風疹疑似樣本ELISA與RT-PCR檢測結果研究

遼寧省本溪市疾病預防控制中心（117000）陳清

風疹是一種以急性發熱出疹為特點的呼吸道傳染病癥，因具有流行性和爆發性趨勢，嚴重危害青少年生命安全[1]。同時孕期女性在妊娠前90日如果感染風疹病毒，將導致胎兒出現先天性風疹綜合征，造成流產、死胎或者畸形。所以風疹的早期治療十分關鍵。常規風疹診斷為病毒分離培養法，血清IgM抗體測定，但是存在較多局限性，如培養時間較久、診斷復雜、抗體存在交叉性等，無法滿足當前快速診斷需求[2]。因此本文將針對ELISA與RT-PCR檢測形式的臨床價值，分析測定結果。

附表1 ELISA計算的結果(47例)

附表2 RT-PCR計算的結果（13例）

附表3 不同采樣時間同一方式測定結果分析

附表4 同一采集時間不同方式測定的結果

1 數據、方法

1.1 樣本分析 依據衛生部印發的《全國麻疹監測方案(2014版)》要求，對收集的風疹疑似患者病例，同時予以血清樣本和咽拭子樣本測定。

1.2 方法

1.2.1 ELISA測定 應用風疹病毒IgM抗體測定試劑盒測定血清樣本，應用樣本稀釋液，按照1∶100比例稀釋后，以陰性、臨界、陽性對照及稀釋好的樣本分別選取100μL，加進反應孔中，在37℃下放置60分鐘；洗板5次；應用酶標物稀釋液將酶標物作1∶70稀釋，每孔加進100μL，在37℃下放置60分鐘；洗板5次；加底物A和B液室溫避光靜置15～30分鐘，酶標儀450nm波長測定結果。

1.2.2 RT-PCR測定 應用RNA/DNA試劑盒提取咽拭子洗液，應用風疹病毒核酸測定試劑盒，對提取液進行擴增和測定。

1.2.3 實驗室確診 選取ELISA和RT-PCR任意一種方式的測定結果為陽性患者，判定為實驗室確診。

1.3 統計學分析 采用SPSS17.0軟件記錄本次研究數據，計數資料用率（%）形式表達，行卡方檢驗。組間P＜0.05證實有差異性。

2 結果

2.1 不同方法呈現的結果 本次共納入風疹麻疹疑似血清47份和咽拭子樣本13份。47份血清樣本經由ELISA測定陽性16份，ELISA陽性率34.04%（16/47），實驗室確診21份，確診率44.68%（21/47）；ELISA和RT-PCR靈敏度為76.19%（16/21）和7.69%（1/13）。13份咽拭子樣本RT-PCR測定陽性1份，RT-PCR陽性率7.69%（1/13）；經過卡方檢驗，ELISA陽性率和RT-PCR陽性率對比有差異性（X2=4.6626，P=0.0308）。具體由附表1、附表2可知。

2.2 采集時間不同所測定的結果 出疹當天采集時間記錄為24小時，分析采集時間和測定結果的關聯性。出疹48小時以內采集的樣本為20份，出疹72小時為25份。

ELISA，48小時以內收集的血清樣本陽性率和72小時以上收集的血清樣本陽性率對比有差異性（P＜0.05）。對RTPCR，48小時以內收集的咽拭子樣本陽性率和72小時以上收集的咽拭子樣本陽性率對比存在統計學意義（P＜0.05），具體由附表3可知。

2.3 同一采集時間不同方式測定的結果 出疹48小時內收集ELISA測定陽性5份，ELISA陽性率25.00%（5/20）；RT-PCR測定陽性3份，RT-PCR陽性率15.00%（3/20）；卡方檢驗RT-PCR陽性率和ELISA陽性率對比存在差異性（P＜0.05）。

出疹72小時以上收集ELISA測定陽性8份，ELISA陽性率為32.00%（8/25）；RT-PCR測定陽性1份，RT-PCR陽性率為4.00%（1/25）；卡方檢驗ELISA陽性率和RT-PCR陽性率對比有差異性（X2=4.5000，P=0.0338），見附表4。

3 討論

當前，在我國相關報道中，認為風疹疑似樣本采用ELISA和RT-PCR測定陽性率，具有較大的差異性，臨床研究認為ELISA測定比率最高為84.00%，最低為1.30%，RT-PCR測定陽性率最高為100.00%[3]，最低為1.30%。本次數據分析中ELISA和RT-PCR測定陽性率在34.04%及7.69%，雖然在相關報道范圍內，但是仍然低于臨床研究。分析因素可能是由于樣本質量或者臨床醫師鑒別診斷水平較低導致少數樣本中的特異性目標測定物濃度過低，甚至不存在。這也說明今后采集操作流程應科學規范，從而提升鑒別診斷的價值。

也有數據證實，RT-PCR測定陽性率高于ELISA測定，但是本研究結果卻與其不符。PCR02號樣品第一次抗體未檢測出陽性，二次采樣檢測出風疹IgM陽性，與咽拭結果一致；PCR03號樣品檢出風疹IgM陽性，而咽拭結果未檢出，究其因素可能是由于血清相比于咽拭子采集技術和保存條件要求較低，血清中的抗體和咽拭子中的病毒比較[4]，不容易受到環境因素影響，從而造成抗體滴度下降或者病毒RNA降解。因此今后臨床中應提升咽拭子采集質量，對保存條件進行控制，以此提升RT-PCR測定效果。

根據采集時間的不同來分析，依據出疹48小時內收集的樣本RT-PCR測定陽性率＞72小時采集數據，而ELISA測定陽性率相反且出疹48小時以內收集的樣本數＜72小時以上，這也說明早期數據過少是導致ELISA陽性率＞RT-PCR的另一因素。根據同一收集時間不同方式來分析，出疹48小時以內收集的樣本，其RT-PCR陽性率＜ELISA，出疹72小時以上收集的樣本[5]，ELISA陽性率＞RT-PCR。這可能是因免疫力差異導致抗體出現的早晚有所區別，從而造成病癥早期應用ELISA無法測定出抗體出現較晚的樣本；且RT-PCR能夠直接測定出病毒RNA，病癥早期階段病毒復制較為活躍，所以病癥早期測定更加敏銳。

綜上所述，為了更進一步提升風疹測定能力，今后應提升樣本質量和臨床醫師的鑒別診斷能力，尤其是咽拭子質量，這對于臨床研究具有十分重要的價值。