黃精組培技術研究

朱強　岑旺　余信　路登宇　蔣紅梅

摘? ?要：為了更好地對黃精這一重要植物進行培養，相比于目前集中研究的藥理和人工培養以及成分方面來說，更需要注重進行組織培養方面的探究，而目前在這方面，徐紅梅、徐中川研究了植物生長調節劑對黃精體外發育的影響，并對黃精的組織培養和快速繁殖進行了研究。殷紅等人在進行黃精無性系建立的結果方面，是通過能發芽為材料進行生長點、不定芽分化等多方面的研究，最后由此而進行生根和移栽的程序，這與本次所進行的愈傷組織誘導具有一定的不同之處。相對來說，通過后者分化不定芽、進一步誘導根、完成植株再生的全過程，為黃矮病快速繁殖體系的建立奠定了基礎。

關鍵詞：黃精;組培技術;研究

文章編號： 1005-2690（2020）05-0008-01? ? ? ?中圖分類號： S567.239? ? ? ?文獻標志碼： B

為建立黃精組織培養快速繁殖體系，以黃精帶芽根頸為外植體，消毒后將其置于含不同配比激素的培養基中進行培養，結果表明：培養基MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA誘導不定芽生長狀況最好，平均能誘導5.5個不定芽，生長不定根平均數為3根;1/2 MS+0.8 mg/L NAA誘導不定根數最多，平均為20.5根。

1? ?黃精的培養

黃精是百合科黃精屬多年生草本植物，其干、根、莖可用作藥物。根據中醫經典記載，黃精是一種珍貴中藥，具有益氣、補腎、補肺、健脾的作用，主治肺干咳、體虛、心短、心悸氣短、長期缺水口干、糖尿病、高血壓等疾病，并對心血管疾病、肺結核、慢性肝炎、抗細菌、解毒、抗疲勞、抗衰老、低血糖、降血脂、抗腫瘤等方面有良好的療效。其不僅可以作為藥物，還可以作為保健食品。自古以來，人們就認為黃精是延年益壽的最佳產品，因此對黃精的需求量很大。長期以來，黃精的主要來源是野生采集。黃精的栽培技術尚未引起重視，然而實際情況下黃精在市場上的需求量較大，傳統以野生資源為主要的黃精來源，是不能符合目前市場需求和規模的，而實際上過度的采集也出現了一些不好的影響，反而破壞了黃精的生態環境和野生資源?；诖?，人們開始實踐黃精野生品種的高產栽培技術。目前，黃精繁殖技術主要有種子繁殖和根頸繁殖。由于黃精種子采集困難，種子發芽率低，種子繁殖和出苗時間長，大大增加了黃精的栽培成本，不利于黃精的大規模栽培。因此，在目前的人工栽培中，主要依靠根頸繁殖，但這種方法繁殖系數低、需要根頸量大，不經濟，而且限制了黃精的產量潛力，不利于種植管理和推廣，因此阻礙了種植面積的擴大。由于黃精種子采集困難、發芽率低、苗期長，有性繁殖方式不能滿足生產需要。

試驗采用無性繁殖方式，基本培養基為MS，加入30 g/L蔗糖和5 g/L瓊脂粉，pH值為5.8～6.0。其是在培養室培養的。光周期的起止時間為8：00～20：00，白天溫度25 ℃，夜間溫度18 ℃;光照強度2 000～2 400 lx，濕度60%。相對于有性繁殖來說，對于母本本身所具有的一些優良現狀，可能會因為有性繁殖而出現丟失，那么無性繁殖則可以盡可能保持母本優良性狀，并且同時達到快速繁殖這一目的，使得研究可以解決品種繁殖的問題。黃精離體生根技術研究是李文進等人所進行的;劉紅梅等對黃精組織快速繁殖技術進行了研究;周新華等培養了黃精的芽和不定芽。結果表明，每根芽可誘導6.6個不定芽。周新華等還研究了2015年黃精的增殖和生根系統，發現3—4月采集的外植體比3月采集的外植體長。結果表明，黃精是生根和誘導不定芽的理想培養基，生根苗成活率達92%以上。本研究通過對黃精帶芽根頸的培養，尋找最適宜的培養基。

