宮頸癌患者HMGA1、HMGB1表達水平與高危型HPV感染的關系及臨床意義

陳慧 陳光輝 王萬黨 鄧宇濤

宮頸癌是常見的女性生殖系統惡性腫瘤，流行病學調查表明其發病率和死亡率均位居女性惡性腫瘤第四位，嚴重危害我國女性生命健康［1］。宮頸癌早期無特征性臨床表現，易被患者忽視導致病情進展，晚期宮頸癌患者治療效果不佳，常導致患者預后不良的發生［2］。人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）根據其致癌能力分為高危型、潛在高危性和低危型三種，高危型HPV 感染的臨床表現包括尖銳濕疣、宮頸鱗狀上皮內病變等，是導致宮頸癌發生的重要因素［3］。高遷移率族蛋白（High mobility group protein，HMG）是一種晚期炎癥介質，在膿毒癥、感染性休克和病毒感染中表達水平升高［4］。高遷移率族蛋 白A1（High mobility group protein A1，HMGA1）和高遷移率族蛋白B1（High mobility group protein B1，HMGB1）不僅能夠通過參與細胞內DNA 的復制轉錄過程調控細胞自噬水平，促進腫瘤免疫逃逸的發生，還能夠促進腫瘤微血管生成，促進腫瘤生長轉移［5-6］。本研究通過檢測宮頸癌組織中HMGA1、HMGB1 水平探究其與高危型HPV 感染的關系，旨在為宮頸癌的篩查提供新的指標。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年8月至2020年8月南方醫科大學附屬小欖醫院收治的200 例宮頸癌患者作為研究組，另選取同期在本院體檢的女性健康就診者50 名作為對照組。研究組患者根據HPV 感染情況分為高危組和非高危組，其中感染HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV61 等高危型HPV 者為高危組，其余患者為非高危組。

納入標準：①所有宮頸癌患者診斷依據《2021 NCCN 子宮頸癌臨床實踐指南（第1 版）》［7］，且經陰道鏡活檢確診為宮頸癌；②所有患者均為初診，未接受過相關治療；③患者不合并重要臟器功能損傷、自身免疫性疾病及精神神經疾??；④患者臨床資料完整；⑤患者及家屬均簽署對研究知情同意書，研究經本院醫學倫理委員會研究批準。排除標準：①合并其他感染性疾病者；②合并心、肝、腎等重要臟器損傷的患者；③合并其他惡性腫瘤的患者；④孕婦及哺乳期婦女。兩組患者年齡、BMI 指數等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

HE 免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物公司，HPV 鑒定試劑盒購自潮州凱普生物化學有限公司，HMGA1、HMGB1 一抗均購自美國Abcam 公司，含辣根過氧化物酶的山羊抗兔二抗購自北京中杉金橋生物公司，酶聯免疫吸附法試劑盒購自美國Thermo Fisher 公司。

1.2.2 實驗方法

收集患者子宮頸組織標本石蠟包埋后切片烘烤，使用二甲苯脫蠟，再使用梯度乙醇洗脫二甲苯，滴加0.3%H2O2 室溫孵育阻斷過氧化物酶活性，采用HE 免疫組織化學法試劑盒染 色，DAB顯色于鏡下觀察，控制染色時間。使用梯度乙醇脫水后中性樹膠封片進行觀察，按陽性細胞占比計分，＜5%記0 分、5%～25%記1 分、26%～50%記2分、51%～75%記3 分、＞75%記4 分。按著色程度計分，無染色記0 分、淺黃色記1 分、棕黃色記2分、深棕色記3 分。以二者得分相乘為最終結果，＞6 分為高表達，≤6 分為低表達［8］。

采用宮頸刷收集研究組患者陰道分泌物，采用PCR+膜雜交法檢測患者高危型HPV 感染情況，高危型HPV 包括HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 等［9］?；颊呷虢M后收集患者血清3 mL，采用酶聯免疫吸附法檢測血清中HMGA1、HMGB1 水平。

1.3 統計分析

使用SPSS 22.0 軟件進行分析；符合正態分布的計量資料采用（）表示，采用t檢驗進行組間比較；計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗進行組間比較；采用受試者工作特征曲線（ROC）對診斷效能進行評價；等級資料采用秩轉換的非參數檢驗（Kruskal-Wallis 法）；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組織中HMGA1、HMGB1 表達情況

研究組宮頸組織中HMGA1、HMGB1 高表達者高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 組織中HMGA1、HMGB1 表達情況［n（%）］Table 1 Expression of HMGA1 and HMGB1 in the tissues［n（%）］

