三峽庫區山羊化膿隱秘桿菌的自然感染情況

楊 睿,張素輝,徐登峰,許國洋,付利芝

（1.重慶市畜牧科學院,重慶 榮昌 402460）

化膿隱秘桿菌（Arcanobacterium pyogenes）屬于隱秘桿菌屬成員,是一種條件性致病菌。該菌主要寄生在牛、羊及野生反芻動物的上呼吸道、消化道等黏膜處,常與大腸桿菌、連球菌等混合感染,導致家畜發生肺炎、關節炎、皮下膿腫、流產、死胎等現象,同時也可能引起人感染致病,給人類健康帶來了重大的威脅[1-2]。

近年來,三峽庫區養羊業的發展迅速,從外地大量引進優良羊種;由于庫區95%的面積由丘陵和山脈組成[3],養殖生產條件良莠不齊,外加冬季陰冷潮濕,夏季高溫高濕,使得各類疾病一直散發流行。由于養殖條件艱苦一些在外界少有暴發的疾病,也在庫區陸續發現。此研究針對三峽庫區主要的山羊養殖區縣對化膿隱秘桿菌的流行情況進行調查。

1 材料及方法

1.1 病料的采集 2014年3月至2016年12月間在三峽庫區各地采集肺炎和淋巴結化膿病料。

1.2 細菌的分離鑒定

1.2.1 細菌學檢查 在無菌環境下將病料接種在含10%小牛血清TSA瓊脂培養基上,細菌純化后進行革蘭染色,并鏡檢。

1.2.2 PCR檢測 挑取純單個菌落至10%小牛血清TSA液體培養基中培養,37℃,120 r/min,培養24 h,采用OMEGA Bacterial DNA Kit試劑盒提取細菌基因組,引物為自行設計的特異性引物[4],進行PCR。

1.2.3 致病性試驗 對鑒定為陽性的病原進行致病性試驗,選取健康的昆明系小鼠進行腹腔注射,攻毒組（n=5）每只小鼠注射0.1 mL,濃度為1×109CFU/mL-1的菌液,健康組（n=5）每只小鼠注射0.1 mL的營養肉湯,觀察接種后小鼠的癥狀。

2 結果

2.1 病料的采集 從三峽庫區的巫山、云陽、忠縣、石柱、豐都、武隆地區共采集病料72份。其中肺炎病料57份,淋巴結化膿病料14份。

2.2 病原菌的分離鑒定 通過純化培養、鏡檢和特異性PCR,共分離到5株化膿隱秘桿菌,其中從肺炎病料中分離到化膿隱秘桿菌3株,分離率為5.26%（3/57）,從淋巴結化膿病料中分離到化膿隱秘桿菌2株,分離率為14.28% （2/14）。見圖1。

圖1 細菌分離株革蘭染色結果（1 000×）

2.3 PCR檢測結果 使用化膿隱秘干菌特異性引物對分離菌株進行PCR擴增,均能擴增出1 378 bp的片段（圖2）,測序后在GenBank上進行比對,與化膿隱秘桿菌（FN39498）的相似性大于99%。

圖2 PCR擴增結果

2.4 致病性試驗的結果 組1和組2的攻毒菌來自淋巴結化膿病料,組3、組4和組5的攻毒菌來自肺炎病料,組6為健康對照組。接種細菌的小鼠在24 h后出現精神萎靡,反應遲鈍等癥狀,并在4 d后開始出現死亡,2周后組1與組3的死亡率最低,均為20%,組2的死亡率最高為80%,健康對照組中的小鼠均正常（表1）。

表1 分離菌對小鼠的攻毒結果

3 討論

化膿隱秘桿菌是一種條件性致病菌,在外界條件發生變化時容易引起動物發病。但是以往關于化膿隱秘桿菌引起疾病的報道主要集中在牛上[5],多呈零星的散發狀態,關于山羊化膿隱秘桿菌的研究較少。然而三峽庫區是一個高溫高濕地區,整體經濟情況落后,養殖條件艱苦,為各種疫病的流行創造了天然的條件。在此項研究中,我們重點研究了化膿隱秘桿菌在三峽庫區的自然感染情況。從2014年3月至2016年12月,共收集到山羊肺炎病料57份,淋巴結化膿病料14份,通過分離鑒定共收集到5株有毒力的化膿隱秘桿菌,其中從肺炎病料中分離到3株,分離率為5.26%（3/57）,從淋巴結化膿病料中分離到化膿隱秘桿菌2株,分離率為14.28% （2/14）。這個比列遠遠高于預想,而且由于庫區的養殖條件和氣候條件,實際情況或許更為嚴重。因此對三峽庫區動物疫病的監測不應該只局限于當前主要的流行疾病,各地獸醫主管部門也應該對一些易發的條件性疫病進行監測。