CDK8、CXCL13及REGγ在子宮內膜癌組織中的表達及臨床意義

哈斯圖雅 釵麗干 崔山丹 夏書琴★

作者單位：1.內蒙古自治區人民醫院婦產科，內蒙古，呼和浩特010017

2.內蒙古自治區人民醫院病理科，內蒙古，呼和浩特010017

子宮內膜癌（Endometrial Carcinoma，EC）為女性生殖系統三大惡性腫瘤之一，近年來發病率和病死率均有上升趨勢，對女性生命健康造成嚴重威脅［1］。尋找EC 早期診斷及侵襲轉移相關的分子標志物尤其重要［2］。既往研究發現，EC 增殖、轉移及擴散與周期蛋白依賴性蛋白激酶（cyclin?dependent protein kinases，CDKs）表達情況密切相關，CDKs在細胞增殖與分化中具有調控作用［3］。趨化因子13（Chemokine CXC ligand13，CXCL13）是CXC 類趨化因子家族的一員，在多種惡性腫瘤發生、發展中具有重要作用［4］。蛋白酶體激活因子11S 調節蛋白復合物γ 亞單位（11S regulator complex gam?ma subunit，REGγ）則是一種定位于細胞核內的蛋白質，與細胞生長調控存在密切聯系［5］?；诖?，本研究通過檢查EC 患者CDK8、CXCL13 及REGγ的水平，旨在探討上述因子水平在EC 中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2015年6月至2019年6月的90 例EC 患者作為研究組。納入標準：①均符合子宮內膜癌診斷標準［6］；②臨床資料無缺損或丟失；③入組時未接受任何治療，包括藥物、放療及化療等；④主要臟器功能正常，無嚴重心、肝腎功能障礙；⑤年齡30～80 歲。排除標準：①患有其他惡性腫瘤患者；②癌癥轉移；③近期使用抗焦慮、抑郁等藥物者；④存在認知功能障礙者。平均年齡（48.56±6.77）歲；病程平均（3.79±2.58）年；臨床分期：Ⅰ期50 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期21 例；有淋巴結轉移者22例；分化程度：高分化65 例，中低分化25 例。收集同期接受健康體檢的志愿者78 例納入對照組，平均年齡（47.89±5.46）歲，兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。本研究經過醫院倫理委員會批準通過，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試劑

鼠抗人CDK8、CXCL13 及REGγ 單克隆抗體購自北京中杉金橋生物工程有限公司；SP 免疫組織化學系列工作液試劑盒、DAB 顯色劑購自河北博海生物有限公司。

1.2.2 染色方法

所有標本手術切除后立即用10%甲醛固定，組織切片后脫蠟、水化。根據鏈霉素抗生物素蛋白?過氧化物酶（Streptomycin avidin peroxi?dase，S?P）免疫組化染色法對CDK8、CXCL13 及REGγ 水平進行檢測，具體方法嚴格按照試劑盒說明執行。每批切片染色均以PBS 代替一抗作陰性對照，CDK8、CXCL13 及REGγ 用已知陽性表達的組織切片作陽性對照。一抗稀釋比例均為1∶100。

1.2.3 結果判斷［7］

CDK8 呈細胞膜著色，CXCL13 呈細胞質或細胞膜著色，REGγ 呈細胞核著色，根據陽性細胞百分比、染色強度判定。無陽性細胞0 分，陽性細胞<10% 1 分，陽性細胞10%～50% 2 分，陽性細胞>50%3 分。染色強度判定：無色0 分，淡黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分?？偡e分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分≥3 分。

1.3 觀察指標

①比較對照組與研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達情況。②分析CDK8、CXCL13 及REGγ 表達與EC 臨床病理特征的關系。③對患者進行1年電話隨訪，分析其預后生存與死亡情況，并影響EC 患者預后死亡的獨立危險因素。④分析CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達對EC 患者預后預測價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析，計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以（）表示，采用t檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預后生存的獨立危險因素；采用ROC 曲線分析CDK8、CXCL13 及REGγ 對EC 患者預后死亡的預測價值；以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達比較

研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 陽性表達率均高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達比較［n（%）］Table 1 Comparison of Cdk8，CXCL13 and reg γ protein expression between 2 groups［n（%）］

