3種三七根腐病致病菌的抑菌植物篩選

李紀潮 楊天梅 楊紹兵 左應梅 楊美權 章朦玥 許宗亮 張金渝

摘要：【目的】篩選出對3種三七根腐病致病菌具有強抑菌效果的拮抗植物，為制定三七根腐病綠色安全的防控措施提供科學依據?！痉椒ā酷槍θ吒〉?種致病菌[假單胞桿菌屬（Pseudomonas sp.，菌株號B857）、無色桿菌（Achromobacter marplatensis，菌株號B562）和產堿菌屬（Candidimonas sp.，菌株號B2681）]，選用16種常見草本植物進行乙醇超聲波提取，用二倍稀釋法稀釋成5個濃度梯度進行平板打孔抑菌試驗，測量抑菌直徑并計算毒力回歸方程及致死中濃度（LC50），采用刃天青微孔板法觀測16種植物提取液對3種病原菌的最小抑菌濃度（MIC），篩選出抑菌效果強的植物進行田間三七苗覆蓋試驗，觀測其對三七出苗及農藝性狀的影響?！窘Y果】毒力測定結果顯示，大狼毒對3種病原菌均非常敏感，LC50均小于0.100 g/mL;紫莖澤蘭和黃花蒿對B857和B562非常敏感，LC50均小于0.100 g/mL;苦蒿、艾草和萬壽菊對B857非常敏感，鬼針草對B562非常敏感，LC50均小于0.100 g/mL。MIC測定結果表明，萬壽菊、苦蒿和紫莖澤蘭對3種病原菌的抑菌效果較強，其中，萬壽菊對3種病原菌的綜合效果最強，對B562和B2681的MIC低至1.875 mg/mL，對B857的MIC為3.750 mg/mL;苦蒿對B857和B562的MIC為1.875 mg/mL;紫莖澤蘭對B2681的MIC為1.875 mg/mL，對B562和B857的MIC為3.750 mg/mL。田間化感作用試驗結果表明，萬壽菊覆蓋方式的三七出苗率最高，為75.86%，苦蒿覆蓋方式的出苗率最低，為65.43%;3種植物覆蓋方式對三七莖粗、葉長和葉面積無顯著影響（P>0.05），對三七苗株高有顯著促進作用（P<0.05，下同）。萬壽菊和苦蒿覆蓋方式致使三七苗葉寬變窄，且與對照差異顯著?！窘Y論】萬壽菊和紫莖澤蘭對3種三七根腐病致病菌的綜合抑菌效果較強，且對三七生長無顯著化感作用，萬壽菊可直接采收后作為覆蓋物返田利用，紫莖澤蘭需烘干打粉后施用。刃天青微孔板法可作為植物源提取物最小抑菌濃度的測定方法。

關鍵詞： 三七根腐病;致病菌;毒力測定;抑菌植物篩選;刃天青微孔板法

中圖分類號： S435.672? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）10-2205-09

Antibacterial plant screening of three pathogenic bacteria

of notoginseng root rot

LI Ji-chao1， YANG Tian-mei1， YANG Shao-bing1， ZUO Ying-mei1， YANG Mei-quan1，ZHANG Meng-yue2， XU Zong-liang1， ZHANG Jin-yu1*

（1Institute of Medicinal Plant， Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Kunming? 650231， China; 2School of Life Science and Biopharmaceutics， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang? 110021， China）

