系統性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細胞亞群和親環素A的表達及臨床意義

劉怡 譚靜雅 卿紅梅 周彬

作者單位：1.成都市溫江區人民醫院風濕免疫科，四川，成都611130

2.四川省人民醫院風濕免疫科，四川，成都610072

系統性紅斑狼瘡是一種累及多臟器的自身免疫性炎癥性結締組織病，多發于青年女性［1］，病因、機制尚不明確，目前大部分學者認為與遺傳、內分泌、感染、免疫異常等因素有關［2?3］。本病發病機制為T 淋巴細胞數量、功能降低、B 細胞增生，產生大量自身抗體［4］，與抗原結合沉積在皮膚、關節、小血管、腎小球等部位［5］，從而導致一系列的臨床癥狀。其中外周血T 淋巴細胞亞群和親環素A（Cyclophilin，CyP A）可介導發揮免疫抑制作用［6］，在本病發生發展過程中有不可忽視的作用。為此，本研究選取了2016年6月至2019年1月本院收治的系統性紅斑狼瘡患者52 例及健康體檢者34 例，旨在探討系統性紅斑狼瘡患者外周血T 淋巴細胞亞群和親環素A 的表達及臨床意義?，F報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2019年1月本院收治的系統性紅斑狼瘡患者52 例作為觀察組，健康體檢者34 例作為對照組，分別檢測其外周血T 淋巴細胞亞群和CyP A 表達水平。其中對照組男3 例，女31 例，年齡19～47 歲，平均年齡（33.95±5.71）歲；觀察組男7 例，女45 例，年齡20～46，平均年齡（33.75±5.52）歲。后者根據系統性紅斑狼瘡疾病活動度評分（systemic lupus erythematosus' Disease activity score，SLEDAI）［7］分為活動組（n=30）和非活動組（n=22），活動組男4 例，女26 例，平均年齡（32.81±5.49）歲，非活動組男3 例，女19 例，平均年齡（34.74±5.79）歲；根據是否有狼瘡性腎炎分為狼瘡性腎炎組（n=28）和無狼瘡性腎炎組（n=24），狼瘡性腎炎組男4 例，女24 例，平均年齡（33.06±5.61）歲，無狼瘡性腎炎組男3 例，女21 例，平均年齡（34.69±5.37）歲。觀察組與對照組、活動組與非活動組、狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組分別在性別、年齡等方面的比較差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 納入排除標準

納入標準：①研究組臨床癥狀、體征、實驗室檢查等均符合2012年系統性紅斑狼瘡國際臨床協作組公布的診斷標準［8］，均為初發病例；②系統性紅斑狼瘡活動性判斷參照Bombardier 法［9］計算，累計積分＞9 的患者歸為活動組，≤9 的患者為非活動組；③狼瘡性腎炎的患者排除原發性腎炎及其他繼發性腎臟疾??；④無過敏史，婦女非哺乳期或妊娠期；⑤所有納入研究者及（或）家屬均簽署知情同意書。排除標準：①合并慢性腎小球腎炎、腎病綜合征等其他腎內科疾病患者；②合并其他重要臟器疾病、血液系統、免疫系統疾病患者；③長期應用免疫抑制劑或糖皮質激素患者。

1.3 指標檢測方法

1.3.1 試劑/儀器

外周血T 淋巴細胞亞群檢測：試劑采用CD3、CD4、CD8單克隆抗體（由天津中國醫學科學院生物醫學工程研究所提供），FAC?SCalibur 型流式細胞儀進行檢測。CyP A 檢測：試劑為兔抗CyP（由天津市血液研究所提供），DG?3022 A 型酶聯免疫檢測儀檢測?？笴yPA 自身抗體檢測：試劑為羊抗人過氧化物酶抗體（由北京中山生物技術有限公司提供）。

