蝴蝶蘭‘紅天鵝’組織培養及快繁技術

王勇

（福建省林業科技試驗中心，福建南靖363600）

蝴蝶蘭（Phalaenopsis spp.）屬蘭科蝴蝶蘭屬，具有“蘭中皇后”的美稱，其觀賞價值與經濟價值較高，近年來頗受消費者的喜愛[1]。目前，蝴蝶蘭新品種大部分依舊是引進自臺灣，因此，推廣自主知識產權的新品種對提高我國蝴蝶蘭產業競爭力具有重大意義。

蝴蝶蘭‘紅天鵝’是以‘寶島玫瑰’和‘超群火鳥’為親本，通過雜交育種方法選育出的新品系，于2015 年通過了福建省林木品種審認定。該品種具有花瓣質地厚，花色深紅，開花早，花期長，耐低溫，適合中國大陸年銷市場等優點，具有很好的應用前景。由于蝴蝶蘭的后代易分離、生長不同步，并且隨種植年限的增加，品種容易產生退化，因而組織培養技術的研究顯得尤為重要。目前，有關蝴蝶蘭的組織培養的文獻較多[2-6]，組培技術比較成熟，但不同蝴蝶蘭品種的組培條件差別較大，該文以自主研發的蝴蝶蘭新品種‘紅天鵝’為誘導材料，開展組織培養技術研究，優化其外植體誘導、繼代增殖、生根誘導、移栽馴化等條件，以期建立高效的組培快繁技術體系，為蝴蝶蘭新品種‘紅天鵝’的推廣應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

蝴蝶蘭‘紅天鵝’為福建省林業科技試驗中心自主研發的新品種，栽培于試驗中心的溫室大棚中。

1.2 方法

1.2.1 外植體誘導。將蝴蝶蘭‘紅天鵝’的花梗用剪刀剪掉花朵，用洗衣粉溶液浸泡20 min，在流水下沖洗20 min，之后放于超凈工作臺上待消毒。消毒步驟：先用75%酒精輕輕搖晃處理30～45 s，再用HgCl2分別消毒10、15、20、25 min，最后用無菌水清洗4～5遍，接種到誘導培養基中。誘導培養基為1/2MS+6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂7.5 g/L。

不同HgCl2消毒處理接種30 瓶，每個培養瓶接入1 個腋芽，試驗重復3 次，放置在培養室中培養20 d 后，統計污染率和萌發率。

1.2.2 增殖培養。在以MS+AD 5.0 mg/L+香蕉50 g/L+土豆50 g/L+蔗糖30 g/L+瓊脂7.5 g/L 為基礎培養基上，添加不同濃度6-BA 和NAA，設置6-BA 濃度分別為5.0、6.0、7.0、8.0 mg/L，NAA 為0、0.1、0.2、0.3 mg/L（表2），分析不同濃度6-BA 和NAA 對不定芽增殖系數及不定芽生長情況的影響。培養基代號分別為P1～P9，每種培養基接種30 瓶，每個培養接種5 叢不定芽，試驗重復3 次，放置于培養室中培養45 d 后，觀察不定芽生長情況并統計增殖系數。

1.2.3 生根誘導。以1/2MS+香蕉50 g/L+土豆50 g/L+C 1.0g/L+蔗糖15 g/L+卡拉膠7.0 g/L 為基礎培養基，分析比較不同濃度NAA 對不定根誘導的影響，NAA 濃度分別設置為0、0.4、0.6、0.8 mg/L。不同培養基代號分別為R1～R4。每個處理號接種30 瓶，每個培養瓶接入5 個芽，試驗重復3 次，放置于培養室中培養45 d 后，觀察生根情況并統計生根率。

生根率（%）=生根苗數/接種芽數×100。

1.2.4 煉苗與移栽。蝴蝶蘭組培生根苗長到3～5 cm，且有3～4 片葉及3 條以上粗壯的不定根時，可進行煉苗與移栽[7-8]。將培養瓶的蓋子打開，使組培苗逐漸適應外界的環境，從而增強其對外部環境的抗性。移栽時，用水先清洗掉粘在不定根的培養基，之后用高錳酸鉀溶液（0.1%）浸泡10 min，最后，將其晾干并定植。移栽的基質選擇5 種不同基質，代號分別為S1～S5，基質選擇松散，且通氣和透水性較好的基質（表5），每種不同基質移栽30 株，重復3 次，溫室大棚栽培30 d 后觀察移栽苗生長情況，統計移栽成活率。

1.3 培養條件

以上用到的培養基pH 均為5.80；組培培養溫度為23±2℃，光照強度為3 000 Lx，光照周期為10 h/d。移栽時白天溫度控制在25～28℃，夜間20～22℃，相對濕度為70%～80%。

