汪雪娟,高 翀,龐懷林
(1.上海泰禾化工有限公司,上海 201615;2.南通泰禾化工股份有限公司,南通 226407)
氟咯草酮(fluorochloridone)是原美國施多福公司(Staufer Chemical Co.) 20世紀70年代末開發、80年代中期投產的吡咯烷酮類旱田除草劑,其主要通過抑制植物體內類胡蘿卜素的生物合成而發揮除草效果[1-3],主要登記用于小麥、冬黑麥、馬鈴薯、向日葵等作物田防除各種闊葉雜草[4-6]。目前有關于氟咯草酮原藥的分析方法[7]和氟咯草酮乳油制劑的GC-MS方法的報道[8],但是氟咯草酮乳油制劑HPLC分析方法尚未見公開報道。氟咯草酮乳油是農業生產實際中使用最多最常見的一種劑型。為了確保該產品生產質量及其防治效果,建立一種穩定、準確、可靠、快速的250 g/L氟咯草酮乳油HPLC分析方法尤為重要。
LC-20AD高效液相色譜儀配可調波長紫外檢測器:島津SPD-M20A二極管陣列檢測器及色譜工作站Labsolution (日本島津);ML204型電子天平(瑞士梅特勒托利多集團);2200T型超聲波清洗儀(上海安譜科學儀器有限公司);0.45 μm有機相濾膜(上海安譜實驗科技股份有限公司)。
甲醇:色譜純(上海安譜實驗科技股份有限公司);新蒸二次蒸餾水;氟咯草酮標樣,質量分數99.0% (沈陽化工研究院);250 g/L氟咯草酮乳油(南通泰禾化工股份有限公司)。
色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18柱 (250 mm×4.6 mm,內裝5 μm填充物);流動相為甲醇-水(體積比64∶36),經濾膜過濾,脫氣;流速為1.0 mL/min;檢測波長為250 nm;柱溫為(30±2) ℃;進樣體積為10 μL。在上述色譜操作條件下,保留時間:順式氟咯草酮約15.3 min,反式氟咯草酮約16.3 min。氟咯草酮標樣和試樣的高效液相色譜圖見圖1和圖2。
圖1 氟咯草酮標樣的高效液相色譜圖
圖2 250 g/L氟咯草酮乳油的高效液相色譜圖
1.3.1 標樣溶液的配制
稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g)氟咯草酮標樣于50 mL容量瓶中,加入約 30 mL甲醇,超聲振蕩10 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻;用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。
1.3.2 試樣溶液的制備
稱取含0.1 g (精確至0.000 1 g) 250g/L氟咯草酮乳油試樣于50 mL容量瓶中,加入約30 mL甲醇,超聲振蕩10 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻;用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。
在上述操作條件下,待儀器基線穩定后,連續注入數針標樣溶液,待相鄰2針氟咯草酮的峰面積相對變化小于1.0%,按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。
試樣中氟咯草酮的質量分數按式⑴計算,氟咯草酮的質量濃度按式⑵計算:
式中:X1為試樣中氟咯草酮的質量分數(%);X2為試樣中氟咯草酮的質量濃度(g/L);m1為氟咯草酮標樣的質量(g);A2為試樣溶液中順式與反式氟咯草酮峰面積總和的平均值;P為氟咯草酮標樣的純度(%);m2為試樣質量(g);為試樣前后2針標樣溶液中順式與反式氟咯草酮峰面積總和的平均值;ρ為20 ℃時250 g/L氟咯草酮乳油的密度值(g/mL)。
本試驗采用 HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別氟咯草酮。氟咯草酮標樣、250 g/L氟咯草酮乳油中的氟咯草酮 HPLC-DAD峰純度中均顯示未檢測到不純物,最小峰純度指數均為正數,說明有效成分處無其他物質干擾,符合定量分析要求。峰純度如圖3、圖4所示。
圖3 氟咯草酮標樣中目標峰純度
圖4 250 g/L氟咯草酮試樣中目標峰純度
稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g)氟咯草酮標樣于50 mL容量瓶中,加入約 30 mL甲醇,超聲振蕩10 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,此為標樣儲備液。
用移液管分別移取3、4、5、6、7、8 mL的標樣儲備液至6個50 mL中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,備用。按照本方法所確定的操作條件,待儀器穩定后,按照質量濃度遞增順序測定每個溶液中氟咯草酮的峰面積,取2次測定的平均結果,結果見表 1。以氟咯草酮質量濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制標準曲線,見圖 5。由圖 5可見,氟咯草酮質量濃度(x)與其對應的峰面積相應值(y)之間呈現出良好的線性相關,其線性回歸方程為y=19 122.809 9x+5 660.828 6,相關系數R2=1.000 0。
表1 氟咯草酮線性范圍的測定
圖5 氟咯草酮峰面積與質量濃度之間的線性關系圖
在上述色譜操作條件下進行分析,對同一250 g/L氟咯草酮乳油試樣平行測定6次,結果見表2??梢?,氟咯草酮的標準偏差和變異系數分別為0.02和0.09%。
表2 250 g/L氟咯草酮乳油的精密度試驗結果
稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g) 氟咯草酮標樣至50 mL容量瓶中,加入約30 mL甲醇,超聲振蕩10 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至刻度,搖勻,此為標樣儲備液。
按250 g/L氟咯草酮乳油配方比例要求,將除原藥以外的所有助劑混勻作制劑空白,稱取6份0.03 g(精確至0.000 01g)制劑空白于 50 mL容量瓶中,加入約30 mL甲醇,再移取5 mL上述標樣儲備液至稱有制劑空白的容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,備用。在上述操作條件下分別進行分析測定,結果見表 3??梢?,氟咯草酮的平均回收率為99.80%。
表3 250 g/L氟咯草酮乳油的準確度試驗結果
本文采用高效液相色譜技術建立了一種快速測定250 g/L氟咯草酮乳油中有效成分氟咯草酮的分析方法。采用 C18不銹鋼色譜柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 μm)和紫外檢測器,以甲醇-水(體積比 64∶36)為流動相,測得有效成分的精密度和準確度高、線性關系良好。該方法具有操作簡便、檢測過程穩定、結果準確、分離效果好等特點,可用于250 g/L氟咯草酮乳油生產過程中產品的檢測。