TKTL1在前列腺癌新輔助內分泌治療前后的表達及臨床意義

張保華，賈 勇，朱磊一

（青島大學附屬青島市市立醫院東院區泌尿外科，山東 青島266071）

在世界范圍內，前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤，也是男性癌癥相關死亡的第二大原因［1-2］。前列腺癌是指發生在前列腺的上皮性惡性腫瘤，病理類型上包括腺癌（腺泡腺癌）、導管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細胞癌、腺鱗癌，其中前列腺腺癌占95%以上［1］。有學者［2-3］統計了2008年所有可用數據的國家的總體前列腺癌發病率，有近900 000例，其中大約有258 000人死于前列腺癌，接近30%的前列腺癌患者將死于這種惡性腫瘤。2017年前列腺癌在我國位列男性惡性腫瘤發病率的第6位，發病率隨著年齡的增長而增長，高峰年齡是70～80歲［2］。前列腺癌的發生與遺傳因素、性活動、飲食習慣等有關。前列腺癌早期常無癥狀，隨著腫瘤的發展，前列腺癌主要表現為尿流緩慢、排尿不盡且費力、尿頻尿急、甚至尿失禁等由于前列腺腺體壓迫尿道而引起的進行性排尿困難；前列腺癌可侵及患者膀胱、精囊或血管神經束，從而引發患者出現血尿、血精、陽痿，嚴重者可發生骨轉移，引起骨痛或病理性骨折、截癱［3-4］。自從提出新輔助內分泌治療的方法開始，前列腺癌的治療已經從以前單一的治療手段發展到今天多種治療方式相結合的治療策略，使得前列腺癌的治療方式有了更多的選擇［5-6］。新輔助內分泌治療后對于降低腫瘤切緣的陽性率，降低前列腺特異抗原（prostate specific antigen，PSA）水平也已經得到了大家的共識。因此，早期及時地診斷前列腺癌患者體內的有效生物學標志物，對監測患者病情、給予合理的臨床治療及改善患者的預后十分重要。本研究旨在觀察TKTL1在新輔助內分泌治療前后的表達情況，以更好地評估新輔助內分泌治療對于前列腺癌的臨床作用。

材料和方法

1 資料收集

收集我院2010年1月至2017年10月穿刺確診為前列腺癌的患者的石蠟標本共60例，其中新輔助內分泌治療前后的標本全部來自于穿刺活檢組織。所有研究對象均在根治術前行3個月標準內分泌治療：諾雷得每支3.6mg，每次腹部皮下注射3.6mg，每隔28 d注射1次?？凳康?0 mg口服每天1次，連續治療3個月。標本用10%甲醛溶液固定。本組病例年齡50～70歲，平均年齡64.2±9.8歲，腫瘤分期為II期，III期的各38例和22例，病理學分級根據TNM分期系統（2015年）。研究經本院倫理委員會批準，患者及家屬簽訂知情同意書。

2 主要試劑及器械

PV-6000通用型二步法免疫組化檢測試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司），兔抗人TKTL1單克隆抗體（北京博奧森生物技術有限公司），一抗羊非免疫血清（福州邁新生物技術有限公司），TKTL1染 色 采 用 的3，3-二 氨 基 聯 苯 胺（diaminobezidin，DAB）色原、DAB底物、DAB緩沖液（X20）（福州邁新生物技術有限公司），磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）緩沖液（pH7.2～7.4），0.01mol／L檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0），3%甲醇-H2O2溶液用30% H2O2和80%甲醇溶液配制，甘油和0.5mmol／L碳酸鹽緩沖液（pH9.0～9.5），二甲苯，無水乙醇，75%乙醇，95%乙 醇，蒸 餾水，3% H2O2，18cm不銹鋼高壓鍋。

3 免疫組織化學檢測步驟

蠟塊組織以4μm為標準連續切片，石蠟切片脫蠟、水化，自來水沖洗；將盛有乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）和玻片的燒杯置于沸水浴環境，保持外部沸騰狀態1.5min，自然冷卻至室溫，切片上滴加羊非免疫血清一抗封閉，室溫孵育10min。除去血清，滴加1：400稀釋的二抗，室溫下孵育60min，PBS沖洗3次，每次3min，除去PBS，切片上滴加DAB顯色劑，自來水沖洗，終止染色，蘇木素復染，封片劑固定。用以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

4 免疫組織化學結果判斷

TKTL1蛋白的表達主要位于細胞漿，陽性染色的標準為胞漿內出現棕黃色顆粒.高倍鏡下，隨機選取5個視野，每個視野所記細胞數均≥200個，同一組醫師和護士完成實驗和計數，按陽性細胞所占比例進行判定.以細胞中TKTL1染色比為評分標準：0%～20%為0分，21%～50%為1分，51%～80%為2分，大于80%為3分，分數≥2分被視作明顯的過表達，并記錄為陽性。