2 結果與分析

2.1 不同HgCl2 消毒時長對花梗誘導的影響

蝴蝶蘭‘紅天鵝’的花梗經誘導培養20 d 后，開始萌發出不定芽（圖1）。由表1 可見，隨著HgCl2消毒時間的延長，污染率由75.5%下降至27.2%，當消毒處理時間由20 min 延長至25 min 時，污染率有所上升，但在0.01 水平上差異不顯著，而萌芽率則顯著降低。表1 中也可看出，消毒時間控制在20 min 內，蝴蝶蘭花梗的萌芽率高達92.2%，但當消毒時間延長，萌芽率則開始下降。綜合考慮消毒時長對污染率和萌芽率的影響，該試驗選擇HgCl2消毒時長為20 min。

表1 HgCl2 消毒時長對蝴蝶蘭花梗誘導的影響

2.2 激素濃度對不定芽繼代增殖的影響

將蝴蝶蘭的花梗誘導出的不定芽接種到繼代培養基中，觀察不定芽生長情況并分析增殖系數。由表2 可見，當培養基中添加一定濃度的6-BA 和NAA 時，有利于蝴蝶蘭‘紅天鵝’的繼代苗增殖培養。當6-BA濃度增加時，增殖系數也隨著提高。當6-BA 為6.0 mg/L 時，增殖系數為3.80，芽粗壯（圖2）；當6-BA為7.0 mg/L 時，增殖系數達到4.20，但是苗變得細弱；隨著6-BA 濃度增加到8.0 mg/L 時，增殖系數降低，繼代苗成團狀，苗單株不明顯，不利于后續的生根培養，這是因為高濃度的6-BA 反而不利于繼代苗的增殖，因此該試驗選擇6-BA 濃度為6.0 mg/L。由表2 所示，添加低濃度的NAA 對蝴蝶蘭的繼代增殖有促進作用，不添加NAA 時，增殖系數較低，但添加0.1～0.3 mg/L 差異不顯著，因此基于成本方面的考慮，該試驗選擇NAA 的濃度為0.1 mg/L。

2.3 不同生長素濃度對‘紅天鵝’生根誘導的影響

蝴蝶蘭‘紅天鵝’不定芽長到3～5 cm 時，并且有3 片葉子以上，將其切下并接入生根誘導培養基中，15 d 后開始長出白色根原基，45 d 后不定根長成（圖3）。由表3 可知，在添加NAA 的生根誘導的培養基中，蝴蝶蘭‘紅天鵝’生根率均能達到100%。在R1～R4 培養基中，NAA 濃度的變化對蝴蝶蘭生根時間的影響效果顯著。當NAA 濃度為0.4 mg/L 時，生根時間短至15 d，根數3～5 條，適合移栽。NAA 濃度增加到0.6 mg/L，生根時間反而開始延長，因而選擇蝴蝶蘭的生根誘導培養基為1 /2MS +NAA0.4 mg/L+香蕉50 g/L+ 土豆50 g/L+C1.0 g/L+ 蔗糖30 mg/L+瓊脂7.5 g/L。

2.4 不同移栽基質對‘紅天鵝’生根苗移栽成活率的影響

由表4 所示，經方差分析表明，蝴蝶蘭組培苗移栽在不同的基質中，其成活率之間的差異在0.05 水平上顯著。通過對不同移栽基質的成活率的比較，以水苔為基質，成活率最高，達90.1%，苗粗壯，根系良好，葉片展開（圖4）；其次是以蛭石為移栽基質，成活率達80.9%；以草炭：珍珠巖為1∶1 作為移栽基質時的成活率最低。這可能是由于蝴蝶蘭的根是肉質的氣生根，其適于在疏松、透氣且具有保肥保水性能的基質中生長。在表4 中的基質中，水苔尤其具有柔軟并且保水和肥力強的特點，適合作為蝴蝶蘭組培苗的移栽的基質。

表2 激素濃度對不定芽繼代增殖的影響

表3 不同生長素濃度對‘紅天鵝’生根誘導的影響

3 討論

‘紅天鵝’是福建省林業科技試驗中心和漳州森暉蘭花有限公司共同自主研發的新品種，于2015 年通過了福建省林木品種審認定，這個品種具有花瓣質地厚、花色深紅、開花早、花期長、耐低溫、適合中國大陸年銷市場等優點，具有很好的應用前景。目前還未在市場上大量推廣，因此其組織培養技術的研究對蝴蝶蘭新品種‘紅天鵝’甚至其他蝴蝶蘭品種的組織培養及快繁有較好的借鑒作用。

表4 不同移栽基質對‘紅天鵝’生根苗移栽成活率的影響

該試驗以‘紅天鵝’的花梗作為外植體，用0.1%的HgCl2進行消毒，摸索出適合外植體消毒的方案，使污染率降低到了27.2%，大大提高了蝴蝶蘭無菌外植體系建立的成功率，這與其他文獻報道的指標相比有一定的提高[2-6]。通過培養基的優化試驗，不定芽增殖系數達到3.80，生根率達100%，滿足了蝴蝶蘭‘紅天鵝’產業化生產的要求，為蝴蝶蘭新品種優質種苗的推廣應用提供參考。