PPAR-γ、MMP-3及Bcl6水平變化與RA病情活動性和病理評分的相關性

莊建陽 劉雪梅 代思明 王艷麗 李恒

類風濕性關節炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種致使周圍關節受累的多系統性炎癥性疾?。?］。RA 病情持續時間長，易反復發作，嚴重影響患者的相關活動功能［2］。近年來隨著人口老齡化，RA 發病率呈不斷上升趨勢發展。臨床實踐顯示RA 早期及時規范的治療后預后較好，但該疾病早期病情隱匿，診斷較困難。故尋求能為RA 診斷、病情監測提供可靠依據的分子標記物成為國內外學者關注的焦點［3］。過氧化物酶體增殖活化受 體-γ（peroxisome proliferator-activated receptors，PPAR-γ）是一類配體依賴序列特異的核轉錄因子，在炎癥反應中的作用引起了人們的關注［4］。研究發現，PPAR-γ 在自身免疫反應及炎癥過程中發揮重要作用［5］?；|金屬蛋白酶3（Matrix metalloprotein-3，MMP-3）是滑膜分泌的細胞因子，Han 等學者［6］報道，MMP-3 對金屬蛋白酶和其它蛋白水解酶的合成起著重要調節作用。Tsai 等［7］研究發現，轉錄抑制因子B 細胞淋巴瘤因子6（B cell lymphoma，Bcl6）與免疫系統的炎癥反應相關。本研究就PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 在類風濕性關節炎中的表達及其與病情活動性及滑膜炎病理評分的相關性進行分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2020年8月本院收治的102 例RA 患者作為研究組。納入標準：①符合類風濕性關節炎的相關診斷標準［7］，并結合實驗室檢查以及影像學檢查明確診斷。②臨床資料完整，均自愿參加本次研究，并簽署相關協議書。排除標準：①存在其他系統疾病或惡性腫瘤等疾病患者；②伴隨嚴重心、肝、腎功能不全患者；③合并有免疫系統的其他疾病患者；④存在精神疾病無法配合本研究或依從性差者。根據《RA 患者的病情評分（Disease activity score 28，DAS28）》進行活動度劃分［8］：2.6＜DAS28≤3.2 為低活動度組：29 例；3.2＜DAS28≤5.1 為中活動度組：45 例；DAS28＞5.1為高活動度組：28 例。

選取同期進行健康體檢的102 例健康志愿者作為對照組。兩組性別、年齡、體質指數等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過。

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

組別研究組對照組χ2/t 值P 值n 102 102性別（n）男29（28.43）31（30.39）0.094 0.759女73（71.57）71（69.61）年齡（歲）48.42±11.32 46.03±13.17 1.390 0.166體質指數（kg/㎡）23.53±3.14 24.26±2.33 1.886 0.061

1.2 檢測方法

取所有受試者清晨空腹靜脈全血5 mL，采用未加抗凝劑的標準采樣管進行采集，離心（3 000 r/min，10 min）取血清后分別存放在聚丙烯EP 管中，在-80℃冰柜中待檢。采用熒光定量PCR 檢測PPAR-γ的表達；采用雙抗體夾心法檢測MMP-3 的表達。通過細針滑膜活檢術獲取滑膜組織，采用免疫組織化學染色檢測Bcl6 的表達，檢測嚴格按照使用說明書進行。Bcl6 陽性判定標準［9］：由2 名以上病理學專家復核判斷，取兩者平均分為最后得分用，Bcl6 呈細胞核著色，根據陽性細胞百分比、染色強度判定。0 分無陽性細胞，1 分陽性細胞5%～10%，2 分10%～50%，3 分＞50%。染色強度判定：0 分無色，1 分淡黃色，棕黃色2 分，棕褐色3 分?？偡e分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分≥3 分。

1.3 觀察指標

①比較兩組不同人群的PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平；②比較不同病情活動程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平；③分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動程度及滑膜炎病理評分的相關性?；ぱ撞±鞬renn’s 評分［10］，即為滑膜襯里層增生評分、襯里下層炎癥程度評分以及血管生成情況評分累計總和，0 分表示無滑膜炎癥；1 分表示輕度滑膜炎癥、炎性細胞輕度浸潤；2 分表示中度滑膜炎癥、炎性細胞中度浸潤；3分表示重度滑膜炎癥、炎性細胞重度浸潤。由2 位風濕科醫生進行雙人雙盲評分，取兩者平均分為最后得分。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析，計量資料采用（）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗；計數資料采用n（%）表示，采用χ2檢驗；采用Spearman分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動程度及滑膜炎病理評分的相關性，以P＜0.05 為差異具統計學意義。

