日糧中添加桑葉多糖對雛雞免疫功能的影響

耿兵 臧云飛 王照紅 李福偉 趙東曉 董亞茹 高金波

摘? 要：為了探明桑葉多糖對雛雞免疫功能的影響，本研究采用超聲波輔助水提法，輔以離子交換柱層析對其純化，得到兩種不同分子量的桑葉多糖組分（ MLP-I、MLP-II） 。將兩種多糖分別以0.5%的劑量添加到雛雞的基礎日糧中。結果表明，桑葉多糖可以顯著提高雛雞免疫器官指數，能夠顯著促進細胞因子IL-2和IFN-γ的分泌，MLP-II的免疫增強效果優于MLP-I。本研究為桑葉多糖的開發利用提供了技術支撐和理論依據。

關鍵詞：桑葉多糖;雛雞;免疫

中圖分類號：S816.75? ? 文獻標識碼：B? ? 文章編號：1673-1085（2021）2-0010-04

多糖是普遍存在于植物體內的生物學大分子物質，具有提高機體免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗炎等一系列作用，近年來關于植物多糖的研究較為廣泛。桑葉是?？贫嗄晟淙~小喬木桑樹（Morus alba L.）的葉，中醫又稱“鐵扇子”[1]，桑葉中含有植物甾醇、黃酮類、生物堿類、多糖等功能性活性物質，其多糖成分具有提高動物機體免疫力、抗氧化 、降血糖、降血脂、抗高血壓、抗炎和血管舒張劑等多種生物活性[2-7]。侯瑞宏等研究發現，桑葉多糖（MLP）對小鼠的體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、細胞免疫功能等均有顯著性的影響，說明MLP具有免疫調節功能[8]。因此，本研究將桑葉經提取、分離、純化得到兩種不同分子量的多糖組分（MLP-I、MLP-II），并將兩種不同的多糖組分作用于雛雞，探討桑葉多糖對雛雞免疫功能的影響，為桑葉多糖在家禽養殖上的應用提供理論依據。

1? 材料和方法

1.1? 材料? 細胞因子IL-2和IFN-γ的ELISA檢測試劑盒購自江蘇晶美生物科技有限公司;200只1 d海蘭褐公雛，購自于海陽鴻牧種禽有限公司;酶標儀（ELX800），美國 Bio-Tek 寶特公司產品;臺式離心機（TGL-16G），上海安亭科學儀器制造廠生產;超聲波清洗?。↘Q-2200DB），昆山股份有限公司生產;其它試驗所用化學試劑均為國產分析純。

1.2? 桑葉粗多糖的提取? 采用超聲波輔助水提法，具體步驟如下：新鮮桑葉在真空烘箱中60 ℃烘干，研磨過80目篩， 制成桑葉干粉。純凈水為溶劑，料液比1∶20，超聲波功率為50 W，85 ℃提取時間2.5 h[9]，將濾液在真空下利用旋轉蒸發器在50 ℃下濃縮，無水乙醇沉淀，真空冷凍干燥，得到的粉末即為桑葉粗多糖。

1.3? 桑葉多糖的純化? 將粗制MLP溶解于10 mL蒸餾水中，通過0.45 mMMPs膜過濾。濾液通過DEAE-52纖維素陰離子交換柱（26 mm×500 mm）。洗脫液為0.1 mol/L NaCl，流速為1 mL/min。洗脫液的總糖含量用苯酚-硫酸法測定。NaCl洗脫的餾分在Sephadex G-100凝膠柱上以0.5 mL/min的速度洗脫，洗脫峰的洗脫液裝入透析袋中進一步純化濃縮，最后經乙醇沉淀、真空冷凍干燥得到純化多糖[10]。

1.4? 試驗動物及分組? 將200只1 d海蘭褐公雛飼養至7 d后選取150只，隨機分為3組（MLP-I組、MLP-II組和空白對照組）。試驗組在雛雞的基礎日糧中添加0.5%的桑葉多糖。常規飼養管理，各組的飼養條件、飼養方法等均一致。試驗期56 d，預試期5 d。

1.5? 檢測指標和方法? 試驗56 d時，每組隨機選取30只試驗雞心臟采血，分離血清檢測免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白介素2（IL-2）和γ-干擾素（IFN-γ）含量;禁食12 h后稱重、屠宰，取胸腺、脾臟、法氏囊和肝臟等免疫器官，吸干表面液體、除去多余脂肪，稱其鮮重，計算免疫器官指數。免疫器官指數=免疫器官鮮重（g）/宰前空腹活重（kg）。

1.6? 數據分析? 數據采用 Microsoft Excel 2007 和SAS （Version 8e，SAS Institute，1998）軟件進行統計分析。試驗數據以“平均值±標準差”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2? 結果與分析

