VITEK-2 Compact系統檢測葡萄球菌克林霉素誘導性耐藥的分析

王 芬 羅欲承 游 琨

江蘇省興化市人民醫院檢驗科 225700

葡萄球菌廣泛的存在自然界中，是皮膚及軟組織感染的主要病原菌，又因克林霉素在組織中較易滲透，所以臨床常用林可霉素及大環內酯類治療葡萄球菌的感染[1]，由于臨床大量地使用這些藥物，從而使得林可霉素類和大環內酯類藥物的耐藥率不斷升高，還時有誘導性克林霉素耐藥的情況發生，所以藥敏試驗雖然體外敏感但卻往往療效甚微。日常藥敏試驗又不能同時檢測克林霉素誘導性耐藥，所以實驗室需另外進行加做“D”試驗以檢測是否存在誘導性克林霉素耐藥，但此方法耗時，故臨床亟須一種能縮短藥敏檢出時間的方法。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 從2018年1—12月本院住院病人的臨床檢出標本中分離出81株克林霉素敏感(RS)、紅霉素耐藥的葡萄球菌(除去同一病人重復分離株)，菌株均經VITEK-2 Compact系統鑒定到種，其中金黃色葡萄球菌(SA)檢出12株，標本分別來自痰液、血液、傷口分泌物等；凝固酶陰性的葡萄球菌(CNS)檢出69株，其中表皮葡萄球菌25株，溶血葡萄球菌37株，其他種類的葡萄球菌7株。標本來自血液65株，膿液3株，痰液1株。

1.2 儀器及試劑 鄭州安圖羊血瓊脂、MH 瓊脂、陽性球菌鑒定卡(GP卡)、陽性球菌藥敏卡(AST-GP67卡)，VITEK-2 Compact鑒定儀?？肆置顾?DA)(2μg/片)紙片、紅霉素(E)(15μg/片)紙片購自康泰生物科技有限公司。

1.3 質控菌株 ATCC 29213：D試驗陽性株。

1.4 鑒定及藥敏試驗 挑取培養好的分純菌落用0.45% NaCl稀釋液，調濁度為0.5～0.63McF，再吸取280μl加入另一0.45% Nacl溶液管中以備做藥敏。兩管分別放入GP鑒定卡片AST-GP67藥敏卡，放入VITEK-2 Compact鑒定儀中鑒定，儀器的藥敏系統設有高級專家系統，如有誘導耐藥則在主界面克林霉素一欄處修正為耐藥。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)及甲氧西林敏感的葡萄球菌(MSS)均由VITEK-2 Compact鑒定儀進行的頭孢西丁篩查試驗所確定。

1.5 D試驗 操作用紙片擴散法進行。將分純的菌株用無菌肉湯配成0.5麥氏單位的菌液，用常規的手工藥敏方法涂布于MH 瓊脂平板上，然后貼上克林霉素和紅霉素紙片輕輕按壓，兩紙片保持15mm的距離，35℃溫箱培養18h后讀取結果，相鄰紅霉素一側的克林霉素抑菌圈出現“截平”現象，形如“D”字為D試驗陽性，提示此株誘導耐藥陽性，反之則為D試驗陰性。

1.6 統計學方法 用SPSS22.0軟件進行數據分析，用χ2檢驗；P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法試驗結果比較 81株RS葡萄球菌，D試驗誘導率為55.6%(45/81)，VITEK-2 Compact儀器顯示誘導率為54.3%(44/81)，兩種檢測方法比較沒有顯著差異(χ2=0.012，P>0.05)，具有較高的一致性。見表1。

2.2 SA 、CNS 克林霉素誘導型耐藥結果比較 檢出的12株SA中有11株D試驗陽性，誘導率為91.7%(11/12)。CNS中有34株D試驗陽性，誘導率為49.3%(34/69)。二者誘導型耐藥率比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 VITEK-2 Compact儀器法與D試驗檢測結果

