周迎春 韓文鳳 劉致遠
1.河南進口肉類指定口岸漯河查驗區服務中心 河南漯河 462300 2.漯河職業技術學院 河南漯河 462000
萬古霉素(Vancomycin)和去甲萬古霉素(Norvancomycin)分子式分別為:C66H75Cl2N9O24、C65H73Cl2N9O24,他們均屬于抗革蘭氏陽性菌的三環糖肽類抗生素,其藥力較強,被稱為“抗生素最后的王牌”,可用來治療超級耐藥細菌如超級細菌NDM1、MRSA、MRSE細菌的感染[1],是人類目前對付超級耐藥菌株的最后一道防線。
在商業利益的驅動下,萬古霉素和去甲萬古霉素被不法分子應用于養殖業,從而造成動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留。
長期或過量食用含有萬古霉素和去甲萬古霉素的動物源性食品,可引起耳、腎和神經系統毒性反應,皮膚過敏及器官功能紊亂等不良反應[2]。同時,由于萬古霉素及去甲萬古霉素的濫用,導致其耐受細菌的數量也有所增加,產生更嚴重的抗生素耐藥性,這對人類疾病的預防和治療極其不利,影響動物源性食品安全、公共衛生、生態平衡以及動物性食品出口。
在肉類進口過程中,萬古霉素的測定曾一度是國際貿易中的壁壘。因此,對動物源性食品開展萬古霉素及去甲萬古霉素殘留量的檢驗檢測工作迫在眉睫。
我國農業部第560號公告將萬古霉素及去甲萬古霉素規定為禁用獸藥。
2010年03月22日,衛生部第四批《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑名單》(整頓辦函〔2010〕50號)公告將萬古霉素列為可能違法添加的非食用物質,并特別注明:“需要研制動物性食品中測定萬古霉素的液相色譜-串聯質譜法”。
通過檢索國內外已公開發布的標準,未查詢到相關的國家標準、行業標準或已立項未批準發布的標準。目前,我國已公布的標準中,僅有一個飼料中萬古霉素測定的標準,即《農業部1862號公告-3-2012飼料中萬古霉素的測定液相色譜-串聯質譜法》。吉林省地方標準《DB22/T 1825-2013豬肉中萬古霉素殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法》處于未公布實施階段,暫無其他標準適應本標準所涉及的檢驗內容。
為了給食品風險預警和食品安全監管提供技術支撐,制定動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量測定的標準刻不容緩。
目前,測定萬古霉素和去甲萬古霉素的方法主要有高效液相色譜法和熒光偏振免疫法[3]、化學發光免疫法[4,5]等,這些方法的前處理往往適用于基質簡單的樣品,且檢出限高,不適用于低濃度的檢測,測定對象多為人體或動物血液、腦脊液樣品[6,7]。豬、牛、羊、家禽和水產等動物源性食品含有大量脂肪、蛋白質、無機鹽、固醇類等,成分復雜,易被雜質干擾,引起基質效應,降低回收率,而且動物源性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量小,運用上述方法無法準確進行定量定性檢測。
液相色譜-串聯質譜法同時兼有分離與定性、定量的優勢,可完成對復雜樣本準確、高效的定性定量分析,優化了樣本的前處理過程,使樣本分析更準確、方便、快捷,具有靈敏度高、應用范圍廣、實用性強等優勢,尤其適合分析基質復雜的樣品。
已發表的文獻報道中利用液相色譜-串聯質譜法測定萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的測定對象多為牛奶[8]、蝦[9]等極性較強的樣品,便于分離、易于檢測,而同時適用于豬、牛、羊、家禽和水產等多種動物性食品的液相色譜-串聯質譜法測定萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的報道相對較少,現有報道的方法僅適用于豬肉或豬肝等一種動物性食品[10,11],或者只能測定萬古霉素[12,13],而且多數方法需要采用基質標準溶液進行定量[14,15],增加了檢測工作的復雜性,實用性不強。
杜業剛[16](2016)、韓婉清[17](2016)、綦艷[18](2016)等研究適用于多種動物性食品中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的測定,具有較高參考價值。杜業剛[16](2016)等研究中,萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限均為20μg/kg;韓婉清[17](2016)等研究中,萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限分別為15μg/kg、9μg/kg;綦艷[18](2016)等研究中,萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限分別為2.0μg/kg、3.0μg/kg。方法檢出限普遍偏高,均不能達到該項目立項要求的技術指標——方法定量限在1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低。王洪朋[19](2019)等報道的方法在檢測豬肉、豬肝、豬腎樣品時萬古霉素和去甲萬古霉素的方法定量限均可低至0.3μg/kg,值得推廣到牛、羊、家禽和水產等動物性食品中加以研究、得以應用。
液相色譜-串聯質譜法根據液相色譜的配置不同,又分為液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜-串聯質譜法與超高效液相色譜-串聯質譜法,超高效液相色譜-串聯質譜法與另外兩種檢測方法相比,具有檢測效率高、進樣體積小、流動相消耗少等顯著優勢。為保障動物性食品安全、公共衛生、生態平衡以及動物性食品安全出口,制定超高效液相色譜-串聯質譜法測定動物性食品中萬古霉素殘留量的標準并將方法定量限降低到1ppb(即1.0μg/kg)以下或盡可能低勢在必行。