HIV感染者外周血T淋巴細胞亞群變化對機會性感染的預測價值

程 芳，蔣賢高，劉賽朵，葉新春，施伎蟬

(溫州市第六人民醫院傳染科，浙江 溫州 325000)

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染是指其侵犯人體的免疫器官及系統，使得機體免疫功能受損，進而出現各種機會性感染的一組臨床綜合征，臨床上又稱為艾滋病(AIDS)[1]。隨著現代社會不斷發展，人口流動速度不斷加快，HIV感染已經到了廣泛流行的快速增長期。截止2016年9月30日的數據[2]顯示，我國存活的HIV感染患者達到了384 384例，全球排第14位，亞洲第2位[3]，可見AIDS正在嚴重威脅我國居民身體健康與安全。HIV感染后，患者一般會出現免疫抑制，誘發各種機會性感染或腫瘤而導致死亡[4]。機會性感染(opportunistic infections，OIS)最常見的部位是呼吸道，尤其是肺臟。HIV感染者若合并機會性感染，則提示患者已經符合AIDS診斷標準，大大增加了治療的難度及治療效果。有研究顯示80%～90%的AIDS患者不是死于AIDS本身，而是死于機會性感染[5]。T淋巴細胞亞群是反映機體細胞免疫功能的重要指標之一，其表達水平是否能預測HIV感染者發生機會性感染的風險，目前仍缺乏相關報道。本研究通過回顧性分析新發現HIV感染者外周血T淋巴細胞亞群表達狀態連續監測情況，以期找出T淋巴細胞亞群表達狀態改變情況與機會性感染的相關性，為盡早進行有效治療及控制病情，改善患者預后提供理論支持?，F將結果報道如下。

1資料與方法

1.1基礎資料

選取2016年1月至2018年8月在溫州市第六人民醫院感染性疾病科首診發現的HIV感染者28例作為研究對象，年齡為32～62歲，平均年齡為(44.24±8.52)歲。

1.1.1納入標準

①符合2015版《艾滋病診療指南》中相應的HIV感染診斷標準[1]：a.血清HIV-RNA陽性；b.患者無其他臨床癥狀，可有全身淋巴結腫大；c.CD4+T淋巴細胞≥200個/μL。②血清HIV-RNA陽性，經浙江省省或溫州市市或其他有確證資格的CDC，采用蛋白印跡試驗(W-B)確證。③無乙型肝炎/丙型肝炎者。④既往無肺結核/其他結核病病史。⑤連續監測期間未發生機會性感染者。⑥患者及家屬簽署知情同意書。

1.1.2排除標準

①不配合完成相關檢測者。②既往有合并腫瘤者。③過去1個月內接受過增強免疫相關治療者。④符合AIDS診斷標準[1]，即血清HIV-RNA陽性，HIV抗體陽性，同時具有25種機會性感染相關臨床癥狀中的1種或者多種者。

1.2方法

1.2.1實驗分組

根據患者在連續4次監測后1個月是否出現機會性感染進行分組，發生機會性感染患者8例，記為發生機會性感染(OIS)組，男6例，女2例，年齡為36～62歲，平均年齡為(44.45±9.48)歲；未發生機會性感染者20例，記為未發生機會性感染(NOIS)組，男14例，女6例，年齡為32～60歲，平均年齡為(44.08±8.12)歲。兩組的性別、年齡比較差異均無統計學意義(t值分別為1.34、1.12，P值分別為0.18、0.21)，具有可比性。

1.2.2 T淋巴細胞亞群的檢測

①樣本制備。用真空抗凝管(K3EDTA)采集靜脈血5mL，試管上標記清楚患者的姓名及檢測時間。在旋渦器中等速度混勻(倒立/正立時間5min)，使用開蓋器打開試管蓋，加入乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-K2)試劑(美國Becton Dickinson 公司，型號Invitrogen-NP0060)，患者抗凝全血試管顛倒混勻>5次，混勻后，在避光室溫條件下進行孵育2h，整個樣本制備過程中均在<25℃室溫下進行操作，時間<48h完成。②上機檢測。將制備好的樣本使用美國Becton Dickinson公司生產流式細胞檢測儀器BD FACSCalibur完成CD4+T的檢測，操作過程嚴格遵守儀器相關說明書。③結果讀取。通過利用血常規結果中淋巴細胞計數值、流式細胞術檢測CD4+T亞群占比，計算出CD4+T數值。計算公式為CD4+T細胞數量=血常規結果中淋巴細胞計數值×流式細胞術檢測CD4+T細胞分數。每月檢測1次，共檢測4次。

1.2.3機會性感染的診斷

參照2011年由衛生部頒布《艾滋病診療指南》中關于機會性感染診斷標準：①持續發熱時間超過1個月。②慢性腹瀉時間超過1個月，且每日腹瀉次數為4～5次。③腫瘤。④中樞神經系統感染。⑤青年患者出現癡呆。⑥明確合并結核病、弓形體病、卡氏肺孢子菌肺炎等感染。⑦不明原因出現帶狀皰疹。