2.1? 桑葉多糖的分離提純? 苯酚-硫酸法檢測結果表明，桑葉多糖的提取率達到8.83%，多糖的純度為86.97%。用葡聚糖凝膠柱Sephadex G-100層析純化桑葉多糖，得到兩種多糖組分，分別命名為MLP-I、MLP-II，如圖1所示。

2.2? MLP對雛雞免疫器官發育的影響? 結果見表1。

由表1可見，兩種桑葉多糖組分可以顯著提高雛雞胸腺指數和法氏囊指數（P<0.05），MLP-II效果優于MLP-I，兩種多糖對雛雞脾臟指數和肝臟指數沒有顯著影響（P>0.05）。

2.3? MLP對雛雞血清中細胞因子的影響? 檢測結果見表2。

由表2可見，兩種桑葉多糖組分對雛雞血清中免疫球蛋白IgG、IgM的分泌沒有明顯的促進作用;MLP-II、MLP-I均可顯著提高血清中IL-2和IFN-γ的含量（P<0.05）。

3? 討論

多糖是桑葉中的重要活性物質，具有顯著的抗氧化、增強免疫力等功能[11]。多糖主要是利用其結構相似性和受體結合發揮生物活性，調節免疫器官釋放相關細胞活性因子，進而提高機體免疫力[12]。胸腺和法氏囊是家禽重要的免疫器官，是多種免疫活性因子分泌的主要部位[13]，免疫器官的發育狀態與免疫功能密切相關。Ravis等人報道稱免疫器官指數可以用來評價機體免疫水平，較大的免疫器官重量通常在一定程度上代表著較強的免疫功能[14]。因此免疫器官指數常用來評價家禽的免疫水平[15]。

本研究純化的桑葉多糖組分MLP-II、MLP-I對胸腺和法氏囊的發育均具有促進作用，說明桑葉多糖對雛雞的免疫具有促進作用。這與目前的研究結果相似，陳洪亮[16]研究結果表明，黃芪多糖、牛膝多糖、蘆薈多糖能夠顯著提高肉雞的法氏囊指數;李維[17]研究結果表明，桑葉多糖能夠有效增強小鼠的機體免疫力;張燕等[18]研究結果發現白毛藤多糖能夠顯著提高三黃雞雛雞的免疫器官指數。

血清中IL-2、IFN-γ也是反映機體免疫功能的重要指標。本研究結果表明，日糧中添加桑葉多糖可顯著提高雛雞血清中IL-2和IFN-γ含量，通過提高細胞免疫因子增加機體血液屏障功能，從而提高機體的免疫防御。這與Chen等[10]研究結果相似，即桑葉多糖能顯著促進小鼠空腸和氣管分泌IL-2、IFN-γ和SIgA，促進盲腸扁桃體IgA+細胞的產生，增強腸道和氣管粘膜免疫功能;Fan等[19]將淫羊藿多糖作為疫苗免疫佐劑，發現淫羊藿多糖能夠最有效地促進IFN-γ和IL-6 的分泌。說明多糖能夠通過增加細胞因子分泌，可能激活了相關免疫應答通路，進而提高機體免疫水平。

4? 結論

本研究采用超聲波輔助水提法提取桑葉多糖，利用凝膠柱子層析得到兩種不同分子量的桑葉多糖組分MLP-I、MLP-II，并分析其對雛雞的免疫功能影響，發現MLP-I、MLP-II均可以顯著提高雛雞的免疫功能，MLP-II的效果好于MLP-I，為繼續開發利用桑葉多糖奠定了理論基礎。

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Effects of dietary mulberry leaf polysaccharides

on immune function of chicks

GENG bing1， WANG zhaohong1， LI fuwei1， ZHAO dongxiao1， DONG yaru1， GAO jinbo1，2*

（1.Shandong Sericulture Research Institute，Yantai 264002， China;

2.Institute of Poultry Research，Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Poultry Breeding and Engineering Technology Research Center， Jinan 250100， China）

Abstract：In order to find out the effect of mulberry leaf polysaccharides on the immune function of chicks， ultrasonic-assisted water extraction and ion exchange column chromatography were used to purify mulberry leaf polysaccharides， and two kinds of mulberry leaf polysaccharides with different molecular weight （MLP-I and MLP-II） were obtained. The two polysaccharides were added to the basal diet of chicks at a dose of 0.5% respectively. The results showed that mulberry leaf polysaccharides could significantly increase the immune organ index of chicks and significantly promote the secretion of cytokines IL-2 and IFN- γ. The immune enhancement effect of MLP-II was better than that of MLP-I. This study provides technical support and theoretical basis for the development and utilization of mulberry leaf polysaccharides.

Keywords： Mulberry leaf polysaccharides;chicks;immunity□