解酒保肝口服液的制備工藝及薄層色譜研究

史巧霞 靳子明 張巖

甘肅中醫藥大學附屬醫院，甘肅 蘭州730000

過量飲酒會導致嘔吐惡心等，嚴重時甚至可因呼吸肌麻痹而導致死亡［1］。劉麒［2］等研究發現，高血壓患者血壓會隨著酗酒量的增加而升高；楊家紅［3］等研究表明胃癌等惡性疾病與過量飲酒有著直接聯系；范建高等［4］研究發現少量或適量飲酒能夠降低膽固醇水平、減少胰島素抵抗，可以降低代謝綜合征的發生，最終導致人體代謝綜合征的發生。由葛根、人參等九味中藥組成的解酒保肝方，在廣泛使用后療效可靠。方中葛根、人參具有生津止渴、利水消腫、防酒毒傷脾等作用，合用助解酒與扶正；蜂蜜調和諸藥、兼以解酒護肝。全方具有益氣扶正、生津止渴、解毒去濕之功效。由于本處方中藥材大多數含有豐富的黃酮類成分，因此選用總黃酮作用評價指標，正交實驗確定最佳提取條件，建立穩定的生產工藝。建立口服液的薄層色譜鑒別成分，進一步制備出療效快、劑量準確、生物利用度高、易于規?；a的口服液。

1 實驗儀器、試劑與藥材

1.1 實驗儀器與試劑UV-3300型紫外可見分光光度計（上海美普達儀器有限公司）、KERN-ABJ型電子分析天平（上海實驗器材有限公司）、YLA-2000型真空干燥箱（龍口市先科儀器公司）。蘆丁對照品（上海源葉生物有限公司，批號：B20771）、硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）。

1.2 實驗藥材 甘肅天士力中天藥業有限責任公司提供。

2 方法與結果

2.1 解酒保肝口服液制備工藝研究 結合實際生產條件，解酒保肝口服液的制備主要采用水提法。采用正交試驗設計，考察提取時間、料液比值、提取次數與總黃酮含量的關系，優化水提條件，確定最佳工藝。

2.1.1 標準曲線的制備。首先取蘆丁對照品9.1mg，添補甲醇至25mL容量瓶中定容，得到對照品溶液。按等量遞增取配好的蘆丁溶液各0mL、1.0mL、2.0mL、3.0 mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL，移取到25mL容量瓶中，先用移液槍加5%的硝酸鈉溶液1.0mL，搖勻后再加10%的硝酸鋁溶液1.0mL，最后加4%的氫氧化鈉溶液10.0 mL，添補甲醇到刻度25mL容量瓶的刻度線。設置紫外分光光度計的波長為510 nm，顯示A值并記錄。計算回歸曲線時以濃度（mg/mL）為橫坐標，A值為縱坐標，得到回歸方程為y=12.792X-0.0052，R2=0.9996，表明蘆丁在0~0.08736 mg/mL濃度范圍內線性良好。見圖1。

圖1 蘆丁對照品標準曲線圖

2.1.2 水提工藝正交試驗。①供試品溶液的制備：以提取時間、料液比值、提取次數三個因素，參照正交試驗設計方法得到解酒保肝口服液水提工藝的L9（33）正交試驗因素水平表。見表1。按正交設計表制備9份生藥量為0.5mg/mL的解酒保肝口服液，分裝在口服液瓶中，備用。②總黃酮含量測定：取9份上述正交設計得到的解酒保肝口服液各0.1mL于2mL容量瓶中，按“2.1.1”項下加硝酸鈉溶液，氫氧化鈉等反應試劑，添補甲醇定容。在510nm波長處記錄A值，代入回歸方程計算總黃酮含量。見表2。

表1 水提工藝L9（33）正交試驗因素水平表

表2 解酒保肝口服液制備工藝參數確定正交試驗結果

2.1.3 水提工藝實驗結果。表3結果表明各因素對水提液中總黃酮含量影響的大小順序為提取次數最大，提取時間次之，料液比值影響最小。由正交試驗可得理論上最佳工藝為A3B3C3，但考慮到生產周期與成本，最終確定解酒保肝口服液的最佳提取條件為A2B2C2，即加15倍量水提取1 h，共提取2次。根據最佳工藝進行3次驗證試驗，得到總黃酮的平均含量為12.75 mg/mL，其RSD值為0.85%，小于1%，證明解酒保肝口服液選用以上最終提取工藝穩定可靠，可以為后續生產提供理論依據。

