急性腦梗死患者外周血miR?132、血清Ang?1相關性及預后

馬翠娟

作者單位：河南省職工醫院老年科河南，鄭州450000

急性腦梗死以腦部供血動脈血栓栓塞或血栓形成引起的血管腔堵塞、腦組織缺血缺氧為特征，具有致死率高、致殘率高的特點［1?2］。在臨床實踐中，早期判斷急性腦梗死患者的預后情況、及時發現可能出現預后不良的患者并進行干預，對改善患者的預后具有積極意義。微小RNA（microRNA，miR）是近些年心腦血管疾病研究的熱點，miR 通過在轉錄后水平調節多種基因的表達來介導相應的生物學效應，受到miR 調控的凋亡、自噬、炎癥、血管新生等環節均與急性腦梗死的發生、預后密切相關。國內陳澎的動物實驗研究發現，局灶性腦缺血大鼠腦組織中miR?132 的表達減少，而過表達miR?132 能夠改善腦缺血大鼠的組織缺氧狀態神經功能并增加血管生成素?1（Angiopoietin?1，Ang?1）表達、促進缺血腦組織血管新生［3］；另有一項國內的臨床研究發現，血清Ang?1 含量降低是急性腦梗死患者預后不良的可能影響因素［4］。但miR?132 在急性腦梗死發病過程中的變化及其對預后的預測價值尚不清楚。因此，本研究將觀察外周血miR?132 表達與血管新生分子Ang?1 及90 d 預后的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2018年1月至2019年12月期間在本院診斷為的80 例急性腦梗死患者作為實驗組，其中男性48 例、女性32 例，平均年齡（61.83±11.37）歲；另取同期體檢的80 例健康者作為對照組，其中男性45 例、女性35 例，平均年齡（59.37±12.42）歲。兩組間一般資料的比較，差異無統計學意義（P>0.05）。所有患者及家屬均知情同意。本研究經醫院倫理委員會批準。

入組標準：①符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中急性腦梗死的診斷標準［5］；②起病時間<4.5 h、接受溶栓治療；③臨床資料完整；④出院后90 d 進行門診復診。排除標準：①既往有腦卒中、心肌梗死等病史；②既往有顱腦外傷、腦腫瘤病史；③合并惡性腫瘤、精神性疾病。

1.2 外周血miR?132 表達水平的檢測

在血常規采血管內采集實驗組患者入院后的外周血3 mL 及對照組受試者體檢時的外周血3 mL，采用北京博凌科為公司的試劑盒進行miR?132 的檢測。配置如下反應體系：c DNA 樣本1 μL、PCR混合液10 μL、10 μmol/L 上下游引物各0.4 μL、去離子水補足至20 μL，引物分別為目的基因miR?132 的特異性引物及內參U6 的特異性引物。在熒光定量PCR 儀上按照94℃預變性2～3 min 后94℃15 s、60℃40 s 重復40 個循環的程序完成PCR 反應，生成反應的循環曲線及循環閾值（Ct），以U6 為內參，計算miR?132 的表達水平。

1.3 血清Ang?1 含量的檢測

采集實驗組患者入院后的外周血5 mL 及對照組受試者體檢時的外周血5 mL，采用上海西唐公司生產的酶聯免疫吸附法試劑盒進行檢測，按照試劑盒說明書操作并檢測血清中Ang?1 的含量。

1.4 臨床資料

收集實驗組以下臨床特征：性別、年齡、高血壓病、冠心病、糖尿病、超敏C 反應蛋白（High sen?sitivity C?reactive protein，hs?CRP）、同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、低密度總蛋白膽固醇（Low density total pro?tein cholesterol，LDL?C）、高密度脂蛋白膽固醇（High density total protein cholesterol，HDL?C）、隨機血糖、入院時NIHSS 評分、發病到入院時間。

1.5 90 d 預后的隨訪及評估

急性腦梗死患者出院后90 天時進行門診復診，參照《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》［5］采用改良Rankin 量表（modified Rankun scale，mRS）對患者的神經功能進行評價并判斷預后，mRS≤2 分為預后良好、mRS>2 分為預后不良。