Abstract：【Objective】Screening antagonistic plants with strong antiseptic effects on the three pathogenic bacteria of notoginseng root rot， and providing a scientific basis for the development of safe control and control practices for notoginseng root rot. 【Method】For notoginseng root rot three pathogenic bacteria[Pseudomonas sp.（strain No.B857）， Achromobacter marplatensis（strain No.B562）， Candidimonas sp. （strain No.B2681）]， 16 common herbs were selected for ethanol ultrasonic extraction. The anti-bacterial diameter was measured and the virulence regression equation and median lethal concentration（LC50） were calculated by diluting the five concentration gradients with twice dilution method for plate perforation bacteriostatic experiment. The minimum bacteriostatic concentration（MIC） of 16 plants on pathogenic bacteria was observed by Resazurin microporous plate method microporous plate method. The plants with strong bacteriostatic effect were screened for field mulch experiments to observe the effects on notoginseng seedlings and agronomic traits. 【Result】The toxicity results showed that Euphorbia jolkinii Boiss. was very sensitive to all three pathogenic bacteria， and the LC50 was less than 0.100 g/mL. Eupatorium coelestinum L. and Artemisia annua L. were very sensitive to B857 and B562， and the LC50 was less than 0.100 g/mL. In addition， Artemisia lavandulaefolia DC.， Artemisia argyi H. Levl. et Vant. and Tagetes erecta L. were very sensitive to B857， and Bidens pilosa L. was very sensitive to B562， with LC50 less than 0.100 g/mL. The MIC showed that T. erecta， A. lavandulaefolia? and E. coelestinum? had the strongest bacteriostatic effects against three pathogenic bacteria. T. erecta had the strongest comprehensive bacteriostatic effect on three pathogenic bacteria， the MIC to B562 and B2681 was as low as 1.875 mg/mL， and the MIC to B857 was 3.750 mg/mL.MIC of A. lavandulaefolia to B857 and B562 was 1.875 mg/mL. MIC of E. coelestinum to B2681 was 1.875 mg/mL， and the MIC to B562 and B857 was 3.750 mg/mL. The results of the field-based effect test showed that T. erecta? had the highest emergence rate at 75.86% and A. lavandulaefolia had the lowest emergence rate at 65.43%. The three treatments had no significant effect on the stem diameter， leaf length and leaf area（P>0.05） and the plant height was significantly promoted（P<0.05， the same below）. T. erecta and A. lavandulaefolia treatment made the leaf width smaller but was not significantly different from the control. 【Conclusion】T. erecta and E. coelestinum have the strongest antibacterial effect on the three pathogenic bacteria of notoginseng root rot， and have no significant allelopathy effect on notoginseng growth. T. erecta can be directly harvested as mulch return field utilization， E. coelestinum need to be made into dry powder before application. The Resazurin microporous plate method microporous plate method can be used as a method for the determination of the minimum bacteriostatic concentration of plant source extracts.

Key words： root rot of notoginseng; pathogenic bacteria; virulence determination; bacteriostatic plant screening; Resazurin microporous plate method

