中山市724名ELISA單試劑反應獻血者歸隊分析

李喬，孫愛農，廖艷婷

(中山市中心血站 檢驗科，廣東 中山 528400)

現今采供血機構采用的酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)合并核酸檢測(nucleic acid testing，NAT)篩查模式能進一步縮短檢測的“窗口期”，有效降低病原體因輸血傳播風險，保證血液的安全和質量。但由于現有的檢測技術和病原體流行變化等因素，假反應性結果也隨之存在，從而導致固定獻血者流失、血源浪費以及對獻血者生活造成困擾等一系列相關問題[1]。為保障血液安全，國家衛生健康委頒布了血站技術操作規程(2019版)[2]，明確具體血液檢測項目和要求，為進一步維護獻血者權益，近年來中國輸血協會又發布《血液篩查反應性獻血者歸隊指南》[3](下稱《指南》)，指導和規范了獻血者檢測不合格后的歸隊工作。在常規兩種不同廠家ELISA試劑盒(HBsAg、抗-HCV、HIV Ag/Ab、抗-TP)檢測中，單試劑檢測有反應性(陽性)而NAT為無反應(陰性)的獻血者，其獻血資格暫時屏蔽，進入獻血者歸隊程序。本研究通過回顧分析當地獻血者歸隊情況，為獻血者血液檢測及歸隊措施的制定提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取2018年1月至2020年6月在中山市中心血站參加無償獻血和血液檢測ELISA項目單試劑檢測陽性、NAT為陰性的獻血者，符合《指南》者進入獻血者歸隊流程，共計724名，其中男438名，平均(36.16±9.65)歲。資料來源于唐山啟奧《現代血站管理信息系統V9.0》。

1.2 試劑與儀器

1.2.1試劑 (1)ELISA檢測試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(ELISA法)(HBsAg，珠海麗珠試劑股份有限公司，國藥準字S10910154；廈門新創科技有限公司，國藥準字S10910148)；丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒(抗-HCV，珠海麗珠試劑股份有限公司，國藥準字S20010014；北京萬泰生物藥業股份有限公司，國藥準字S20143014)；人類免疫缺陷病毒抗原/抗體診斷試劑盒(HIV(Ag/Ab))(北京萬泰生物藥業股份有限公司，國藥準字S20000024；法國伯樂生命醫學產品有限公司，國藥準字S20140049)；梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒(ELISA法)(抗-TP，珠海麗珠試劑股份有限公司，國藥準字S20020012；廈門新創科技有限公司，國藥準字S20000066；上?？迫A生物科技有限公司，國藥準字S20010057)。其中抗-HCV試劑盒為第3代和第4代，其余均為第3代。(2)HBV、HCV、HIV(Ⅰ+Ⅱ型)核酸聯合檢測試劑盒(美國羅氏診斷產品有限公司，國藥準字S20181014)，核酸質控品即標準物質[北京康徹思坦生物技術有限公司，GBW(E)090585，GBW(E)090576，GBW(E)090583]。嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.2.2主要儀器 全自動加樣儀(瑞士漢米爾頓公司，型號STAR-8ch；瑞士帝肯公司，型號EVO/8D)，全自動酶免分析儀(瑞士漢米爾頓公司，型號FAME24-20；德國西門子公司，型號BEPⅢ)，全自動核酸檢測系統(瑞士羅氏公司，型號COBAS S201)。

1.3 研究方法

1.3.1獻血者保留 對所有無償獻血者標本按國標常規血液檢測，其中ELISA項目(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP)均使用2種不同廠家試劑，若ELISA單一試劑陽性、NAT陰性的獻血者，保留其獻血資格并報廢血液，屏蔽期間隔滿6個月及以上可申請歸隊復查。

1.3.2獻血者歸隊程序 主動提交歸隊申請的獻血者進行健康征詢，并簽署知情同意書后采集1支5 mL EDTA-K2抗凝的靜脈血。按照既往陽性項目與常規獻血標本同時檢測，經2種不同廠家ELISA試劑檢測均陰性后，由授權人員審核并解除屏蔽，準許歸隊，恢復再次參加無償獻血資格。每位獻血者可提交3次歸隊申請，每輪歸隊屏蔽期均為6個月，若經3次歸隊ELISA仍陽性，則獻血資格永久淘汰。

2 結果

2.1 無償獻血者標本總檢測情況總檢測數為116 610，總項目不合格率為4.0%(4 626/116 610)。其中符合《指南》進入歸隊程序的獻血者共724名，占0.6%(724/116 610)。截止2021年1月31日申請歸隊獻血者共有170名，歸隊返回率占23.5%(170/724)。

2.2 ELISA單陽性檢測項目情況分析

2.2.1單陽性各項目檢測情況 單試劑總陽性率為0.6%(724/116 610)。其中HBsAg陽性率為26.5%(192/724)，抗-HCV陽性率為9.5%(69/724)，HIV-Ag/Ab陽性率為28.0%(203/724)，抗-TP陽性率為35.9%(260/724)。見表1。

表1 2018年1月至2020年7月單陽性各項目分類情況(n)

