七種腫瘤相關自身抗體聯合檢測對肺癌的診斷價值

賀俠琴 王偉琦 鄧 凱 張凱歌

西安交通大學第一附屬醫院檢驗科，陜西西安 710061

肺癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，也是全球癌癥相關死亡的主要原因[1-2]。肺癌的5年平均生存率為17.4%，隨著癌癥的發展，生存率會隨之下降[3]。雖然ⅠA期肺癌的10年生存率為92%，但約85%的肺癌患者在晚期被確診，失去手術的機會，因此早期發現肺癌對提高總體生存率意義重大[3]。血清腫瘤標志物雖然對肺癌有一定的診斷價值，但主要用于療效監測，對診斷價值較低[4-5]。腫瘤相關抗原的過表達、突變、折疊等可激活機體的免疫系統而產生相應自身抗體，稱為腫瘤相關自身抗體（tumor associated autoantibody，TAAB），且 這 種TAAB可在外周血液中持續較長時間，且在肺癌無癥狀期電子計算機斷層掃描（CT）篩查呈陽性5年前即可被檢測出[6]。近年來發現多項TAAB聯合檢測為肺癌的診斷和預后提供新的參考方法[7-8]。本研究旨在探討7-TAAB（CAGE、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53）單獨及聯合檢測在肺癌中的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選 擇2018年5月 至2020年2月 在 西 安 交通大學第一附屬醫院（我院）胸外科收治的肺癌組患者148例，其中男91例，女57例，平均年齡（61.2±8.2）歲，肺癌組均經本院病理科組織病學檢查確診，其中肺鱗癌44例、肺腺癌85例、小細胞肺癌19例。根據TNM分期標準，Ⅰ期50例，Ⅱ期13例，Ⅲ期27例，Ⅳ期39例。肺癌診斷標準依據中華醫學會肺癌臨床診療指南（2018版）[9]。納入標準：①患者初診，未經手術治療及放化療；②經活檢等組織病理學確診為肺癌；③無其他惡性腫瘤且臨床資料完整。排除標準：對放化療或手術治療，或同時患嚴重的感染性疾病、重要臟器疾病，臨床分期未明確者予以排除。同時收集同期本院健康對照組152例，其中男108例，女44例，平均年齡（57.1±6.3）歲；肺部良性疾病組患者35例，其中男20例，女15例，平均年齡（60.2±11.3）歲。三組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究獲本院醫學倫理委員會討論批準后實施，所有受試者均征得知情同意。

1.2 方法

采集肺癌組、肺部良性疾病組和健康對照組空腹靜脈血4 ml，2500 r/min離心10 min，分離出血清，8 h內完成檢測，采用酶聯免疫吸附試驗（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（杭州凱保羅生物技術有限公司）對標本進行檢測，并使用美國伯樂iMark酶標儀在450 nm處讀取吸光度，嚴格按照試劑說明書進行操作。7-TAAB試劑盒的cut-off值分別為為：CAGE 7.2 U/ml，GAGE7 14.4 U/ml，GBU4-5 7.0 U/ml，MAGE A1 11.9 U/ml，PGP9.5 111 U/ml，SOX2 10.3 U/ml，p53 13.1 U/ml。

1.3 統計學處理

應用SPSS 22.0軟件處理數據，7-TAAB水平Kolmgorov-Smirnov（K-S）檢測呈偏態分布，用中位數（四分位間距）表示，多組間比較采用非參數Kruskal-Wallis H秩和檢驗，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗，通過ROC曲線綜合評價7-TAAB單項及聯合檢測對肺癌的診斷價值，確定合適的臨界值，血清7-TAAB聯合檢測采用并聯試驗（血清7-TAAB任一指標高于cut-off值則確定為陽性，全部抗體水平陰性則為陰性），P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組7-TAAB比較

肺癌組7-TAAB（CAGE、GAGE7、GBU4-5、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53）水平與健康對照組和肺部良性疾病組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組間比較，肺癌組血清7-TAAB水平明顯高于健康對照組，差異有統計學意義（P均＜0.05），肺癌組與肺部良性疾病組比較，CAGE、GAGE7、MAGE A1、PGP9.5、SOX2、p53水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05），GBU4-5比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組7-TAAB水平比較[M（P25，P75）,U/ml]

2.2 7-TAAB單項及聯合檢測對肺癌的診斷價值分析

以健康對照組和肺部良性疾病組作為對照組，肺癌組為疾病組，繪制ROC曲線，7-TAAB聯合檢測診斷肺癌的ROC-AUC（0.766）和敏感度（82.4%）明顯高于單項檢測的結果。見表2、圖1。

表2 7-TAAB單項與聯合檢測對肺癌的診斷價值評價

圖1 7-TAAB單項及聯合檢測預測肺癌的ROC曲線

2.3 7-TAAB聯合檢測對不同組織分型肺癌的診斷價值

以健康對照組和肺部良性疾病組作為對照組，分別以鱗癌、腺癌和小細胞肺癌為疾病組繪制ROC曲線，血清7-TAAB聯合檢測對小細胞肺癌和鱗癌的ROC-AUC和敏感度高于腺癌。見表3。

