華中部分地區發病豬群血清樣品PCV-2 病原學檢測

（長江大學動物科學學院，湖北荊州 434025）

豬圓環病毒（porcine circovirus，PCV）屬于圓環病毒科，是迄今為止脊椎動物中最小的DNA 病毒之一[1]。PCV 有多個血清型，如PCV-1、PCV-2及PCV-3 等[2-4]。PCV-1 是豬腎細胞系的污染物，對豬無致病性，但能產生血清抗體。相比之下，PCV-2 具有致病性，以侵害動物體內的免疫系統為主，是公認的世界上危害最嚴重的豬病病原之一[4-6]，是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）和皮炎與腎病綜合征（PNDS）的主要病因。PCV-2 可感染各階段豬群：5～16 周齡階段，易導致PMWS；育肥后期（16～22 周齡），則更多表現呼吸疾病綜合征[7-9]。最近發現的PCV 3 與豬皮炎與腎病綜合征以及生殖衰竭、心臟和多系統炎癥有關，但其致病機制尚不清楚[10-11]。

為了解華中地區臨床發病豬群PCV-2 感染狀況及特點，2018—2019 年，從湖南省、湖北省部分地區規?；i場，采集1 550 份臨床發病豬樣本，利用本實驗室建立的巢式PCR 方法進行PCV2 病原學檢測，并分析不同地區、不同養殖階段、不同季節及與其他疾病混合感染情況，以期為今后PCV-2 凈化提供依據和數據支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2018 年3 月—2019 年2 月，從湖北省的武漢、隨州、咸寧、荊州，湖南省的常德、衡陽、汨羅、株洲等8 個地市的40 個規?；i場（存欄量＞500頭），采集出現PMWS、PDNS、繁殖障礙、傳染性先天性震顫（CT）、腹瀉等臨床癥狀的發病豬群，每月1 次采樣（前腔靜脈采血），共計采集1 550份血清樣品，-20 ℃保存待檢（表1）。被檢豬場均按各自制定的PCV-2 免疫程序進行免疫。

表1 樣品采集信息統計 單位：份

1.2 主要試劑

Taq-DNA 聚合酶、反轉錄試劑盒，購自寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂糖，為Spanish 公司產品；TS-GelRed 核酸凝膠染料、DL-2000 DNA Marke、瓊脂糖，購于擎科生物科技有限公司；AxyPrepTMBody Fluid Viral DNA/RNA Miniprep Kit試劑盒，購至美國AXYGEN 公司。

1.3 樣品處理及病毒核酸提取

將采集的全血1 500 r/min 離心30 min，取上清；按照Axygen 體液提取試劑盒說明書，對上清進行病毒核酸提??；用Nanodrop 1 000 檢測所提取DNA 的濃度和純度，然后將DNA 于-20 ℃保存備用。

1.4 病原學檢測

采用本實驗室建立的巢式PCR 檢測方法[12-15]，對樣品進行病原學檢測。引物序列如表2 所示。

表2 擴增糖蛋白基因的引物序列

1.5 數據統計與分析

對不同地區、不同養殖階段、不同季節及混合感染的檢測結果，采用SPSS 24.0 卡方檢驗進行差異性分析，P＞0.05 為差異不顯著，P＜0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 不同地區

不同地區檢測結果（圖1）顯示：湖南、湖北兩省8 個地市的PCV-2 檢出率在8.79%～49.01%之間波動，平均檢出率為31.68%（491/1 550），其中常德市最高（49.01%），其次是武漢、咸寧、衡陽、株洲、荊州、汨羅，隨州市最低（8.79%）。該結果表明，這2 個省區的規?；i場均存在不同程度的感染，且不同地市間PCV-2 檢出率差異顯著（P＜0.05）。

圖1 不同地區豬群PCV-2 檢出率分布

2.2 不同養殖階段

不同養殖階段檢測結果（圖2）顯示：各養殖階段豬群均有PCV-2 陽性檢出，檢出率在12.17%～60.84%之間，其中育肥豬（60.84%）和保育豬（58.29%）檢出率較高，而哺乳仔豬（16.87%）、經產母豬（14.04%）和后備豬（12.17%）偏低。不同養殖階段豬群的PCV2 檢出率差異顯著（P＜0.05）。

2.3 不同季節

不同季節檢測結果（圖3）顯示：PCV-2 一年四季均有流行，但具有一定的季節性，其中夏季（6—8 月）檢出率最高（49.81%），而春季（3—5 月）最低（5.98%）。不同季節PCV-2 檢出率差異顯著（P＜0.05）。