0 引言

【研究意義】三七[Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen]為五加科人參屬植物，《本草綱目拾遺》中記載，人參補氣第一，三七補血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者（Guo et al.，2010）。近年來，因其治療范圍廣泛且療效顯著，市場需求量增加，種植面積擴大，隨之根腐病問題日益嚴重，而三七的主要藥用部位為根系，根腐病對三七而言為毀滅性病害，嚴重者可損失70%以上，甚至絕收，造成三七產量和品質降低（繆作清等，2006）。目前三七根腐病防治主要采用化學農藥，但化學農藥的大量使用易導致“3R”問題（Pang et al.，2012）。植物源殺菌劑來自天然植物資源寶庫，具有選擇性高、環境友好、對非靶標生物安全、低毒、低殘留、促進作物生長及提高作物抗病性等特點，滿足綠色防控及安全可持續理念的要求（Xiong et al.，2016）。因此，篩選對三七根腐病病原菌的抑菌拮抗植物，對三七根腐病植物源殺菌劑的開發及推廣綠色防控栽培技術具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】研究發現，三七根腐病中假單胞桿菌屬細菌的致病性最強，較真菌屬常見致病源腐皮廉孢（Fusarium solani）和細鏈格孢（Alternaria tenuissima）的致病力更強（羅文富等，1997）;假單胞桿菌屬細菌發病后期與土壤習居菌如鐮刀菌、絲核菌等復合侵染，導致根腐病傳播加重（Lei et al.，2017），因此，抑制病原微生物的生長在緩解三七根腐病的暴發中起著關鍵作用。目前關于植物源抑菌作用的研究已有較多報道，萬壽菊提取液（王憲青等，2008）、紫莖澤蘭提取物（池水晶等，2013）和黃花蒿殘膏揮發油（江曉波等，2015）對大腸桿菌均有抑制作用，可造成細胞膜破裂，或空腔化;鐵莧菜葉和樹皮提取物對沙門氏菌具有抗菌活性（Bahiense et al.，2017）;肉桂提取物對銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）生物膜的形成具有抑制作用（綦國紅等，2018）;香合歡（Banothu et al.，2017）和蕁麻葉（Mzid et al.，2017）活性物質可抑制銅綠假單胞菌的生長;牡丹花蕾提取物對銅綠假單胞菌有顯著抑制作用，可改變膜脂肪酸組成和膜蛋白構象并破壞膜完整性（周云冬等，2019）?！颈狙芯壳腥朦c】變形菌門（Proteobacteria）是三七連作過程中的優勢細菌門（Dong et al.，2016;Fan et al.，2016），假單胞桿菌、無色桿菌和產堿菌為三七根腐病的主要病原細菌，目前針對這3種病原菌的抑菌研究及拮抗植物篩選尚未見報道?！緮M解決的關鍵問題】選取云南常見的16種雜草，通過乙醇超聲法提取粗提物，以假單胞桿菌屬（Pseudomonas sp.）、無色桿菌（Achromobacter marplatensis）和產堿菌屬（Candidimonas sp.）3種病原細菌為目標菌，采用平板打孔法和刃天青微孔板法研究植物提取物對3種病原菌的抑菌效果，并通過田間覆蓋試驗觀測植物干粉對三七苗生長及化感作用的影響，篩選出對三七根腐病具有強抑菌作用的拮抗植物，為三七根腐病的植物源殺菌劑開發提供理論依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試的3種三七根腐病病原細菌[假單胞桿菌屬（Pseudomonas sp.，菌株號B857）、無色桿菌（A. marplatensis，菌株號B562）和產堿菌屬（Candidimonas sp.，菌株號B2681）]均由沈陽藥科大學鑒定提供。供試16種草本植物目錄見表1。NA培養基配方：牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、瓊脂20 g、蒸餾水1000 mL、pH 7.2。刃天青染色劑：將刃天青鈉鹽在無菌條件下用無菌水配制成 0.1 g/L的溶液，現配現用。主要儀器設備：BJ-800A粉碎機（德清拜杰電器有限公司）、GR60DA電熱壓力蒸汽滅菌鍋[致微（廈門）儀器有限公司]、SW-CJ-1FD超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公司）、DHP-9051微生物培養箱（上海一恒科學儀器有限公司）、N-1100旋轉蒸發儀（日本東京理化器械株式會社）、LANYI-1000CT超聲波提取機（上海蘭儀實業有限公司）、HGPF-9162（GPX-9162）電熱恒溫培養箱（上海躍進醫療器械有限公司）、THZ-052D雙層恒溫搖床（上海博彩生物科技有限公司）、UGTY-1200冷凍離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司）、UV-2100型紫外可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）和HM-G10葉面積指數測定儀（山東恒美電子科技有限公司）。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 提取液制備 將采集的植物材料進行清理，去除泥土、壞死的老葉、纏繞物及其他異物，置避光通風處自然陰干，于電熱恒溫干燥箱中50 ℃烘干。植物樣品提取參考姬妍茹等（2014）的方法：用粉碎機將植物粉碎，過40目篩，稱取300 g樣品粉末，倒入500 mL三角瓶內，加入500 mL 95%乙醇溶液，靜置7 d，超聲波提取30 min，重復3次;用乙醇沖洗濾渣3次，合并濾液，70 ℃旋轉蒸發至體積不再變化，得到提取物浸膏，浸膏用50%丙酮和5%吐溫-80混合液溶解，稀釋至濃度為0.6 g/mL的母液，置于4 ℃冰箱保存備用。

1. 2. 2 菌懸液制備 將細菌在培養基上活化，于抑菌活性試驗前12 h繼代培養一次，保證細菌的生長能力達最強狀態。無菌條件下吸取1 mL含有細菌菌株的NA培養基于離心管中，6000 r/min下離心5 min，棄上清液，吸取適量的NaCl（0.9%）生理鹽水于離心管中，輕輕振蕩，制備菌懸液。使用分光光度計測定菌懸液的OD，設定分光光度計的紫外波長為600，選擇OD600為0.08～0.10的菌液，此時菌懸液濃度約為108 CFU/mL。