表3 方差分析表

2.2 解酒保肝口服液的薄層色譜鑒別

2.2.1 葛根色譜鑒別。取正交設計得到的解酒保肝口服液5mL水浴揮干，殘渣用甲醇除雜后揮干，再添補甲醇至1mL容量瓶，備用。然后再取葛根素對照品1mg，添補甲醇至1mL容量瓶里，備用。后面再將處方中的葛根藥材去除，將其余藥材煎煮后制成缺葛根的陰性口服液樣品。展開時用三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.25）的展開劑，倒入展開缸里先飽和15min；飽和后將點好的薄層板放進展開缸，展至距薄層板最上邊緣2cm時停止展開，取出薄層板，晾干后置氨蒸氣中熏15 min顯色；顯色后在紫外光燈（365nm）下檢視斑點。見圖2。在與供試品和對照藥材色譜相應位置上，分別顯相同的熒光斑點，陰性樣品無明顯斑點顯現。

2.2.2 人參色譜鑒別。參照藥典［5］，取正交設計得到的解酒保肝口服液5mL水浴揮干，殘渣用三氯甲烷回流1h后揮干，加少量水濕潤殘渣，用水飽和正丁醇超聲處理，使充分溶解，靜置后吸取上清液，加3倍量氨試液，充分搖勻，放置分層，取上層液蒸干，再得殘渣，將殘渣轉移至1mL容量瓶中，用1mL甲醇定容，作為供試品溶液。另取人參對照藥材1g，同法制成人參對照藥材溶液。將處方中的人參藥材去掉，其余藥材按比例制成缺人參的陰性口服液樣品。再參照供試品溶液的制法，制成陰性對照溶液。毛細管吸取上述3種溶液點于同一硅膠G板上，展開劑選用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下層溶液。將展開劑提前倒入展開缸飽和。飽和后再放入點好樣的薄層板，展至距薄層板最上邊緣2cm時停止展開取出，晾干后用顯色瓶噴10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，在日光和紫外燈下（365nm）下觀察斑點。見圖2。在與供試品和對照藥材色譜相應位置上，分別顯相同的熒光斑點，陰性樣品有斑點顯現，但與供試品和對照藥材斑點均不在同一位置。

3 討論

本實驗采用正交試驗設計，以總黃酮的含量為評價指標，對解酒保肝口服液的提取工藝進行優化，結果顯示，影響解酒保肝口服液的提取因素大小順序為提取次數＞提取時間＞料液比值，最終結合實際生產確定其最佳提取工藝為A2B2C2，即15倍量水煎煮2次，每次1h。根據正交設計表可看出，其理論上最佳提取條件為20倍量水提取3次，每次1.5h，但該條件下提取液體積較大，再結合生產周期與成本考慮舍棄該條件。本處方中枳椇子、葛根、葛花、紅芪等均含有豐富的黃酮類化合物，其中以君藥枳椇子含量居多?？傸S酮是植物次生代謝產物，在植物中廣泛存在，以游離態或與糖結合為苷的形式存在，研究表明，總黃酮類化合物具有降血糖、抗炎抗菌、抗氧化抗腫瘤等多種藥理作用［6-9］，因此本研究以黃酮類為評價指標，具有較大的考察意義。

圖2 葛根、人參藥材薄層色譜圖

解酒保肝口服液的薄層色譜中，供試品與葛根對照藥材在相對應的位置上顯現出相同的斑點，葛根陰性對照中無明顯斑點出現。其供試品與人參對照藥材也在相對應的位置上顯現相同的斑點，人參陰性對照藥材中有斑點顯現，但與供試品和對照藥材斑點均不在相同位置。因此，本研究為解酒保肝口服液的合理開發利用提供了一定的科學依據。