1.6 統計學方法

采用SPSS 21.0進行數據統計，計量資料用（）表示、兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料采用n（%）表示、用χ2檢驗，miR?132 及Ang?1 對預后的預測價值采用ROC 曲線分析，預后的影響因素采用logistics 回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組miR?132 表達水平及Ang?1 含量的比較

與對照組比較，實驗組外周血miR?132 的表達水平、血清Ang?1 的含量明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組miR?132 表達及Ang?1 含量比較（±s）Table 1 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content between 2 groups（±s）

表1 兩組miR?132 表達及Ang?1 含量比較（±s）Table 1 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content between 2 groups（±s）

組別實驗組對照組t 值P 值n 80 80 miR?132 0.74±0.23 1.00±0.28 6.418 0.000 Ang?1（ng/mL）1.01±0.27 1.39±0.32 8.118 0.000

2.2 實驗組miR?132 表達及Ang?1 含量的相關性

急性腦梗死組患者外周血miR?132 表達水平血清Ang?1 含量呈正相關（r=0.502、P<0.05）。

2.3 不同預后患者miR?132表達及Ang?1含量的比較

與預后良好患者比較，預后不良患者外周血miR?132 的表達水平、血清Ang?1 的含量明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 不同預后患者miR?132 及Ang?1 的比較（±s）Table 2 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content in patients with different prognosis（±s）

表2 不同預后患者miR?132 及Ang?1 的比較（±s）Table 2 Comparison of miR?132 expression and Ang?1 content in patients with different prognosis（±s）

預后情況預后良好組預后不良組t 值P 值n 46 34 miR?132 1.12±0.28 0.85±0.16 5.042 0.000 Ang?1 0.78±0.25 0.68±0.18 2.041 0.045

2.4 miR?132 表達及Ang?1 含量對急性腦梗死患者預后的預測價值

繪制miR?132 表達及Ang?1 含量預測急性腦梗死患者預后的ROC 曲線，曲線下面積分別為0.818（95%CI：0.726～0.910、P<0.001）、0.619（95%CI：0.496～0.742、P=0.070）。最佳截斷值為0.94，該截斷值預測預后的靈敏度和特異性分別為85.29%、69.57%。見圖1。

2.5 不同預后患者臨床特征的比較

不同預后患者在性別、年齡、高血壓病、冠心病、糖尿病、TC、LDL?C、HDL?C、隨機血糖比較，差異無統計學意義（P>0.05）；與預后良好患者比較，預后不良患者入院時NIHSS 評分、Hcy、hs?CRP 水平明顯升高，發病到入院時間明顯延長，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 不同預后患者臨床特征的比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

表3 不同預后患者臨床特征的比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

因素性別（男/女）年齡（歲）高血壓病冠心病糖尿病發病到入院時間（h）入院時NIHSS 評分TC（mmol/L）LDLC（mmol/L）HDLC（mmol/L）隨機血糖（mmol/L）Hcy（μmol/L）hs?CRP（mg/L）預后良好患組者（n=46）27/19 60.27±12.09 21（45.65）2（4.35）12（26.09）3.85±0.94 4.51±0.93 3.94±0.94 2.74±0.71 1.08±0.22 6.93±1.32 11.45±2.14 6.67±1.05預后不良患組者（n=34）21/13 62.44±10.84 18（52.94）3（8.82）10（29.41）4.23±0.78 7.97±1.42 4.21±1.05 3.03±0.82 1.01±0.25 7.61±1.94 17.94±4.09 10.77±2.46 χ2/t 值0.077 0.803 0.416 0.668 0.108 2.321 13.157 1.208 1.691 1.327 1.866 9.204 10.140 P 值0.782 0.425 0.519 0.414 0.742 0.023 0.000 0.231 0.095 0.188 0.066 0.000 0.000