1.3.2 方法

外周血T 淋巴細胞亞群檢測：采集空腹靜脈外周血標本6 mL，離心，血細胞稀釋，調整細胞濃度為2×107懸液，取樣50 μL，加入異硫氰酸熒光素標記的CD3、CD4、CD8單克隆抗體20 μL，孵育30 min，用FITC?IgG1 標記抗體作陰性對照［10］。每個樣本10 000 個細胞，結果以陽性細胞的百分率表示。

CyP A 檢測：采集空腹靜脈外周血標本6 mL，離心，取血漿標本6 mL，離心，取上清100 μL，過夜加入稀釋后的rhCyP A 100 μL，加入酶標記兔抗CyP 100 μL，37℃孵育1 h，避光顯色20 min，采用酶聯免疫吸附試驗（enzyme?linked immuno sor?bent assay，ELISA）檢測450 nm 吸光度。

抗CyPA 自身抗體檢測：采用間接ELISA 法，避光顯色，讀取450 nm 吸光度，以正常對照組吸光度的平均值加2 倍標準差為正常上限。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0 軟件進行統計分析，計量資料采用（）描述，采用t檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組與對照組T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 表達水平比較

研究組患者T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于對照組，CD8+和CyP A 高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between 2 groups（±s）

表1 兩組T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 水平比較（±s）Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between 2 groups（±s）

組別研究組對照組t 值P 值n 52 34 CD3+（%）63.24±2.37 72.07±3.15 14.810<0.001 CD4+（%）30.84±3.29 42.04±3.35 15.325<0.001 CD8+（%）36.17±2.94 31.32±2.75 7.671<0.001 CD4+/CD8+0.82±0.06 1.54±0.07 50.917<0.001 CyP A（μg/L）320.70±81.51 160.94±75.04 9.166<0.001

2.2 活動組和非活動組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達水平比較

活動組患者T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于非活動組，CD8+和CyP A 高于非活動組（P<0.05）。見表2。

表2 活動組和非活動組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+and CyPA expression levels between active and inactive groups（±s）

表2 活動組和非活動組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CyP A 表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+and CyPA expression levels between active and inactive groups（±s）

組別活動組非活動組t 值P 值n 30 22 CD3+（%）60.96±2.21 66.04±2.39 7.912<0.001 CD4+（%）27.95±3.09 34.48±3.60 7.020<0.001 CD8+（%）39.35±3.14 34.92±2.15 5.702<0.001 CD4+/CD8+0.70±0.07 0.97±0.11 10.806<0.001 CyP A（μg/L）398.62±82.80 187.45±80.16 9.208<0.001

2.3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 表達水平比較

狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于對照組，CD8+和CyP A 高于無狼瘡性腎炎組（P<0.05）。見表3。

表3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 表達水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between patients with lupus nephritis and those without lupus nephritis（±s）

表3 狼瘡性腎炎組與無狼瘡性腎炎組患者T 淋巴細胞亞群指標和CyP A 表達水平比較（±s）Table 3 Comparison of T lymphocyte subsets and CyP A expression levels between patients with lupus nephritis and those without lupus nephritis（±s）

組別狼瘡性腎炎組無狼瘡性腎炎組t 值P 值n 28 24 CD3+（%）61.85±2.26 65.71±2.44 5.884<0.001 CD4+（%）28.08±3.15 34.16±3.57 6.499<0.001 CD8+（%）37.83±3.04 35.16±2.83 3.221 0.002 CD4+/CD8+0.71±0.05 0.94±0.10 10.901<0.001 CyP A（μg/L）394.41±82.43 189.16±80.46 8.960<0.001

2.4 抗CyP A 抗體在系統性紅斑狼瘡患者中的表達

34 例健康體檢者的中有1 例抗CyP A 抗體陽性，陽性率為2.94%，52 例系統性紅斑狼瘡患者中有24 例抗CyP A 抗體陽性，陽性率為46.15%，高于前者（P<0.05），3 類抗體IgG、IgA、IgM 的陽性率分別為36.54%（19/52）、19.23%（10/52）、13.46%（7/52）?？笴yP A 抗體在出現皮膚黏膜損害、關節痛、發熱、白細胞減少等臨床表現的患者中的陽性率較高。見表4。

