2種不同溶出介質測定氯雷他定片溶出度方法比較

羅遠純 張 磊

（遵義市產品質量檢驗檢測院 貴州遵義 563000）

1 前言

氯雷他定在生物藥劑學（BCS）分類中屬于Ⅱ類弱堿性藥物，其溶解度低、滲透性高，它在體內溶出是吸收的限速步驟。如果建立體內外相關性，可以通過測定體外溶出度來反映藥物在體內生物利用度的大致情況，體外溶出度實驗是評價口服固體制劑內在質量的一種重要方法。在溶出度的考察中，現行《中國藥典》2015版以鹽酸溶液（9→1 000）500 mL 為溶出介質[1]，但由于氯雷他定是水不溶性物質，且在25℃下氯雷他定的電離常數為4.85～6.00，同時也是弱堿性藥物，其溶解特性為：在強酸溶液中溶解，而在弱酸溶液或水中幾乎不溶，在較低的pH環境下，如0.1 mol/L的鹽酸中易溶，但形成質子化的含氮堿，透膜能力反而下降，影響體內吸收[2]。鹽酸的酸性較強，能使弱堿性的氯雷他定較好地溶出，但這種以鹽酸為介質的測定方法不能真實體現出與體內溶出相似的條件，同時也無法區別仿制藥與原研藥的溶出度差異。因此，對于藥物的溶出度檢查，除了《中國藥典》2015版的方法之外，有必要進一步研究。在以往對氯雷他定片劑溶出度的研究中，崔飆等[3]、李蓉等[4]均采用紫外分光光度法測定氯雷他定片的含量，該方法簡便快捷，精密度和穩定性良好，準確度高，應用較為廣泛。劉屹等[5，6]則用不同pH的溶劑作為溶出介質，進行溶出度的考查。因此，本文試圖尋找一種更為合理的溶出介質用于紫外分光光度計法測定氯雷他定片劑的體外溶出度，并進行方法學驗證。再利用所建立的方法用于不同廠家氯雷他定制劑的溶出度測定，并與現行《中國藥典》方法進行比較。

2 儀器、試劑及樣品

2.1 儀器

賽多利斯電子天平（BSA224S）；梅特勒—托利多電子分析天平（AB265—S）；智能藥物溶出儀（D—800 LS）（天津天大天發科技有限公司）；KQ-300DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；紫外分光光度計（島津UV-2700）。

2.2 試劑及樣品

鹽酸；一水合檸檬酸；磷酸氫二鈉；氯雷他定片（10 mg）。

3 方法與結果

3.1 溶出介質的配制

（1）pH 1.0 的鹽酸溶液：根據《中國藥典》（ChP）2015版，以鹽酸（9→1 000）配制成pH 1.0的濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液，經0.45 nm濾膜過濾備用。

（2）pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液：精密稱取0.485 9 g磷酸氫二鈉、3.861 1 g一水合檸檬酸，加水稀釋至5 000 mL，充分攪拌使之混合均勻，用磷酸或氫氧化鈉試液調節至溶液pH為3.0±0.05，經0.45 nm濾膜過濾備用。

3.2 專屬性實驗

精密稱取氯雷他定對照品10.12 mg于10 mL容量瓶中，用鹽酸（9→1 000）溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定儲備液。精密量取儲備液1 mL到50 mL量瓶中，用鹽酸（9→1 000）溶液稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定對照品溶液1。另精密稱取處方比例的輔料，用同一稀釋劑制成空白輔料溶液，經0.45 nm濾膜過濾，取續濾液，待測。以0.1 mol/L的鹽酸溶液為空白對照，照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則0401紫外分光光度法，在200～400 nm波長范圍內掃描，記錄紫外吸收光譜曲線（圖1）。根據掃描的結果可知，氯雷他定在273.4 nm處有最大吸收，輔料在276 nm附近基本無吸收，說明不干擾本品的溶出度測定。另精密稱取氯雷他定對照品10.33 mg，以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶劑，同法掃描，結果表明氯雷他定在277.6 nm波長處有最大吸收（圖2），因此，測定波長仍設定為（276±3）nm。

3.3 線性關系考察（標準曲線的制備）

精密量取儲備液1 mL到50 mL容量瓶中，用pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定對照品溶液2。分別精密量取對照品溶液1、2各1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL 分置 10 個 10mL EP管中，并分別用0.1 mol/L鹽酸溶液和pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋至5 mL，搖勻，即得2個系列標準溶液。按照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則0401紫外-可見分光光度法于276 nm波長測定各溶液吸光度。以對照溶液的濃度（X）為橫坐標，吸光度（Y）為縱坐標作標準回歸曲線，分別得以pH 1.0鹽酸為溶劑的標準曲線（圖3），回歸方程為y=0.0233x+0.028，R2=0.999 8（n=5）；以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶劑的標準曲線（圖 4），回歸方程為 y=0.021 5x-0.011，R2=0.999 1（n=5）。結果表明，氯雷他定在質量濃度為4.05～20.24（4.13～20.66） μg/mL 時，與吸光度線性關系良好。

圖1 光譜掃描圖（介質鹽酸）

圖2 光譜掃描圖（介質緩沖液）

3.4 溶出度測定

選取3個不同廠家生產的氯雷他定片，照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則 0931：溶出度與釋放度測定法第二法，即轉速為50 r/min，分別用2種溶出介質測定溶出度（鹽酸為吸光度1和溶出度1，緩沖液為吸光度 2和溶出度 2）。 分別于 5、15、30、45、60 min時取溶液5 mL經0.45 nm濾膜過濾，用續濾液作為供試品溶液，同時向溶出杯中補充5 mL介質。依法在上述測定的最大吸收波長處測定吸光度，帶入回歸方程計算其不同時間點下的濃度及溶出度（表 1）。

圖3 標準曲線1

圖4 標準曲線2

表1 不同時間濃度與溶出度

4 討論

本文根據建立的紫外-可見分光光度法測定氯雷他定片體外溶出度的方法，進行方法學考察驗證，實驗結果充分證明了本法用于測定氯雷他定片體外溶出度的可行性和準確性。且用于不同廠家氯雷他定片溶出度測定結果表明，以鹽酸（9→1 000）溶液為溶出介質時，各廠家氯雷他定片劑的溶出過程略有差異，但溶出曲線基本相同，3個廠家的制劑均符合要求，但這種介質的區分力不大，無法更加突出地表明各廠家制劑的溶出差異；以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶出介質時，各溶出曲線相似性較差，體外溶出行為有較大的差異，可能會導致生物利用度的差異。氯雷他定是弱堿性藥物，在pH 1.0鹽酸溶液中溶解度大于在pH3.0磷酸鹽緩沖液中的溶解度，但是pH3.0磷酸鹽緩沖液作為溶出介質其區分力優于pH 1.0鹽酸溶液。為了更好地根據體外溶出實驗反映體內溶出行為，建議采用能夠建立起體內外相關性較強的具有區分力的溶出介質進行溶出度實驗。