2 結果

2.1 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平比較

研究組PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 陽性表達率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2、圖1。

表2 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

表2 2 組PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平比較［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

組別研究組對照組t/χ2值P 值n 102 102 PPAR-γ（pg/mL）38.52±21.43 10.01±3.04 13.303＜0.001 MMP-3（pg/mL）72.54±21.42 30.26±8.72 18.464＜0.001 Bcl6陽性85（83.33）0（0.00）145.714＜0.001陰性17（16.67）102（100.00）

圖1 Bcl6 免疫組化染色（SP，×400）Figure 1 BCL6 immunohistochemical staining（SP，×400）

2.2 不同病情活動程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3及Bcl6 表達水平比較

PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 陽性表達：重活動度組＞中活動度組＞低活動度組，各組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病情活動程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表達水平比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

表3 不同病情活動程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表達水平比較［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

注：a 與低活動度組相比，P＜0.05；b 與中活動度組相比，P＜0.05。

組別低活動度組中活動度組重活動度組F 值P 值n 29 45 28 PPAR-γ（pg/mL）18.39±11.60 32.15±17.62a 41.34±24.55ab 11.25＜0.001 MMP-3（pg/mL）51.63±16.75 67.49±18.39a 83.58±25.27ab 18.01＜0.001 Bcl6 陽性19（65.52）39（86.67）27（96.43）10.445 0.005

2.3 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動程度及滑膜炎病理評分的相關性

Spearman 相關分析顯示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動程度及滑膜炎病理評分呈正相關（P＜0.05）。見表4。

表4 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 與RA 患者病情活動程度及滑膜炎病理評分的相關性Table 4 Correlation of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 with disease activity and synovitis pathological score in RA patients

3 討論

RA 是一類在多種因素作用下發生的自身免疫性疾病，具有較高的致殘率。我國是RA 的高發地區，目前大約有400～500 萬人患有該疾病，發病率約占0.32%～0.36%［11］。RA 早期易出現關節功能受限、疼痛、腫脹癥狀，晚期則表現為關節畸形、關節僵硬及關節不同程度的畸形，嚴重者甚至會出現骨骼肌萎縮和骨頭損傷，且病程時間長，若病情控制不佳則可能危及全身臟器系統［12］?，F階段，臨床常采用血清學分子指標、臨床癥狀、關節功能以及影像學資料等評估RA 病情活動度，其中血清學指標以簡單快捷、準確性高等優勢成為指導臨床診治的重要手段。

PPARs 是一類配體依賴的轉錄調節因子，具有N 端區、居中高度保守的DNA 結合區和C 端的激素結合區［13］。PPARs 配體通常為脂溶性分子，當其與各自的配體結合后可引起機體的變化，促進或抑制靶基因的表達［14］。PPAR-γ 作為PPARs主要的亞型之一，與多種炎性細胞的活性和表達關系密切。PPAR-γ 在原位支氣管氣道上皮細胞中有表達，可抑制此類細胞的活性，并激活內源性PPAR-γ，拮抗炎性反應。Zhu 等［15］認為PPAR-γ 具有改變巨噬細胞的轉運、增加巨噬細胞吞噬功能等作用，可促進實用性免疫反應的發生。Ahn 等［16］研究顯示，MMP-3 是一種鋅離子依賴酶，負責細胞外基質成分降解為其主要功能，作用于多種基質蛋白底物，MMP-3 過高的表達會導致軟骨框架結構崩解，從而破壞患者關節功能。Lei 等［17］研究表明，RA 患者關節液中MMP-3 含量顯著升高，檢測MMP-3 可為評估RA 病情嚴重程度提供參考。Yang 等［18］研究發現，BCl6基因位于3q27 染色體，是一種具有鋅指結構的轉錄抑制因子，是B 細胞生發中心的起源。本研究結果與相關研究結果相符［19］。提示RA患者存在PPAR-γ、MMP-3 過表達及Bcl6 陽性表達的情況。BCl6 是生發中心的抗原和調控因子，參與細胞增殖、分化、凋亡、DNA 損傷修復以及炎癥過程等。PPAR-γ、MMP-3 表達異常會促進新生血管的生成、免疫逃逸等一些列病理過程，發揮促炎作用。本研究顯示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 的變化與患者病情活動程度及滑膜炎病理評分呈正相關關系，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表達水平的上升提示患者病情處于活動、滑膜炎癥加重狀態，表明PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6三者在評估RA 發生、發展中具有良好的輔助作用。

綜上所述，RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 水平較健康者顯著升高，且與患者病情活動性及滑膜炎病理評分具有一定的相關性，可作為臨床診斷RA 和評估病情的輔助檢查。