2.2 HPV 感染患者組織中HMGA1、HMGB1 表達水平

200 例宮頸癌患者中檢測出174 例患者合并HPV 感染，其中119 例患者合并高危HPV 感染，55 例患者合并非高危HPV 感染。結果表明高危組患者組織中HMGA1、HMGB1 高表達患者均高于低表達患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HPV 感染患者組織中HMGA1、HMGB1 表達水平［n（%）］Table 2 The expression levels of HMGA1 and HMGB1 in the tissues of patients with HPV infection［n（%）］

2.3 HPV感染患者血清中HMGA1、HMGB1表達水平

高危組患者血清中HMGA1、HMGB1 高表達患者均明顯多于低表達患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 HPV 感染患者血清中HMGA1、HMGB1 表達水平［n（%）］Table 3 The expression of HMGA1 and HMGB1 in serum of patients with HPV infection［n（%）］

2.4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白對宮頸癌合并高危型HPV 感染的診斷價值

血清HMGA1、HMGB1 二者聯合診斷AUC為0.956（95%CI：0.878～0.999），診斷效能明顯高于單項（P＜0.05）。見表4、圖1。

表4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白對宮頸癌合并高危型HPV 感染的診斷價值Table 4 The diagnostic value of HMGA1 and HMGB1 proteins in the diagnosis of cervical cancer with high-risk HPV infection

圖1 ROC 分析Figure 1 ROC curve

2.5 組織中HMGA1、HMGB1 水平與宮頸癌患者臨床資料的關系

宮頸癌患者組織中HMGA1、HMGB1 水平與患者年齡、產次和腫瘤病理類型無關（P＞0.05），而與患者腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移及腫瘤FIGO 分期相關（P＜0.05）。見表5。

表5 組織中HMGA1、HMGB1 水平與宮頸癌患者臨床臨床資料的關系Table 5 The relationship between the levels of HMGA1 and HMGB1 in tissues and the clinical data of patients

3 討論

人類是HPV 的唯一自然宿主，而宮頸部上皮移行區是HPV 的易感部位，持續的HPV 感染，尤其是高危型HPV 感染是宮頸癌發生的根本原因［10］，目前宮頸癌組織細胞中的HPV 檢出率達96%以上［11］。近年來研究表明宮頸癌病變并非僅僅由病毒感染導致，而是多因素共同發揮作用的結果［12］。目前宮頸癌的治療主要以手術治療以及放化療為主，隨著醫學技術的發展靶向藥物及生物免疫制劑已逐步運用于晚期宮頸癌的治療，但治療效果個體差異較大，導致晚期宮頸癌患者生存率仍較低。

本研究結果發現宮頸癌患者組織中HMGA1、HMGB1 水平明顯高于正常人，HMGA1、HMGB1水平與宮頸癌患者臨床病理特征如患者腫瘤分化程度、有無淋巴結轉移及腫瘤FIGO 分期相關，HMGA1、HMGB1 表達升高通常與宮頸病變成正相關，且易合并淋巴結轉移的發生。國內學者洪宇［13］的研究發現宮頸癌患者血清中的miR-130a、HMGA1 及SCC-Ag 表達水平較高，且表達量與宮頸癌的臨床病理類型、FIGO 分期有關；學者付方方［14］認為過表達HMGA1 可以加快細胞周期過程中G1 期向S 期轉化，促進該過程中關鍵蛋白的表達，增強宮頸癌細胞的增殖和克隆形成能力，從而促進宮頸癌細胞腫瘤的生長；學者Cheng H 等［15］研究發現組織中hepsin 和HMGB1 的表達水平越高，宮頸癌的侵襲程度越高，患者預后效果越差。上述研究表明HMGA1、HMGB1 具有促進宮頸癌細胞生長作用。

本研究還發現HMGA1、HMGB1 與HPV 感染也有一定的相關性，研究發現HMGA1 表達水平與宮頸癌病變程度呈正相關，而高危型HPV 如HPV E6/E7 均能夠促進HMGA1 的表達，對RNA 片段中的HPV E6/E7 進行敲除可發現HMGA1 表達明顯下調［16］。在口腔癌中患者組織中能檢測到高危型HPV E6 的過表達，已被證實其通過過表達HMGB1 增加口腔癌細胞的侵襲性［17］，而在喉癌患者中也發現相同的作用。上述研究提示高危型HPV 感染能夠促進HMGA1、HMGB1 的表達，以促進腫瘤的發生發展。

綜上所述，HMGA1、HMGB1 在宮頸癌患者，尤其是合并高危HPV 感染的宮頸癌患者組織中表達明顯增高，且與患者臨床病理資料相關，還可作為宮頸癌合并高危HPV 感染的早期診斷指標發揮作用。本研究的不足之處在于研究對象數量較少，且并未對HMGA1、HMGB1 在宮頸癌合并高危型HPV 感染中的作用和機制做出闡述，需要在后續研究中加以補足。