2? ?進行黃精培養的具體方法和材料

（1）時間選取在2016年12月—2017年6月，地點選取在貴州省六盤水市。在此處進行黃精的選取，以保證其品種。切斷其根頸芽之后無菌處理，在MS培養基上進行無菌根頸芽的接種。外植體消毒可以用水清洗土壤，用小刀將帶芽根頸切碎，用飽和無酶洗滌劑浸泡30 min（每隔幾分鐘順時針輕輕攪拌），再用自來水沖洗1～1.5 h。消毒方面使用紫外線，消毒30～40 min，同時打開風扇。大約20 min后，使用超凈工作臺進行接種，接種期間不要關閉風扇。將沖洗好的供試品移至超凈臺上，用無菌紙將外植體表面的水擦干，用75%乙醇浸泡消毒30 s，再用無菌水沖洗3次，每次3 min，然后用0.1%氯化汞溶液浸泡6～10 min，之后用無菌水沖洗6～7次（每次3 min），再用無菌紙吸干外植體表面的水，即對成體外植體進行消毒。0.1%氯化汞溶液浸泡時間長，地下根頸表面細菌多，難以滅菌。因此，用0.1%氯化汞溶液在5～15 min內進行10次以不同濃度作為梯度的對比試驗，以更好地對接種后的污染和死亡兩方面的情況進行分析，最終選取最優的結果，作為表面消毒時間。在MS培養基上接種黃精無菌根頸芽，選擇6-BA、NAA等不同濃度的外源激素作為配比。每種處理進行培養期的制作時，首先要求考慮溫度為（25±2）℃的環境溫度，然后放入蔗糖和瓊脂30 g/L、7.5 g/L，在pH值為5.8～6.0的情況進行，光照強度2 000～3 000 lx，光照時間10～16 h/d，選擇不定芽增殖生長的最佳培養基，計算不定芽數。黃精不定根是由不定芽增殖產生的不定芽誘導的，培養環境溫度為（25±2）℃，光照強度2 000～3 000 1x，光照時間為10～16 h/d，兩次繼代后，記錄各培養基中不定根的平均生長情況。

比較了0.1%氯化汞溶液的浸泡時間。結果表明，氯化汞適宜于黃精的時間根據具體情況為8 min，在各梯度5～10 min內，5 min污染較為嚴重而不能進行試驗，10 min以上很明顯地出現了較多數量的死亡苗。之后進行10 d的誘導培養，芽開始生長，基部明顯擴大。30 d后，明顯出現不定芽分化。這一點則表明，本次試驗采取了較為正確的滅菌方法和培養條件。結果表明，在整個不同角度研究之中，MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA是10種培養集中達到最佳效果的，就結果來看，出現了較多的不定芽數。而在具體的考察當中，黃精在2號培養基中的生長僅低于6號培養基，7號培養基十分突出平均生根數量。然而在綜合考慮生根速度和不定芽的生長速率方面，仍然是6號培養基有著較高的優勢。7號培養基的平均生根數略高于6號培養基。綜合考慮，6號培養基更適合于黃精的增殖和培養。其他培養基中不定芽的生長速率遠低于6號培養基。所以進行黃精誘導良好培養基配方1/2 MS+0.8 mg/L NAA來說，NAA濃度方面出現了問題，0.2～0.8 mg/L NAA對于不定根有很明顯的影響，NAA濃度為0.8 mg/L時達到最大值的不定根數目，這次增大則反而會使其減少。

（2）本次試驗選取野生的黃精塊莖組織，地點選取湖南湘西大溶洞，是屬于湘西農業科學研究院生物技術研究中心，經過長時間培養所獲取的，因此品種較為優良，而且具有較高的價值。那么整個培養過程是較為常規的，在60 d后進行完整發育塊莖的生產苗移栽。根據組培苗塊莖、根和葉的有無分為4種類型，即塊莖、根和葉（Ⅰ），塊莖、根和葉（Ⅱ），塊莖、根和葉（Ⅲ），塊莖、根和葉（Ⅳ）。將100株不同類型的黃精試管苗移栽到4個試驗小區，分別于春、秋季兩次移栽后計算成活率。根據不同基質設置6個處理，分別為：細菌殘渣、細菌殘渣∶珍珠巖=2∶1、細菌殘渣∶珍珠巖∶河沙=2∶1∶1、菜園土、泥炭土和菜苗營養土。將試管苗從培養箱移入煉苗箱，置于自然環境中7～10 d，打開瓶蓋，放置3～5 d。用鑷子將經過精細處理的組織培養苗取出，用清水沖洗基部瓊脂，挖一個1.5～2.0 cm深的洞，洞的大小適合放塊莖，洞的深度適合展開組培苗的根系。最好用土壤覆蓋塊莖，不要壓實。移栽后及時噴水。

結果表明，莖、葉對移栽成活率無明顯影響。生根是影響移栽成活率的關鍵，無根苗根本不能成活。黃精組培生根塊莖一般在同年10—11月、第二年3—4月移栽，而在同年春季，由于黃精在休眠方面有著嚴重的情況，直接栽植可能會出現不良后果。那么就這一情況所帶來的影響來說，就需要考慮解決這一問題，縮短黃精的生長周期，設計了低溫處理試驗、赤霉素浸泡試驗和26 ℃沙貯試驗。結果表明，經低溫處理和赤霉素浸種試驗后，黃精明顯提升了發芽率，但是相對進行低溫處理和赤霉素不浸泡之后有明顯的發芽率降低情況?；|關于水量滲透等方面是影響植株生長的關鍵。培養基為細菌殘渣∶珍珠巖=2∶1時與其他處理相比，具有土壤疏松、透氣性好、保水性好等特點。

3? ?總結

通過本文的實際研究來看，本次中藥黃精0.1%升汞8 min可以達到最佳的消毒要求，此外，在MS+

2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA下芽生長狀況最為良好，而1/2 MS+0.8 mg/L NAA則有效增加了不定根數。