表4 研究組患者臨床特征與抗CyP A 抗體的關系［n（%）］Table 4 The relationship between clinical features and anti?CyP A antibodies in the study group［n（%）］

3 討論

系統性紅斑狼瘡是一種以多系統損害且伴有多種自身抗體為特征的免疫性疾病，其臨床表現復雜，病情遷延［11?12］，難以治愈，部分患者可自行緩解，或呈“一過性”發作后病癥完全消失。大多數患者可出現不同程度的皮膚和粘膜損害，骨骼、心臟、呼吸系統、腎臟、神經系統、血液系統等受累，嚴重者可致充血性心力衰竭、肺栓塞等［13］。本病病因至今尚未肯定，大部分學者認為與T 細胞免疫功能異常及CyPA 表達有密切聯系［14?15］。

親環素（Cyclophilin，CyP）即環孢素A 結合蛋白［16］，是指一類與環孢素A 有高親和力、能與其結合的蛋白質，其最主要的一種即為CyP A。CyP A在生物界存在廣泛，結構具有高度保守性，在細胞的生命過程中有重要作用。CyP A 對中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞等炎性細胞有較強的趨化作用，介導環孢素A 抑制免疫反應［17］，因而可作為炎癥和免疫刺激反應的代表性因子，參與、推動自身免疫系統疾病、感染性疾病、心血管疾病、腫瘤等疾病的發生發展。研究發現，全身性紅斑狼瘡患者體內CyP A 的表達水平顯著升高，同時引起抗親環素自身抗體的產生，而且與疾病的活動性有關［18］。本組研究表明，系統性紅斑狼瘡的患者CyP A 水平及其抗體陽性率（46.15%）高于正常體檢者（2.94%），處于活動期或狼瘡性腎炎的患者CyP A 水平高于非活動期、無狼瘡性腎炎的患者。由此表明，本研究結果與上述研究結論具有一致性，CyP A 與系統性紅斑狼瘡患者的發病和病情有相關性，可以通過檢測患者外周血中CyP A 的水平變化來監測患者病情變化，區別患者處于活動期或非活動期、有無狼瘡性腎炎，從而指導臨床治療。

有研究表明，在系統性紅斑狼瘡的發生發展過程中，T 淋巴細胞亞群的紊亂亦扮演著重要的角色，B 細胞的高度活化、過度增殖是以T 細胞異常為基礎且在其誘導下產生的［19］。T 細胞亞群中的CD4+和CD8+T 細胞的相互制約及平衡具有調節機體免疫應答的重要作用［20］，其數量異常體現了T細胞免疫功能的異常。一項大樣本研究納入了100 例高加索白種人系統性紅斑狼瘡患者，發現CD4+與系統性紅斑狼瘡呈負相關［21］。Bengtsson等［22］發現即使系統性紅斑狼瘡處于緩解狀態，T 細胞平衡亦未達到正常水平。在本組研究結果中，系統性紅斑狼瘡患者尤其是處于活動期、狼瘡性腎炎患者T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的表達水平均偏低，CD8+較高，由此表明系統性紅斑狼瘡患者存在T 淋巴細胞紊亂，尤其在狼瘡性腎炎患者中表現明顯。T 細胞功能紊亂可致免疫功能缺陷，在系統性紅斑狼瘡患者中表現為抵抗力低下，易出現呼吸道、泌尿道、消化道感染等并發癥。

綜上所述，系統性紅斑狼瘡患者活動期、出現狼瘡性腎炎時其外周T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的表達水平低于非活動期、無狼瘡性腎炎的患者，CD8+和CyP A 高于非活動期、無狼瘡性腎炎的患者，由此表明，外周T 淋巴細胞亞群和CyP A 的表達水平與系統性紅斑狼瘡的發生發展、病情程度及預后轉歸有密切聯系。