圖2 不同養殖階段豬群PCV-2 檢出率分布

圖3 不同季節豬群PCV-2 檢出率分布

2.4 混合感染

將送檢的1 550 份臨床樣品同時進行PCV-2、PCV-3、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬細小病毒（PPV）病原學檢測。結果（表3）顯示：除PCV-3 未檢出外，其他4 種病原均存在不同程度的單一感染，其中PRRSV 單一感染率（32.39%）最高，其次是PRV（19.81%），PPV 較 低（13.55%），而PCV-2單一感染最低（2.45%）；雙重感染（49.74%，771/1550）最為常見，以PCV-2+PRRSV 為主，其次是PCV-2+PRV，PCV-2+PPV 最低；三重感染率（16.58%）較低，以PCV-2+PRRSV+PRV 為主，其次是PCV-2+PRRSV+PPV，PCV-2+PRV+PPV最低。四重感染（0.06%，1/1550）極少。單一感染、雙重感染、三重感染的檢出率差異顯著（P＜0.05）。

表3 PCV-2 混合感染情況

3 討論

隨著規模豬場數量的逐漸增多，生豬交易愈加頻繁，PCV-2 感染率也逐年提高，給我國養豬業造成極大危害。本研究對2018—2019 年華中地區湖南、湖北兩省8 個地市規模場送檢的發病豬血清樣品進行PCV-2 病原學檢測，發現PCV-2 檢出率在8.79%～49.01%之間，表明PCV-2 在兩省規?；i場普遍流行，平均檢出率為31.68%，表明流行較為嚴重。韋顯凱等[16]2016 年對廣西部分地區豬群5 種疫病流行情況監測發現，PCV-2 檢出率為39.12%；蔣新華等[17]對2013—2017 年采集自江西省10 個地區的1 082 份疑似PCV-2 感染豬病料組織進行病原學檢測發現，610 份為PCV-2 陽性，總檢出率為56.4%。上述結果均表明，PCV-2 在我國流行廣泛且較為嚴重，對我國養豬業形成較大危害。不同地區間的差異，通常與豬場的飼養密度、環境控制及管理水平有關，也可能受地理環境及自然氣候等因素影響。湖南省養豬業較密集，豬只調運較頻繁，PCV-2 通過拉豬車、污染的工具、糞便等傳播的風險較高，因此應嚴格執行生物安全措施，實行封閉性管理，發現可疑病豬應及時隔離，并加強外進貨物、車輛、返廠人員的消毒，防止病原傳入。感染率低的地區應對發病豬進行有效隔離，斷絕與其他健康豬只的接觸，盡可能控制PCV-2 的橫向傳播，同時嚴格把控引種豬只來源，堅持自繁自養。

不同養殖階段豬群檢測結果顯示，PCV-2 可感染各養殖階段豬群。育肥豬（60.84%）和保育豬（58.29%）感染較為嚴重，而哺乳仔豬（16.87%）、經產母豬（14.04%）、后備豬（12.17%）較輕，這與劉冰許等[18]對2015 年新鄉市PCV-2 病原學檢測的結果相近。哺乳仔豬通過攝取初乳獲得母源抗體保護，從而免受PCV-2 侵害[19]。也有研究[4]表明，仔豬在母源抗體降至臨界值時，如果疫苗免疫不及時，往往在仔豬斷奶后轉至保育時出現PMWS 癥狀，這也解釋了保育豬群感染的主要原因。而育肥豬的飼養密度較大，豬舍環境、管理水平都有所欠缺，豬群通過口-鼻-糞或者污染工具在豬群中水平傳播，因而感染概率較高。因此，仔豬應在3～6周齡接種PCV-2 疫苗；育肥、保育豬養殖密度較大，可適當增設通風口、排氣扇，對轉棟、轉欄的豬舍（環境棉拭子）、豬只（鼻/肛拭子）的PCV-2 病原學抽樣檢測，做到環境、豬只雙陰性方可轉群；對母豬應采取PCV-2 疫苗普免（3～4 次/年）。

檢測發現，該地區PCV-2感染具有一定季節性，其中夏季和冬季是感染高峰期，與段群棚等[20]調查的結果基本一致。分析原因，華中地區夏熱冬寒，濕度高，冷熱應激可引起豬群不適，導致機體抵抗力下降，而PCV-2 可侵害豬免疫系統，抑制體內免疫應答，影響PCV-2 疫苗的效力，從而導致感染率升高。因此，夏、冬季應嚴格控制豬舍溫度，避免因冷熱應激致使豬群的免疫力降低，且PCV-2免疫程序也需參考當地氣溫變化進行調整。同時，也需加強夏、冬季的綜合防疫工作。

本檢測結果顯示，PRRSV 單一感染率較高，與PCV-2 的雙重感染和三重感染較為多見，與段群鵬[21]的觀點一致。這是因為PCV-2 主要侵害豬的免疫系統，導致機體免疫力下降，從而引起多種病原協同感染。因此，規?；i場應加強豬群的PCV-2 病原學監測，完善生物安全體系，在做好PCV-2 流行控制的同時，加強對其他疾病的防控和治理。

4 結論

綜上所述，湖南、湖北兩省PCV-2 分布較為廣泛，一年四季皆有流行，可感染所有養殖階段豬群，與其他病原的混合感染嚴重，但其流行有一定的地市、豬群和季節差異，其中保育豬群感染最嚴重，夏、冬季節高發。建議加強高流行地區、重點豬群、高發季節的免疫、檢測以及生物安全管理，逐步控制和凈化PCV-2。