5 依據實體瘤療效評價標準（RECIST）評定化療藥物的臨床療效

①完全緩解（complete remission，CR）：腫瘤持續1個月完全消失；②部分緩解（partial remission，PR）：腫瘤持續1個月體積縮小≥50%，且無其他病變擴展；③穩定（stable disease，SD）：腫瘤持續1個月25%≤體積縮小≤50%；④進展（progressive disease，PD）：腫瘤體積增大≥25%?；颊邞?周后再次重新測量腫瘤病灶，有效率（ORR）＝完全緩解+部分緩解，疾病控制率（DCR）＝治療有效率+疾病穩定率。

6 統計學處理

數據采用SPSS22.0軟件處理，對數據行正態性和方差齊性檢驗，計量資料結果符合正態分布，計量資料結果用均數±標準差表示，采用單因素方差分析和t檢驗進行組間差異比較，采用卡方檢驗進行計數資料比較，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

結 果

1 新輔助內分泌治療結果

新輔助治療后，部分緩解36例，穩定11例，進展13例?；颊吲R床治療有效率為60.00%（36／60），疾病控制率為78.33%（47／60），患者臨床治療療效較好（χ2＝9.358，P＝0.002）。

2 免疫組化結果

免疫組化結果顯示，TKTL1在新輔助內分泌治療后表達顯著降低，差異具有統計學意義（P＝0.003），見表1和圖1。

表1 免疫組化結果

圖1 TKTL1免疫組化染色結果

3 TKTL1和前列腺癌關系

TKTL1和患者年齡、腫瘤直徑大小無關，與患者腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移和TNM分期明顯相關，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 TKTL1和前列腺癌關系

討 論

前列腺癌患者的治療方式主要是手術治療和非手術治療，非手術治療又包括化學治療和內分泌治療等，新輔助治療是指患者在手術前行內分泌治療，以降低手術切緣陽性率，提高患者的生存率。TKTL1，又稱轉酮醇酶樣蛋白1，是分離Xq 28中發現的一個新的轉酮醇酶相關基因，位于綠色視覺色素基因和ABP-280絲素基因之間［5］。有研究［7-8］報道，TKTL1在多種惡性腫瘤中表達，如乳腺癌，膀胱癌癌，大腸癌，胃癌以及肺癌等。國外［9］報道，前列腺癌患者血清TKTL 1的表達降低。相關文獻的報道顯示了TKTL1與腫瘤的相關性，TKTL1可能成為腫瘤病情變化的潛在標志物。目前TKTL1在前列腺癌的表達情況國內尚無報道，因此，本文研究TKTL1在新輔助內分泌治療前后的表達情況及與患者預后的關系。

本研究通過免疫組化的方法分析TKTL1在前列腺癌新輔助內分泌治療前后組織中的表達量，TKTL1的表達情況與患者腫瘤Gleason分期存在明顯相關，說明Gleason分期越高，TKTL1陽性表達越高與TSAUR等［10］研究結果相一致，說明TKTL 1的表達與腫瘤進展呈正相關。同時，TKTL1的表達情況前列腺癌與患者有無淋巴結轉移和TNM分期明顯相關，說明患者存在淋巴結轉移時，TKTL1的陽性表達越高；TKTL1陽性表達與TNM分期明顯相關；說明轉酮醇酶（transketolase，TKT）及TKTL 1控制惡性腫瘤的的碳水化合物的糖酵解代謝增強過程，高表達TKTL 1促進磷酸戊糖途徑（pentose phosphate pathway，PPP）允許葡萄糖參與核酸合成，葡萄糖降解為乳酸，以及氧化還原，TKTL 1表達的增加可能激活PPP，從而促進癌細胞的生長和存活［11-12］。同時，結果顯示結果3個月的新輔助內分泌治療，TKTL1在中高危前列腺癌組織中的表達情況降低，也進一步證實了新輔助內分泌治療對前列腺癌組織的作用，諾雷得作為促黃體生成素釋放激素（luteinizing hormone-releasing hormone-α，LHRH-α的一種類似物），能抑制腦垂體促黃體生成素的合成，從而降低男性血清睪丸酮?？凳康茫ū瓤敯罚儆诜晴摅w類抗雄激素藥物，與雄激素受體競爭性結合，從而抑制雄激素，改善前列腺癌的腫瘤發展，TKTL 1作為抑制腫瘤生長和轉移的靶點，可能成為新的抗腫瘤治療的靶點［13-14］。因此，本文認為TKTL1在新輔助內分泌治療后表達的降低也進一步說明新輔助內分泌治療的作用，可見，TKTL1在參與前列腺癌的進展中也發揮著巨大的作用，有望成為臨床治療的一個很有前途的抗腫瘤靶點。