1. 2. 3 抑菌圈直徑測定 以平板打孔法進行抑菌直徑測定。在無菌條件下每個培養皿中倒入15 mL培養基，厚度5 mm，待培養基凝固后，用無菌金屬打孔器（d=6 mm）打成直徑6 mm、深5 mm的4個小孔，除去孔內瓊脂，并用微量移液槍在小孔內打入50 μL瓊脂進行封底。采用涂布法將細菌菌懸液涂布于培養基平面。用二倍稀釋法將0.6 g/mL母液提取液稀釋成0.6000、0.3000、0.1500、0.0750和0.0375 g/mL 5個濃度梯度，各濃度吸取200 μL提取液分別加入到培養基的4個小孔中，將培養皿置于（25±2）℃恒溫箱中培養24 h后取出觀察結果，每處理3次重復，測量抑菌圈的直徑并記錄，取平均值。

1. 2. 4 最低抑菌濃度（MIC）測定 參考袁高慶等（2011）采用刃天青法測定MIC。取24孔板，每個小孔中加入400 μL的NA液體培養基，分別加入濃度為0.3000、0.1500、0.0750、0.0375、0.0188和0.0094 g/mL的提取液100 μL，最終配制為30.000、15.000、7.500、3.750、1.875和0.938 mg/mL共6個梯度的含藥培養基。待凝固后加入100 μL菌懸液，分別用不含藥培養基加入無菌水、菌懸液作為對照，在（25±2）℃恒溫培養箱培養24 h，向所有孔內加入0.1 g/L的刃天青溶液100 μL，（25±2）℃恒溫孵育4 h，每處理3次重復，顯色后觀察結果，變為紅紫色和紅色判斷為無抑菌效果，不變色的最小濃度為MIC。

1. 2. 5 拮抗植物對田間三七出苗及農藝性狀的影響 篩選出抑菌效果強的拮抗植物，烘干打粉后覆蓋于三七苗床表面，設置面積相等的3個小區，播種量一致，以不加拮抗植物的小區為對照，觀測其化感作用對三七出苗及農藝性狀的影響。隨機劃線30 cm×30 cm的樣方進行出苗株數統計，換算成出苗率;每小區統計30株三七小苗的株高、莖粗、葉長和葉寬，用游標卡尺測量;使用葉面積指數測定儀進行葉面積測定。

1. 3 統計分析

試驗數據運用SPSS 20.0進行單因素方差分析（One-way ANOVA），農藝性狀數據以<d：＼飛飛翔＼plugins＼v12pluginwordtranslator＼wordimage＼NF19-0968《三七根腐病3種致病細菌的抑菌植物篩選研究》_修改稿-60B＼image1.pdf>表示，用Duncan’s新復極差法進行數據差異顯著性檢驗（α=0.01），用PROBIT回歸分析進行毒力回歸方程、致死中濃度（LC50）和決定系數（R2）計算，用Excel 2017制表。

2 結果與分析

2. 1 16種植物提取液對三七根腐病病原菌的毒力測定結果

2. 1. 1 16種植物提取液對假單胞桿菌B857的毒力測定結果 由表2可知，黃花蒿、大狼毒、紫莖澤蘭、苦蒿、艾草和曼陀羅對B857非常敏感，LC50均小于0.100 g/mL;土荊芥、大薊和金蕎麥對B857的敏感性較差，其LC50均大于1.000 g/mL;紫蘇對B857無抑菌作用。表2結果顯示黃花蒿R2為0.990，表明抑菌濃度與抑菌作用間呈顯著線性關系，隨提取液濃度增加抑菌作用增強。

2. 1. 2 16種植物提取液對無色桿菌B562的毒力測定結果 由表3可知，大狼毒、紫莖澤蘭、鬼針草、黃花蒿和萬壽菊對B562非常敏感，LC50均小于0.120 g/mL;曼陀羅、金蕎麥、波斯菊和土荊芥對B562不敏感，其LC50均大于0.400 g/mL;土大黃、蓖麻和三分三對B562無抑制作用。表3結果顯示萬壽菊R2為0.996，表明抑菌濃度與抑菌作用間呈顯著線性關系，隨提取液濃度增加抑菌作用增強。

2. 1. 3 16種植物提取液對產堿菌B2681的毒力測定結果 由表4可知，大狼毒對B2681非常敏感，LC50為0.089 g/mL，小于0.100 g/mL;黃花蒿、萬壽菊和紫莖澤蘭抑菌效果次之，LC50均小于0.200 g/mL;土大黃、紫蘇和金蕎麥對B2681無抑制作用。表4結果顯示黃花蒿R2為0.994，表明抑菌濃度與抑菌作用間呈顯著線性關系，隨提取液濃度增加抑菌作用增強。