2.2.2單陽性獻血者各項目歸隊和再次獻血成功情況 申請歸隊人數占23.5%(170/724)，歸隊成功率占58.2%(99/170)，歸隊后再次申請獻血的返回率占41.4%(41/99)，歸隊后再次申請獻血的合格率占97.6%(40/41)，其中1名歸隊后再次獻血檢驗ELISA合格、NAT陽性。見表2。

表2 2018年1月至2020年7月中山市單陽性獻血者歸隊和再次獻血情況(n)

2.3 單陽性獻血者歸隊情況分析申請歸隊獻血者與未歸隊獻血者性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)；申請歸隊獻血者的年齡、獻血次數均高于未歸隊獻血者(P<0.05)。見表3。

表3 2018年1月至2020年7月單陽性獻血者因素分析[n(%)]

3 討論

目前血液篩查應用的ELISA檢測方法雖然具有靈敏度高、操作簡便等優點，但存在一定的假反應性。造成假反應性因素為多方面，不同的試劑生產廠家技術工藝存在差別，批間變異系數較大[1]，獻血者自身干擾因素(如自身抗體、疫苗接種史、妊娠等)[4]，標本質量、儀器環境、人員操作及灰區設置不同等影響因素均可導致假反應性結果[5]。本研究顯示再次復檢合格率為58.2%(99/170)，說明ELISA單試劑反應獻血者中50.0%以上為潛在的合格獻血者。

表1顯示，2018、2019、2020年抗-HCV單陽性發生率分別為11.7%、10.8%、1.5%，發生率變化較大，可能因為抗-HCV檢測項目自2020年開始雙家試劑均采用第四代ELISA試劑盒，代替以往一家第三代、另一家第四代，從而統一試驗敏感性。ELISA第三代試劑盒采用間接ELISA法檢測IgG類抗體，而第四代試劑盒采用雙抗原夾心ELISA法能同時檢測免疫球蛋白IgM和IgG類抗體，提高早期IgM抗體檢出率，縮短檢出病毒感染的“窗口期”[6]。同時第四代雙抗原夾心ELISA法采用酶標抗原形成包被復合物，對待檢抗體進行2次特異反應，有效避免與其他非特異性抗體吸附導致假反應性[7]。因此，第四代試劑能夠增加檢測靈敏度，降低假反應性發生率。

本次發現1例HBsAg單陽性獻血者，經過6個月屏蔽期后，申請歸隊ELISA復檢合格，再次參加獻血ELISA仍為合格，但NAT陽性，顯示該獻血者可能處于病毒感染標志物檢測陰性“窗口期”。ELISA與NAT相互補充檢測，能最大限度防止因弱陽性及病毒變異等情況而導致的漏檢[8]。NAT檢測也存在一定的假反應性，針對此類情況，有研究建議增加抗-HBc檢測[9]、不同核酸檢測系統平行鑒定/拆分[10]等措施，以提高結果準確性。由此證明設置獻血屏蔽期是非常有必要的，但對獻血者應做好結果前后不一致的解釋工作。檢測中應盡可能排除導致假反應性相關因素，如排除其他儀器或標本的污染因素，定期評估和選擇漏檢率低的篩查試劑，有條件地區增加確證試驗以作為歸隊的補充判定依據。

表3中，男性的歸隊意愿、成功率略高于女性，考慮女性人群因生理期、懷孕以及心理等方面影響因素多于男性。從獻血者年齡來看，18～29歲人群中以在校大學生及外來務工人員居多，人員流動性較大，因此，該類人群主動申請歸隊率較低。30～49歲年齡段主動申請歸隊率較高，考慮該年齡段人群特點社會價值、責任感較其他年齡更為成熟，工作生活更為穩定等因素。歸隊人群以獻血次數2次以上的獻血者為主。獻血經驗越豐富的獻血者，對無償獻血政策及知識、獻血流程了解更多，因此，重復獻血者主動歸隊意愿更為強烈，歸隊成功率越高，這與國外報道人群特點[11]相似。

目前本研究采用血站標準化信息管理系統，已建立歸隊獻血者人員信息庫。本研究再次獻血返回率為41.4%(41/99)，低于廣州地區的58.1%(825/1 420)[12]，介于其他地區24.6%(32/130)～42.7%(882/2 066)之間[13-14]。實際工作中發現超70%的獻血者未申請歸隊。獻血者對歸隊政策了解不足，獻血成本較高(如交通)，且不同人群的受教育程度、心理等存在差異。因此，更進一步完善和細化歸隊獻血者服務工作是非常有必要的。

建議制定不同項目或檢測結果的告知模板和服務標準，規范和提高工作人員專業培訓和服務意識，加強與歸隊獻血者的溝通，解除其顧慮。對獻血者解釋檢測結果時，充分了解獻血者的需求，及時提供指引和幫助，增加專業心理護理，以減輕獻血者心理負擔和保障獻血者權益。對延遲歸隊的獻血者探討可否適當增加召回次數，增加多種召回方法(如短信提醒、微信公眾號平臺預約等)，為獻血者提供更有效和便捷的服務。通過定期隨訪關注獻血者身心健康、加強獻血法律法規和相關知識宣傳等方式，以增加獻血者信任度，促進獻血者歸隊積極性和減少獻血者的流失。