1.3觀察指標

詳細記錄患者每次檢測的CD4+T細胞數量，△CD4+T細胞數量=前次CD4+T細胞數量-后次CD4+T細胞數量；其中△1=(第1次CD4+T細胞數量-第2次CD4+T細胞數量)，△2=(第2次CD4+T細胞數量-第3次CD4+T細胞數量)，△3=(第3次CD4+T細胞數量-第4次CD4+T細胞數量)；進而計算CD4+T細胞下降比例(%)=△CD4+T細胞數量/CD4+T細胞數量×100%，其中△1%=(第1次-第2次)/第1次×100%，△2%=(第2次-第3次)/第2次×100%，△3%=(第3次-第4次)/第3次×100%。詳細記錄患者連續監測4次后1個月內發生機會性感染的情況，機會性感染診斷以患者出院診斷為準。

1.4統計學方法

2結果

2.1 OIS組與NOIS組多次重復測量CD4+T細胞數量的對比

OIS組第3次及第4次測量的CD4+T細胞數量均顯著低于NOIS組，差異均具有統計學意義(均P<0.05)；OIS組及NOIS組不同時間點的CD4+T細胞數量對比，差異均具有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

2.2 OIS組與NOIS組△1、△2、△3的對比

OIS組的△1、△2、△3均顯著高于NOIS組，差異均有統計學意義(均P<0.05)；OIS組及NOIS組不同時間點的CD4+T細胞數量差值對比，差異均具有統計學意義(均P<0.05)見表2。

2.3 OIS組與NOIS組CD4+T細胞數量下降比例△1%、△2%、△3%的對比

OIS組的CD4+T細胞數量下降比例△1%、△2%、△3%均高于NOIS組，差異均有統計學意義(均P<0.05)；OIS組及NOIS組不同時間點的CD4+T細胞數量下降比例對比，差異均具有統計學意義(均P<0.05),見表3。

表1 兩組多次重復測量CD4+T細胞數量的比較結果

表2 兩組△1、△2、△3的比較結果

表3 兩組CD4+T細胞數量下降比例△1%、△2%、△3%的比較結果

2.4 ROC曲線分析情況

分別對4次檢測CD4+T細胞數量及△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%進行ROC曲線分析，發現△2、△3、△1%、△2%、△3%的ROC曲線面積均較大，同時特異度和靈敏度均較高，見表4和圖1。

表4 各參數的ROC曲線分析結果

圖1 ROC曲線分析

3討論

3.1機會性感染的發生是AIDS患者標志之一

人體感染HIV病毒后，HIV病毒會破壞機體的CD4+T淋巴細胞，導致CD4+T淋巴細胞數量減少及功能下降，最終發展成為AIDS患者，機會性感染或腫瘤的發生是AIDS患者標志之一，同時也是造成AIDS患者的死亡主要原因。但從HIV感染發展至AIDS的過程具有較大的個體化差異，短則0.5年，長則可達20年，平均7～10年。近年來涌現出不同作用靶點、不同作用機制的抗HIV病毒藥物，治療效果有較大的改善[6]。但臨床上對治療效果有多種判斷，未達成統一共識，而對HIV感染者而言，如何在HIV感染者中鑒別出那些快速發展為AIDS患者，對這些患者進行有針對性治療，延長其發展至AIDS患者時間顯得尤為重要。

3.2連續監測AIDS患者CD4+T淋巴細胞動態改變的價值

本研究從HIV病毒侵犯對象的CD4+T淋巴細胞入手，研究發現檢測CD4+T淋巴細胞數量在預測HIV感染者近期是否發生機會性感染的價值不高。分析其原因：①HIV感染時間難以確定。HIV/AIDS患者流行病學特征如年齡[7]、不同傳播途徑[8]、性別、民族、地區、感染時間均會影響T淋巴細胞亞群表達狀態[9]；其中年齡、不同傳播途徑、性別、民族、地區因素都是比較明確的，而HIV感染時間是影響CD4+T淋巴細胞表達水平的主要因素之一[10]，但這個因素是難以確定的。②未感染HIV前的CD4+T淋巴細胞水平無法確定。未感染HIV的健康人群CD4+T淋巴細胞參考值為(865.73±289.97)/mm3，可見該參考值的范圍較廣，如果無法參考患者HIV感染前的CD4+T淋巴細胞水平，直接判斷患者的CD4+T淋巴細胞水平有些不足之處[11]。鑒于以上原因，本研究通過連續監測患者CD4+T淋巴細胞動態改變，可很好地規避上述兩個無法確定的因素。本研究發現△2、△3、△1%、△2%、△3%的ROC曲線面積較大，同時特異度和靈敏度均較高，在預測HIV感染者近期是否發生機會性感染具有較大的價值。通過分析發現，若再次檢測CD4+T淋巴細胞數量較前一次檢測CD4+T淋巴細胞數量下降值超過25.5或更高，下降比例達到13.96%，說明機體的CD4+T淋巴細胞正在受到破壞，免疫功能受損，提示機體很快會發生機會性感染而演變為AIDS患者，威脅患者的預后，需積極治療。但本研究納入的樣本量較小，仍需要更大樣本數來進一步證實更為準確的截斷值。本研究還在持續納入新的病例數。

3.3總結

通過連續監測HIV感染者CD4+T淋巴細胞數量改變情況，如有CD4+T淋巴細胞數量突然下降幅度較大，提示很有可能HIV感染者免疫功能受到破壞，可能發生機會性感染，需積極治療。