2. 2 16種植物提取液對3種病原菌的MIC

2. 2. 1 16種植物提取液對假單胞桿菌B857的MIC

表5結果顯示，苦蒿對B857的MIC為1.875 mg/mL，抑菌效果最強;紫莖澤蘭、土大黃、大狼毒、萬壽菊和黃花蒿對B857的抑菌效果次之，MIC為3.750 mg/mL;鬼針草、艾草、金蕎麥和波斯菊對B857的抑菌效果較弱，MIC為15.000 mg/mL。

2. 2. 2 16種植物提取液對無色桿菌B562的MIC

表6結果顯示，苦蒿、艾草和萬壽菊對B562的抑菌作用最強，MIC為1.875 mg/mL;紫莖澤蘭的抑菌效果次之，MIC為3.750 mg/mL;土大黃、蓖麻、鬼針草、紫蘇、三分三和大薊對B562的抑菌效果最弱，MIC均大于30.000 mg/mL。

2. 2. 3 16種植物提取液對產堿菌B2681的MIC

表7結果顯示，紫莖澤蘭和萬壽菊對B2681的抑菌效果最強，MIC為1.875 mg/mL;蓖麻、苦蒿和大薊對B2681的抑菌效果次之，MIC為7.500 mg/mL;土大黃、鬼針草、紫蘇、金蕎麥和波斯菊對B2681的抑菌效果較弱，MIC均大于30.000 mg/mL。

2. 3 田間化感作用試驗結果

綜合16種植物提取液對三七根腐病病原菌的MIC，紫莖澤蘭、苦蒿和萬壽菊對三七根腐病病原菌的綜合抑菌效果較強。采收紫莖澤蘭、苦蒿和萬壽菊烘干打粉后覆蓋于三七苗床表面，觀察3種植物處理對三七出苗及農藝性狀的影響，結果（表8）表明，萬壽菊覆蓋方式的三七出苗率最高，為75.86%，而苦蒿覆蓋方式影響了三七出苗，出苗率最低，為65.43%，且與萬壽菊覆蓋方式差異顯著（P<0.05，下同）;3種植物覆蓋方式對三七莖粗、葉長和葉面積無顯著影響（P>0.05）;3種植物覆蓋方式對三七苗株高有顯著促進作用，其中，萬壽菊覆蓋方式的三七株高顯著高于其他植物覆蓋方式;萬壽菊和苦蒿覆蓋方式致使三七苗葉寬變窄，且與對照差異顯著。綜上所述，萬壽菊和紫莖澤蘭對三七生長無抑制的化感作用，可作為三七田間覆蓋物施用，能促進三七出苗且不影響其農藝性狀，對三七根腐病病原菌也有較強的抑制作用。

3 討論

天然植物在漫長的進化過程中合成了許多結構復雜新穎的次生代謝產物，在抗癌、抗菌等方面顯示出巨大潛力（王婧等，2018）。云南省植物資源豐富，就近選擇廉價、易得的常見草本植物在三七根腐病防控中加以利用，具有一定的生態、社會和經濟意義。本研究中，萬壽菊對3種三七根腐病致病菌的綜合抑菌效果最強，對無色桿菌B562和產堿菌B2681的MIC低至1.875 mg/mL，對B857的MIC為3.750 mg/mL，同時顯著提高三七的出苗率和株高，具有較高的應用潛力。前人研究顯示，萬壽菊提取物具有廣譜殺滅病原菌的活性（Saani et al.，2018），對革蘭氏陰性菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌均有較強的抑制作用（王憲青等，2008）。目前，對萬壽菊的抑菌活性成分以葉黃素研究最多，主要是α-三連噻吩及其衍生物，對大腸桿菌和青霉菌的抑制效果明顯（李曼，2014）;另外，5種生物堿（劉佳斌等，2007）、7種黃酮類（劉佳斌等，2008）和精油類（范志宏等，2011）成分對西瓜枯萎病菌菌絲生長和孢子萌發均有抑制作用，可使病菌的果膠酶活性降低，呼吸強度提高，細胞膜通透性增大。萬壽菊對三七根腐病也有較好的生防潛力，其根部提取物抑菌活性最強，可使鐮刀菌酸（FA）發生鈍化，體內抗氧化保護酶提高（范志宏等，2010），其殺菌素水乳劑可產生降解尖孢鐮刀菌細胞壁的酶類，使侵染活性下降，從而起到抑菌和保護植物的作用（孫芬變和王金勝，2012）。 因此，萬壽菊可作為三七根腐病綠色防治的植物源應用推廣，可直接采收后作為田間覆蓋物使用，或制成提取液澆灌苗床用于根腐病防治，或加入連作土中作為降低病原菌的土壤調理劑使用。

