。護理液低劑量組在給藥7 d，有很好的修復效果。

表3 造模后1、5、7、14、35 d各組組織學評分 (±s，n=5)

注：與陰性對照進行比較，*＜0.05**＜0.01

注：①—⑥為造模后第1 d的陰性對照組、陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組、護理液中劑量組、護理液低劑量組；⑦—?為造模后第5 d的陰性對照組、陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組、護理液中劑量組、護理液低劑量組；?—?為造模后第7 d的陰性對照組、陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組、護理液中劑量組、護理液低劑量組；?—為造模后第14 d的陰性對照組、陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組、護理液中劑量組、護理液低劑量組；—為造模后第35 d的陰性對照組、陽性對照組、衛生巾組、護理液高劑量組、護理液中劑量組、護理液低劑量組。

5 討論

皮膚修復是一個復雜的過程，主要是細胞的增殖與分化過程，包括各種組織的再生、肉芽組織增生和瘢痕形成等復雜的組合，表現出各種修復過程的協同作用[8-9]，其愈合的速度、質量與多種因素有關[10-11]。皮膚修復通常包括表皮細胞的再生、成纖維細胞增殖、新生血管的形成、粒細胞浸潤等綜合作用的結果[12-13]。

生物從受傷開始，即發生一系列的血管和細胞的變化，中性粒細胞是主要的炎性細胞，在創面愈合中最早出現，是機體防御作用的主要成分之一，它具有強大的吞噬能力，能吞噬細菌及細小的異物顆粒。中性粒細胞和巨噬細胞可相互活化，中性粒細胞顆粒分子能夠增強巨噬細胞的吞噬作用和抗菌能力，巨噬細胞分泌的細胞因子和趨化因子可活化中性粒細胞使其獲得炎癥表型[14]。所以通過皮膚組織病理學觀察粒細胞數量可以初步評價皮膚的愈合程度。實驗結果顯示，各組病理組織隨著時間的推移，粒細胞數量逐漸降低，這說明皮膚一直處于修復的過程，其中陽性對照組和護理液高、中劑量組的粒細胞數量降低得比較快。

毛細血管的變化是組織創傷修復中重要評價指標之一。組織在損傷后，毛細血管開始形成，內皮細胞通過分裂增生、向無血管或者少血管區遷移，逐漸形成毛細血管芽，新形成的血管均為毛細血管。隨著愈合時間的推移，傷口逐漸成熟，毛細血管的密度下降。創傷發生后，缺損的創面需要消耗大量的氧氣和營養物質，必須由新生的毛細血管來供應。因此在皮膚創傷修復過程中，血管新生的作用是必不可少的[15]，所以通過皮膚組織病理學觀察新生毛細血管，可以初步評價皮膚的愈合程度。實驗結果顯示，各組病理切片組織隨著時間的推移，毛細血管數量逐漸增加，這說明皮膚一直處于修復的過程，其中陽性對照組和護理液高、中劑量組的毛細血管數量增加得比較快。

在血管新生的同時，臨近的成纖維細胞增生并移行至創面，新生的肉芽組織將創緣連接起來，同時創緣表皮細胞增生，逐漸覆蓋傷口。成纖維細胞是創傷愈合過程中主要的修復細胞，是肉芽組織的主要成分之一，且可通過自分泌和旁分泌機制產生多種細胞因子，作用于自身和其它細胞，調控修復過程，所以通過皮膚組織病理學觀察成纖維細胞可以初步評價皮膚的愈合程度[16]。實驗結果顯示，各組病理切片組織隨著時間的推移，成纖維細胞數量逐漸增加，這說明皮膚一直處于修復的過程，其中陽性對照組和護理液高劑量組的成纖維細胞數量增加得比較快。

綜上所述，可以認為甘草酸二鉀的促愈作用主要是通過減少粒細胞的數量來減輕創面炎癥反應、促進肉芽組織形成、成纖維細胞的快速增殖、使上皮爬行速度增快、新生的毛細血管增多，從而加速組織創面愈合的過程。

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SKIN REPAIRING EFFECT OF NURSING LIQUID OF DIPOTASSIUM GLYCYRRHIZATE

SHI Mi-li, JIN Jia-rui, GUO Mei-xian, TIAN Jia-li,*LIU Xiao-bo

(College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)

Tostudy the repairing effect of dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin on damaged skin.The model of skin injury was made of SD rats. The animals were randomly divided into positive control group, negative control group, high, medium and low dose group of dipotassium glycyrrhizinate care liquid, dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin group. After a certain time, the wound healing rate was detected, and the histopathological changes of damaged skin were observed by HE staining.The skin healing rate and histological score of the high, middle dose group and sanitary napkin group were statistically significant higher than those of the negative group (< 0.05) after the model 7 and 14 days.The dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin can promote skin repair.

skin repairing; nursing liquid; HE staining

1674-8085(2018)05-0081-06

R965.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2018.05.016

2018-07-06；

2018-08-26

施米麗(1993-)，女，云南曲靖人，碩士生，主要從事中藥藥理研究(E-mail:1437759468@qq.com);

金家瑞(1991-)，女，云南曲靖人，碩士生，主要從事中藥藥理研究(E-mail:562640385@qq.com);

郭美仙(1980-)，女，云南臨滄人，講師，碩士，主要從事中藥藥理學研究(E-mail:Yndllyo@126.com);

田佳麗(1993-)，女，云南保山人，碩士生，主要從事中藥藥理研究(E-mail:471062815@qq.com);

*劉曉波(1972-)，男，貴州思南人，副教授，碩士生導師，碩士，主要從事中藥藥理學研究(E-mail:yndlxb@126.com).