圖1 miR?132、Ang?1 表達預測急性腦梗死患者預后的ROC 曲線

Figure 1 ROC curve of miR?132、Ang?1 expression in predicting prognosis of patients with acute cerebral infarction

2.6 急性腦梗死患者預后影響因素的logistics 回歸分析

以急性腦梗死患者預后情況作為因變量，以2.3 和2.5 中有統計學差異的因素作為自變量，在Logistics 回歸模型中進行分析可知：miR?132、Ang?1、入院時NIHSS 評分是腦梗死組患者預后不良的影響因素。見表4。

表4 急性腦梗死患者預后影響因素的logistics 回歸分析Table 4 Logistic regression analysis of prognostic factors in patients with acute cerebral infarction

3 討論

溶栓是臨床上治療急性腦梗死的有效手段之一，能夠及時恢復缺血腦組織的血流灌注、減輕神經功能缺血缺氧損害［6?7］。在臨床實踐中，早期篩選可能出現預后不良的急性腦梗死患者并盡早開始進行干預，對促進神經功能重建、改善預后具有積極意義。

miR?132 促進血管新生的效應涉及復雜的分子機制，國內陳澎［3］的動物實驗發現，過表達miR?132通過Ang?1/Tie?2 途徑促進缺血腦組織周圍的血管新生。Ang?1 是一類分泌型細胞因子，在血管內皮細胞增殖、成熟中起重要作用，與受體Tie?2 結合后能夠促進新生血管形成、成熟及重塑。國內閆薪［4］的臨床研究及本研究的檢測均發現急性腦梗死患者血清Ang?1 含量明顯降低，同時閆薪的研究還證實Ang?1 含量降低與急性腦梗死的病情加重有關。本研究結果提示在急性腦梗死的發病過程中，miR?132 表達降低可能使Ang?1 含量減少、削弱Ang?1 介導的促血管新生效應，進而不利于血管新生對神經功能的修復和重建、影響患者的預后。

國內多項關于急性腦梗死患者預后的研究均以出院后90 d 作為評估預后的時間點，在翟萌萌［8］、郭志良［9］、閆薪如［10］的臨床研究中，急性腦梗死預后不良的發生率分別為36.48%、51.43%、41.41%。本研究對急性腦梗死患者的90d 預后進行了隨訪，其中預后不良利患者34 例、發生率42.5%，與國內幾項研究基本一致。本研究結果提示miR?132 表達降低、Ang?1 含量減少可能與急性腦梗死患者預后不良有關。進一步經ROC 曲線分析miR?221、Ang?1對預后的預測價值發現：miR?132 對急性腦梗死患者的90 d 預后具有預測價值，但Ang?1 卻不能直接預測90 d 預后，可能原因是miR?132 不僅通過Ang?1發揮神經保護作用，還能通過促進VEGF 途徑、抑制細胞凋亡途徑、減輕氧化應激等方式來減輕神經功能損害、改善患者預后［11?13］，但miR?132 發揮神經保護作用的其他方式仍有待今后的研究來證實。

急性腦梗死患者預后的影響因素復雜，國內多項關于急性腦梗死預后影響因素的研究發現，入院時NIHSS 評分增加、Ang?1 減少與急性腦梗死預后不良的發生有關［8?9］。本研究結果提示盡早進行溶栓、再通血管的重要性；miR?132、Ang?1 與急性腦梗死患者預后不良相關的結果與miR?132、Ang?1 介導的血管新生效應、神經保護效應吻合。

綜上所述，急性腦梗死患者外周血miR?132 表達降低、Ang?1 含量減少且存在正相關；miR?132 的低表達可能引起血管新生不足，并且miR?132 是90 d 預后的影響因素、對預后不良具有預測價值。但miR?132 是否還通過其他機制影響急性腦梗死患者的預后需要今后進一步的研究來證實。此外，本研究未納入未接受溶栓治療的腦梗死患者，存在一定不足，在今后應納入未接受溶栓治療的腦梗死患者來探究miR?132、Ang?1 對腦梗死預后的評估價值。