苦蒿和黃花蒿屬于菊科蒿屬，本研究中苦蒿抑菌作用較強，對B857的毒力較高，對B857和B562的MIC低至1.875 mg/mL。前人研究表明，苦蒿對革蘭氏陽性菌有較好的抑制效果（王寅生等，2019），自然條件下蒿屬植物通過莖葉揮發和淋溶、土壤殘體腐解和根系分泌等方式向環境中釋放化感物質，進而抑制微生物的生長繁殖（趙雅萌等，2018）。但本研究的田間試驗發現苦蒿降低了三七的出苗率，對三七的生長造成影響，可進一步研究其抑菌成分，為植物源殺菌劑產品開發提供理論參考。

本研究中，紫莖澤蘭對B857和B562的毒力最高，LC50均小于0.030 g/mL;對B2681的MIC為1.875 mg/mL，對B857和B562的MIC為3.750 mg/mL。Sachin等（2010）、Aditi等（2013）研究表明，紫莖澤蘭提取物具有廣譜殺滅病原菌的活性，但紫莖澤蘭作為入侵物種，其根、莖和種子皆可再生繁殖，不能直接返田使用，本研究將紫莖澤蘭烘干打粉后施用，對三七生長無顯著抑制作用，可作為三七根腐病的田間覆蓋物推廣應用。紫莖澤蘭的倍半萜類是研究最多的抑菌物質，杜松-3-烯-2，7-二酮等對立枯絲核菌有很強的抑菌效果（Kundu et al.，2013），9-羰基-10Hβ澤蘭酮和9-羰基-10，11去氫澤蘭酮加速了鏈格孢菌和腐皮鐮孢菌菌絲和分生孢子的衰老凋亡，破壞卵菌細胞壁和細胞膜的完整性，造成細胞器解體，DNA聚合酶的活性下降影響病原菌細胞內部代謝和自我基因的復制（Liu et al.，2016）。因此，紫莖澤蘭的化學組分在抑菌作用上有巨大潛力，可開發為植物源殺菌劑進行間接利用，兼顧對入侵雜草的科學防除，具有較高的生態效益。

刃天青（Resazurin）是非熒光染料，在活細胞的多種還原酶作用下可將藍色的刃天青還原成粉紅色的熒光染料——試鹵靈（Resorufin）。本研究在預試驗中試用了標準MH液體稀釋法、平板劃線培養法和活菌計數法，由于植物源提取物顏色深，較多呈墨綠色，因而對需要觀測的液體稀釋法和活菌計數法使用受限。刃天青微孔板顯色法是利用活細胞線粒體酶可將藍色刃天青還原為粉紅色的原理，通過簡單的顏色區別來判定MIC終點，該方法具有以下優點：（1）簡便節約，提取物用量僅需100 μL;（2）準確，排除了人為計數主觀因素干擾;（3）快速，僅需4 h孵育得出結果;（4）靈敏，對低濃度菌液也能快速顯色。本研究顯示，刃天青微孔板法可清晰辨別最小抑菌濃度，避免了提取物顏色深難辨別的難題，可作為植物源提取物最小抑菌濃度的最佳測定方法。

4 結論

萬壽菊和紫莖澤蘭對3種三七根腐病致病菌的綜合抑菌效果較強，且對三七生長無顯著的化感作用，可作為三七根腐病綠色防治的植物源推廣應用，其中，萬壽菊可直接采收后作為覆蓋物返田利用，紫莖澤蘭需烘干打粉后施用。刃天青微孔板法可作為植物源提取物最小抑菌濃度的測定方法。

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（責任編輯 麻小燕）