液相色譜聯合串聯質譜法檢測中藥制劑及保健品中非法添加的質子泵抑制劑*

陳乃江，楊 穎，李 玲

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 連云港 222006）

質子泵抑制劑（PPI）是治療胃病的首選藥物[1-2]。目前，國內已有奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、埃索美拉唑5個該類藥品上市，其中埃索美拉唑為奧美拉唑的左旋異構體。不法商人受利益驅動，在中藥制劑和護胃保健品中非法添加PPI，以使其符合宣稱的療效。普通消費者在不知情的情況下長期服用，易造成身體慢性傷害。對此，本研究中參考文獻[3-13]，建立液相色譜聯合串聯質譜（LC-MS/MS）法進行相應檢測?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient Technologies 6530 Q-TOF型液質聯用儀（美國Aglient公司）；BP211D型十萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）；MX-F型渦流混合器（美國Scilogex公司）；SYWQ800型超聲波清洗器（山東申儀電子科技有限公司）；TDL80-2B型臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2 試藥

猴菇飲口服液（樣品 A，批號為 20170607、20181018）、山藥粉（樣品 B，批號為 20180317）、養胃多乳酸菌飲品（樣品C，批號為180311）、健胃消食片（樣品 D，批號為 170136）、胃康寧膠囊（樣品 E，批號為20170516）、香砂平胃丸（樣品 F，批號為 170602）、胃蘇顆粒（樣品 G，批號為 17120684），奧美拉唑鈉對照品（批號為100760-201504，含量95.2%）、雷貝拉唑鈉對照品（批號為100658-201404，含量98.2%）、泮托拉唑鈉對照品（批號為100575-201505，含量95.8%）、蘭索拉唑對照品（批號為100709-201304，含量99.8%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

混合對照品溶液：稱取奧美拉唑鈉、雷貝拉唑鈉、蘭索拉唑、泮托拉唑鈉的對照品各10 mg，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得單一對照品貯備液，量取1mL，置同一100mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

供試品溶液：取樣品A 1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得A供試品溶液。取樣品B約0.1 g，研細，置100 mL容量瓶中，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理10 min，加甲醇定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得B供試品溶液。取樣品C約2 g，置50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50℃條件下水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，8 000 r/min離心5 min，取水相，移至50 mL容量瓶中，于殘渣中加水20 mL，渦旋混勻后超聲處理5 min，8 000 r/min離心5 min，取水相，移至同一50 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得C供試品溶液。取樣品D約0.1 g，研細，置100 mL容量瓶中，加甲醇超聲處理20 min，冷卻至室溫，加甲醇定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得D供試品溶液。

陽性對照溶液：取樣品A 2份，每份100 mL，每份均添加單一對照品貯備液，即得質量濃度分別為1，10 mg/kg的陽性對照溶液，取1 mL，分別置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，即得陽性對照溶液Ⅰ、Ⅱ。

空白對照溶液：以甲醇為空白對照溶液。

2.2 檢測條件

色譜條件：色譜柱為Agilent Poroshell 120 EC C18柱（2.1 mm ×50 mm，2.7 μm）；流動相為甲醇 -10 mmol/L醋酸銨溶液（40 ∶60，V/V）；流速為 0.3 mL/min；柱溫為 30℃；進樣量為 1 μL。

質譜條件：離子模式為電噴霧離子化（ESI）正離子模式；干燥氣溫度325℃；霧化氣壓力35 psi；毛細管出口電壓100 V；干燥器流量8 L/min；毛細管電壓4 kV；碰撞能電壓10 V；質量掃描范圍，即質荷比（m/z）50～1 000，其中奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑分別為 346.122 0，360.137 6，370.083 2，384.082 4。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：精密量取混合對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣，理論板數以雷貝拉唑鈉峰計大于3 000，各待測成分峰間的分離度均大于1.5。

檢測限考察：分別精密量取混合對照品溶液適量，倍比稀釋，并按擬訂試驗條件進樣測定，以信噪比（S/N）10∶1計算檢測限。結果檢測限為0.01 ng。

精密度試驗：取混合對照品溶液適量，按擬訂試驗條件連續進樣測定6次，記錄離子信號強度。結果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號強度的RSD均小于1%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.1項下陽性對照溶液Ⅰ、Ⅱ（批號為 20181018）各適量，分別于室溫下放置 0，4，8，16，24，48 h時，按擬訂試驗條件進樣測定，記錄離子信號強度。結果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號強度的RSD分別為 2.4%，1.5%，1.8%，2.5%（n=6），表明陽性對照溶液Ⅰ、Ⅱ在室溫下放置48h內基本穩定。

重復性試驗：精密稱取樣品（批號為20181018）適量，依法制備供試品溶液，各6份，按擬訂試驗條件進樣測定，記錄離子信號強度并計算含量。結果奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑離子信號強度的RSD分別為 1.4%，1.0%，0.8%，1.2%（n=6），表明方法重復性良好。

2.4 樣品中質子泵抑制劑檢測

取6批樣品及2批陽性對照溶液Ⅰ各適量，分別依法制備供試品溶液，再按擬訂試驗條件進樣測定，平行測定3次，記錄離子信號強度。結果10批樣品中均未檢出質子泵抑制劑，陽性對照溶液中4種質子泵抑制劑均可檢出。

2.5 色譜圖及具體對照溶液質譜圖

詳見圖1至圖3。

3 討論

質子泵抑制劑類藥品均是弱堿性化合物，在以10 mmol/L 醋酸銨溶液 -甲醇（40∶60，V/V）為流動相，選擇ESI正離子模式下，均可檢出奧美拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑。蘭索拉唑雖不是以成鹽對照品狀態進樣，但由于其分子有易與鈉離子結合的作用位點（醚鍵上的氧），由于其他對照品引入了鈉，導致在質譜圖中蘭索拉唑[M+Na]392.0峰比[M+H]370峰強，其他對照品一級質譜離子峰均是脫鈉峰。

取混合對照品溶液，選ESI離子化模式，直接進樣，進行質譜條件優化。本試驗中分別考察了不同毛細管出口電壓（150，130，100，90 V）、霧化氣壓力（30，35，40 psi）、干燥氣溫度（310，325，335，350 ℃）及干燥器流量（11，9，8，7 L/min）條件下的離子信號強度，結果最優質譜為毛細管出口電壓100 V，霧化氣壓力為35 psi，干燥氣溫度為325℃，干燥器流量為8 L/min。

圖1 高效液相色譜圖

圖2 一級質譜圖

圖3 二級質譜圖

質譜檢測一般都是痕量或微量檢測，常見檢測限度都是ng或pg級別，而質子泵抑制劑藥品常見治療單次給藥劑量為10，20，40 mg，若讓該類中藥制劑及保健品刻意達到突出的療效，其加入量自然傾向于接近或遠大于治療劑量，可超過質譜的檢測質量濃度，一般情況下質譜作為檢測手段無需擔心檢測限度和靈敏度的問題。