表2 SA 、CNS 克林霉素誘導型耐藥結果比較

2.3 MRS、MSS克林霉素誘導型耐藥比較 檢出的63株MRS中有36株D試驗陽性，誘導率57.1%(36/63)。18株MSS中有9株D試驗陽性，誘導率50.0%(9/18)。二者誘導耐藥率比較差異未見統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 MRS、MSS克林霉素誘導型耐藥比較

3 討論

有關文獻報道，大環內酯類和林可霉素類耐藥機制有2種：一類是泵出機制，另一類是由于核糖體被甲基化后藥物作用的靶位改變，從而造成大環內酯類及林可霉素類藥物耐藥[2-3]。它的耐藥性表現為持續性和誘導性耐藥[4]。 持續性耐藥表型表現為對紅霉素和林可霉素類藥物都耐藥，可用常規紙片擴散法檢測，而誘導型耐藥用一般的方法檢測不出來。

2004年CLSI建議用標準的雙紙片法(即D試驗)來檢測是否有大環內酯類誘導克林霉素耐藥的現象，來報告藥敏結果[5-6]。D試驗操作相對容易、無須特殊儀器，其結果與有關文獻基因分型法有很高的一致性[7]，這種檢測耐藥表型的傳統紙片擴散法，雖然易操作，但也有很多影響因素比如菌液濃度、紙片之間的間隔距離等，尤其是紅霉素與克林霉素紙片之間距離的影響，有報道稱檢測時紙片間隔15mm的距離準確性較高，距離大可出現誘導表型漏檢[8-9]。若兩紙片間距過大可導致假陰性[10]，因此試驗時很難把握細微的距離差別。而VITEK-2 Compact儀器法無須考慮這些人為因素對準確性的影響，只要調好儀器要求的菌液濁度范圍即可上機操作，簡便易行。

本文中81株克林霉素敏感紅霉素耐藥葡萄球菌中有45株表現為誘導克林霉素耐藥，占55.6%(45/81)，顯示了很高的水平，與有關研究的結果相似[11]，提示對葡萄球菌進行克林霉素耐藥誘導檢測具有重要的臨床價值。

通過比對試驗兩種方法檢測的誘導率無顯著差異(P>0.05)，說明VITEK-2 Compact系統檢測葡萄球菌誘導型克林霉素耐藥與D試驗具有很好的一致性。建議在常規工作中用VITEK-2 Compact儀器法代替紙片擴散法檢測，使該檢測結果可以與常規藥敏一同檢出?？s短檢測時間，及時為臨床提供藥敏結果。

本文通過對葡萄球菌屬克林霉素誘導耐藥結果的分析顯示，RS菌株中金黃色葡萄球菌誘導型耐藥率(91.7%)高于凝固酶陰性的葡萄球菌(49.3%)，這與有關報道相似[12]，臨床上金黃色葡萄球菌是引起傷口、軟組織等化膿性感染的主要病原菌[13]。而CNS一般為皮膚表面寄生菌，多為條件致病菌，當人體免疫力低下時易感，大環內酯類藥物的血藥濃度分布有一定的特點，在組織中濃度高易滲透，故臨床上常選其作為治療金葡菌感染的主要藥物，這可能是導致克林霉素誘導型耐藥率增高的原因。另外比較MRS與MSS二者克林霉素誘導耐藥率的產生無明顯差異，這說明甲氧西林耐藥并不影響葡萄球菌誘導型耐藥的產生。

綜上所述，本文通過對VTEK-2 Compact全自動儀器法和紙片擴散法檢測葡萄球菌中克林霉素誘導性耐藥的比較和分析，表明VTEK-2 Compact全自動分析系統能夠快速準確地檢測出克林霉素誘導性耐藥，大大地縮短了檢測時間，本法簡便易行，在常規標本檢測藥敏的同時就能直接看到克林霉素誘導性耐藥的結果，平均時間6h，不需附加另外試驗，精簡了檢驗流程，縮短了檢驗時間。為臨床提供了合理使用抗生素的依據。