2.2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達與EC 臨床病理特征的關系

CDK8、CXCL13 的陽性表達者在年齡、腫瘤直徑比較差異無統計學意義（P>0.05），CDK8、CXCL13 的陽性表達者在分化程度、淋巴結轉移、病理類型、肌層浸潤深度及臨床分期比較差異均有統計學意義（P<0.05）。REGγ 的陽性表達者年齡、腫瘤直徑、分化程度及臨床分期比較差異均無統計學意義（P>0.05），REGγ 的陽性表達者在淋巴結轉移、病理類型及肌層浸潤深度比較差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達與EC 臨床病理特征的關系［n（%）］Table 2 the relationship between the expression of Cdk8，CXCL13 and reg γ and the clinicopathological features of EC［n（%）］

2.3 影響EC 患者預后死亡的危險因素分析

術后對患者進行1年隨訪，其中死亡17 例，死亡率為18.89%。多元Logistic 回歸分析結果顯示，腫瘤分化程度中低、臨床分期Ⅲ、合并淋巴結轉移、CDK8、CXCL13 及REGγ 陽性表達是影響胃癌患者預后死亡的獨立危險因素（P<0.05）。見表3。

表3 影響EC 患者預后死亡的危險因素分析Table 3 Analysis of risk factors influencing the prognosis of EC patients

2.4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯合檢測對EC 患者預后生存的預測價值

ROC 結果示，CDK8、CXCL13 及REGγ 聯合檢測AUC 為0.769，較單獨檢測高。見表4、圖1。

表4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯合檢測對EC患者預后生存的預測價值Table 4 the prognostic value of Cdk8，CXCL13 and reg γ single and combined detection in EC patients

圖1 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項及聯合檢測曲線分析Figure 1 Analysis of single and combined detection curves of Cdk8，CXCL13 and reg γ

3 討論

EC 是臨床婦科最常見的惡性腫瘤之一。其發病率已有超過宮頸癌的趨勢［8］。惡性腫瘤的發生、發展及浸潤轉移是由各種信號傳導、趨化因子、轉錄因子等途徑共同實現，因此，尋找識別EC 發展相關的新型因子及預測預后的標志物是近年來研究的熱點［9］。

CDK8 是細胞周期依賴性蛋白激酶（Cell cycle dependent protein kinase，CDK）家族中的一員，目前CDK8 基因發揮致癌作用的機制尚未十分明確［10］。但國外已有較多研究表明，CDK8 表達異常在惡性黑素瘤、結直腸癌、胃癌的發生中起到重要作用［11］。而鮮有關于CDK8 表達與官頸癌發生發展關系的相關研究。本組研究結果與Remy 等［12］研究結果報道相符。進一步多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預后死亡的危險因素發現，CDK8 陽性表達亦是影響EC 患者死亡的危險因素，因此可推斷CDK8 也可作為評估EC 患者預后的指標之一。

CXCL13 是自于趨化因子家族的細胞因子，可調控腫瘤細胞的生長、增殖，抑制腫瘤細胞凋亡，最終誘發惡性腫瘤的發生發展。Bhatti 等［13］研究表明，CXCL13 在惡性腫瘤，如肝癌、胃癌中均呈高表達，其表達率與患者術后生存率密切相關。Shea等［14］研究發現，CXCL13 抑制劑可通過作用于CX?CR5/ERK 信號通路來減弱腫瘤組織的生長。多元Logistic 回歸分析發現，CXCL13 陽性表達是影響EC 患者預后死亡的危險因素?？梢奀XCL13 表達在EC 的惡性進展過程中具有重要作用，其高表達提示預后不良，這可能與與CXCLl3 促進腫瘤新生血管的生成及腫瘤細胞的增殖活化、轉移有關。

REGγ 是一種定位于細胞核內的蛋白質。多項研究發現，該因子在乳腺癌、直腸癌等惡性腫瘤中呈高表達，被認為是一種潛在的癌癥標簽［15］。本研究結果發現，與正常對照組比較，EC 患者REGγ 陽性表達率明顯升高，且與分化程度、淋巴結轉移、病理類型及肌層浸潤深度有關，推測REGγ 對于子宮內膜癌的晚期評估和預后監測可能起到輔助作用。進一步ROC 曲線分析提示聯合檢測上訴指標可作為預測患者預后生存的有效手段。但是，EC發展過程是一個有多級因子作用的復雜過程，由于本研究納入樣本量較少，有可能造成統計學上有所偏差，因此尚需要大樣本量研究證實。

綜上所述，CDK8、CXCL13 及REGγ 在EC 中陽性表達率高，推測CDK8、CXCL13 及REGγ 參與了EC 組織增生、分化及發展過程，臨床上可通過檢測三者表達情況對患者病情進展及預后進行評估。