陳利輝
(中紡檢測(福建)有限公司,福建泉州 362000)
傳統檢測方法存在種種缺陷,難以滿足實際檢測準確性需要,因此有必要加強對高效液相色譜法合成色素檢測分析,更好地保障食品安全。
高效液相色譜儀,型號為島津LC-2030C;真空脫氣機,型號為島津LC-2030C系列,與高效液相色譜儀配套;自動進樣器;二極管陣列檢測器(PDA);ProElut PWA-2固相萃取柱,規格為150 mg/6 mL。
乙酸銨溶液,濃度為0.02 mol/L;提取溶劑;質量濃度為0.500 g/L的日落黃、檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍標準溶液,質量濃度為1.00 g/L的赤蘚紅、誘惑紅標準溶液,質量濃度為93.5%的酸性紅標準品。
稱取1 g樣品,并將其置于50 mL離心管中,然后再加入20 mL的提取溶劑,漩渦振蕩處理2 min。接著,超聲提取10 min。再于6 000 r/min條件下進行離心處理,提取上層清液。在此基礎上,再取下層殘留物,加入10 mL提取溶劑,再進行漩渦振蕩處理2 min,超聲提取15 min,于6 000 r/min的條件下,離心處理溶液2 min,再次收集上層提取物[1-2]。針對下層提取物,再按照上述步驟,重復提取3次,將上述提取3次的上層清液合并在一起,置于40 ℃水浴條件下,然后進行減壓蒸發濃縮,在濃縮至3 mL后,加入2 mL水,混勻,用甲酸將溶液pH調至5左右。采用ProElut PWA-2固相萃取柱,實施凈化處理。依次加入5 mL甲酸溶液(體積分數為2%)、水與甲醇(體積分數為2%),實施小柱沖洗,同樣棄掉流出液,用洗耳球吹干小柱[3]。加入5 mL氨水-甲醇(15+85)溶液,對小柱實施洗脫處理,并完成洗脫液的收集。然后將其置于50 ℃的環境下,實施氮吹操作,在吹至0.5 mL后,采用濃度為0.02 mol/L乙酸銨溶液進行定容,在定容至1 mL后,0.45 μm膜過濾,檢測。
由于蛋白質不溶于乙醇,因此可采用乙醇將不溶于水的蛋白質除去,成功分離色素,為提高分離效果,再加入少量氨水,使色素在乙醇中充分溶解,進一步降低色素的提取難度[4]。因此,本次試驗選用乙醇-乙腈-甲醇-氨水混合溶液作為提取溶劑。
在本次試驗中,采用了3種不同流動相對樣品實施分析,即乙腈-水、乙腈-乙酸銨和甲醇-乙酸銨。由試驗結果知,乙腈-水為流動相,難以有效分離合成色素;而采用甲醇-乙酸銨,只能夠分離部分合成色素;當采用乙腈-乙酸銨流動相時,上述8種合成色素均能夠得到有效的分離,且獲得的峰形也比較優秀[5]。為進一步驗證這一結果,確定流動相濃度,試驗采用了0.01~0.05 mol/L的5種不同濃度乙酸銨溶液進行對比。結果發現,當采用質量濃度為0.02 mol/L的乙酸銨溶液時,上述8種合成色素有最佳的分離效果,后續若繼續增加該濃度數值,相應峰形和分離效果改善均不明顯,甚至還出現下降的趨勢?;诖?,本次試驗選用質量濃度為0.02 mol/L的乙酸銨溶液作為流動相色譜條件。
在試驗開展的過程中,采用空白豬大腸樣品,并在此基礎上,加入了8種合成色素標準溶液,不同標準溶液的檢出限濃度分別為標準檢出限度的1倍、2倍及10倍,并在試驗方法的指導下,完成樣品的處理,并平行測定6次,計算回收率及相對標準偏差(RSD)。由表1可知,各色素的加標回收率在84.5%~99.1%,RSD在1.4%~2.5%,與最終檢測要求相符合。除此之外,試驗改變了檢測樣品后,比如采用了茶葉等,最終回收率與精密度結果依然符合檢測 要求。
表1 精密度與回收實驗結果(n=6)
綜上所述,加強對食品中常見的食品合成色素的檢測,要采用高效液相色譜法測定復雜食品基質的合成色素。試驗結果表明,該檢測方法能夠有效彌補傳統檢測方法的缺陷,提高了檢測效果,能夠大面積推廣應用。