表3 7-TAAB聯合檢測對不同組織分型肺癌的診斷價值

2.4 肺癌組患者不同臨床特征的7-TAAB聯合檢測的陽性率比較

肺癌組患者7-TAAB聯合檢測在不同年齡、不同組織分型和不同臨床分期的陽性率比較，差異無統計學差異（P＞0.05），而在不同性別間的陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 肺癌組患者不同臨床特征的陽性率比較

2.5 7-TAAB聯合檢測在各組間的陽性率比較

7-TAAB聯合檢測在肺癌組的陽性率[82.4%（122/148）]明顯高于健康對照組[39.4%（60/152）]，差異有統計學意義（χ2=57.993，P＜0.05），與肺部良性疾病組[68.5 %（24/35）]比較，差異無統計學意義（χ2=3.370，P＞0.05），肺部良性疾病組陽性率與健康對照組比較，差異有統計學意義（χ2=9.375，P＜0.05）。

3 討論

在腫瘤轉移之前診斷肺癌并給予早期治療，可以顯著提高患者生存率。血清中經典腫瘤標志物診斷肺癌的敏感度較低，特異度較差，無法滿足臨床診斷需求[10]。CT可檢出體積較小的腫瘤，然而CT篩查的假陽性率較高，不能鑒別良惡性腫瘤，亟需尋求一種簡便的生物標志物來作為肺癌的診斷工具，降低誤診率[11]。在腫瘤發病早期，腫瘤相關抗原由于基因突變、蛋白異常等原因引起機體產生自身免疫應答，刺激B細胞分泌TAAB，少量的腫瘤相關抗原通過體液免疫的信號放大作用產生大量的TAAB[11]，且TAAB在臨床癥狀出現前數年即可以被檢測出，因此檢測TAAB可為肺癌早期診斷開辟一條新途徑。

p53是一種腫瘤抑制因子，激活DNA修復途徑，抑制腫瘤細胞的增殖，在臨床診斷肺癌之前即可出現。PGP9.5是泛酸水解酶，是非小細胞肺癌的生物標志物[12]。SOX2是一種轉錄因子，在肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中表達，并且癌細胞向遠處轉移的能力與其過表達呈正比[13]。MAGE-A1、GAGE7、CAGE、GBU4-5均屬于腫瘤-睪丸抗原，在多種惡性腫瘤中表達，肺癌患者體內水平較高，不表達于人體正常組織[12]。本研究結果顯示，肺癌組7-TAAB水平明顯高于健康對照組，除GBU4-5外，其他6個TAAB水平與肺部良性疾病組比較差異無統計學意義，這與趙娟等[14]的研究結果略有差異，此研究結果表明，肺癌組7-TAAB水平明顯高于肺部良性疾病組，本研究并未得出此結論，可能原因與本研究選取的肺部良性疾病組病例數較少有關。本研究通過ROC曲線綜合評價7-TAAB單獨及聯合檢測對全肺癌的診斷價值，結果顯示7-TAAB單項檢測診斷肺癌的敏感度較低，聯合7-TAAB診斷肺癌的ROC-AUC（0.776）和敏感度（82.4%）明顯高于單項檢測的結果，與Huang 等[15]的研究結果一致，提示低敏感度限制了單個TAAB在臨床中的應用，聯合7-TAAB可顯著提高診斷肺癌敏感度。本研究進一步分析了7-TAAB聯合檢測分別對鱗癌、腺癌和小細胞肺癌的診斷價值，結果顯示，血清7-TAAB聯合檢測對小細胞肺癌的敏感度最高，對于非小細胞肺癌，鱗癌的敏感度高于腺癌，與Huang 等[15]的研究結論相似。將肺癌患者按不同臨床特征進行分組，血清7-TAAB水平在不同年齡、不同組織分型、不同臨床分期間陽性率無顯著統計學差異，提示血清7-TAAB可以檢測早期及晚期肺癌，這種現象可能與免疫放大機制有關，在腫瘤發生早期通過體液免疫反應信號放大作用，可以檢測到TAAB，表明聯合7-TAAB檢測對于早晚期肺癌診斷均有一定的臨床應用價值。本研究還得出血清7-TAAB聯合檢測在肺癌組的陽性率（82.4%）和肺部良性疾病組的陽性率（68.5%）明顯高于健康對照組（39.4%），但是肺癌組與肺部良性疾病組間陽性率比較差異無統計學意義，提示血清7-TAAB聯合檢測可以區分肺癌患者與健康人，但是對肺部良惡性結節無鑒別診斷價值，與蔡學琴等[16]研究結果不一致，本研究良性疾病組數量較少，可能會得出錯誤的統計結論，這可能也是與其他研究結果不一致的原因，后續將進一步擴大研究范圍及增大樣本量探討血清7-TAAB在肺良惡性疾病及肺癌預后的臨床應用價值。