高效液相色譜法測定隱形眼鏡護理液中聚乙烯吡咯烷酮

徐萍華，張莉，韓銀，鮑嬌慧，諸丹，徐暢

（浙江省醫療器械檢驗研究院，杭州 310018）

聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，簡稱為PVP）是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類聚合物中有特色且被研究得最深、最廣泛的精細化學品品種之一。PVP 作為一種合成水溶性高分子化合物，具有水溶性高分子化合物的一般性質，如膠體保護作用、成膜性、粘結性、吸濕性、增溶或凝聚作用。但PVP 最具特色的是其優異的溶解性能及生理相容性［1-10］，也因此倍受人們重視。PVP 不參與人體新陳代謝，又具有優良的生物相容性，對皮膚、粘膜、眼等不形成任何刺激。PVP用于隱形眼鏡，可增加鏡片的親水性和潤滑性，這使得PVP 在隱形眼鏡護理液中得到了廣泛應用。

GB 19192—2003 《角膜接觸鏡護理液衛生要求》第4 條明確提出對角膜接觸鏡護理液有效成分含量檢測的技術要求［11］。聚乙烯吡咯烷酮作為隱形眼鏡護理液的有效成分之一，應明確其實際加入的有效量，并建立有效、快捷、準確的分析測定方法。

目前PVP 含量的測定方法主要有紫外分光光度法［12-14］、凝膠色譜檢測法［15-16］，但是這些方法的靈敏度不高，方法條件復雜，操作過程繁瑣，且干擾不易消除。角膜接觸鏡護理液中基體復雜，樣品的雜質峰干擾相對嚴重，難以準確定量，目前此樣品尚無有效的檢測方法。筆者采用SAX 色譜柱對隱形眼鏡護理液樣品進行分離，在220 nm 波長處進行PVP 的定量分析，經過一系列方法學試驗驗證，證明該方法準確、簡單、高效。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：U 3000 型，美國賽默飛世爾科技公司。

紫外分光光度計：UV2550 型，日本島津儀器有限公司。

超純水機：MC24T30CN 型，出水電阻率為18.2 MΩ，默克密理博（中國）有限公司。

電子天平：ME104E 型，感量為0.1 mg，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

氯化鈉：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

PVP 對照品：純度（質量分數）不小于99.0%，美國Sigma Aldrich 公司。

角膜接觸鏡護理液樣品：市售。

1.2 儀器工作條件

檢測器：二極管陣列檢測器；色譜柱：Oligo-SAX 強陰離子交換柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；流動相：20 mmol／L 氯化鈉 水溶液；流量：1.0 mL／min；柱溫：30 ℃；波長：220 nm；進樣體積：10 μL。

1.3 樣品處理

根據角膜接觸鏡護理液樣品中PVP 的標示含量，若PVP 標示含量在0.01～0.5 mg／mL 之間，可直接進樣；若PVP 標示含量大于0.5 mg／mL，取適量護理液樣品，用超純水稀釋至約0.05 mg／mL，作為供試液，待測。

1.4 溶液配制

PVP 標準溶液：準確稱取PVP 對照品約0.1 g，用超純水配成1 mg／mL 的儲備液。

PVP 系列標準工作溶液：采用逐級稀釋法，用超純水配制PVP質量濃度分別為0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的系列標準工作溶液。

2 結果與討論

2.1 儀器工作條件的優化

2.1.1 色譜柱

常規檢測中，一般采用普通的C18反相色譜柱進行物質分離，而大分子量的樣品，采用凝膠尺寸排阻色譜進行分離。試驗考察了TSK—Gelα3000 型親水性凝膠色譜柱(300 mm×7.8 mm，7 μm，日本TSK 公司)和Oligo-SAX 強陰離子交換柱的分離效果，結果發現，采用TSK—Gelα3000 型凝膠色譜柱進行分離時，峰形拖尾嚴重且不對稱，而在Oligo-SAX 強陰離子交換色譜柱下，PVP 能實現完好的分離，且無拖尾現象產生。因此采用Oligo-SAX 強陰離子交換柱進行檢測分析，可快速有效地分離PVP。

2.1.2 流動相

當采用純水作為流動相時，色譜峰雖能分離，但出現拖尾現象，因此需要配制一定的緩沖溶液對PVP 進行洗脫。試驗采用氯化鈉溶液作為流動相，考察氯化鈉的質量濃度分別為0、10、20、50、100 mmol／L 時對PVP 含量測定的影響，結果發現當溶液中氯化鈉的質量濃度為20 mmol／L 時，拖尾現象消失，但隨著氯化鈉濃度的增大，PVP 的分離沒有其它變化。為了延長色譜柱的壽命，宜選用較低濃度的流動相，因此，采用20 mmol／L 氯化鈉溶液作為流動相較為適宜。

2.1.3 檢測波長

分別取PVP 標準工作溶液與空白基質溶液（按照隱形眼鏡護理液的配方，配制不含PVP 的隱形護理液作為空白基質溶液），在波長為200～300 nm 范圍內進行掃描，結果顯示PVP 在波長220 nm 附近有較大吸收，且空白基質溶液吸收較小，因此選擇220 nm 作為PVP 含量的檢測波長。

圖1 PVP 標準工作溶液與空白基質溶液紫外吸收圖

2.2 色譜行為

按照1.2 儀器工作條件，對0.05 mg／mL PVP標準溶液和待測護理液的供試液進行測定，色譜圖分別見圖2 和圖3。由圖2 和圖3 可知，PVP 的保留時間為0.933 min。

圖2 PVP 標準溶液色譜圖

2.3 基質效應

常規護理液中主要有消毒劑（如聚胺丙基雙胍等）、清潔劑（如泊洛沙姆）、螯合劑（如乙二胺四乙酸二鈉鹽）、保濕潤滑劑（羥丙基甲纖維素、透明質酸酸鈉等）及其它緩沖鹽溶液，這些添加成分均可能對PVP 的測定產生影響［17-18］。按照1.2 儀器工作條件，對空白基質溶液進行測定（圖4），并與PVP 標準溶液圖譜（圖2）進行對照，在目標物峰位置處無明顯干擾，表明該護理液中其它成分不影響PVP 含量的測定，方法具有專屬性。

圖4 空白基質溶液色譜圖

2.4 線性方程與檢出限

在1.2 儀器工作條件下，分別測定0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的PVP 系列標準工作溶液，以PVP 的質量濃度（x）為橫坐標、色譜峰面積（y）為縱坐標，繪制標準工作曲線，計算線性回歸方程和相關系數。以3 倍信噪比（S／N=3）對應的濃度值作為檢出限，10 倍信噪比（S／N=10）對應的濃度值作為定量限。PVP 的線性范圍、線性方程、相關系數、檢出限和定量限見表1。由表1 可知，PVP 的質量濃度在0.01～0.5 mg／mL 范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系，相關系數為0.999 0，檢出限為0.000 3 mg／mL，定量限為0.001 mg／mL，表明該方法靈敏度較高，適于定量。

表1 PVP 的線性范圍、線性方程、相關系數、檢出限和定量限

2.5 精密度試驗

取適量隱形眼鏡護理液樣品，按照1.3 方法進行處理，在1.2 儀器工作條件下進行6 次平行測定，試驗結果見表2。由表2 可知，6 次測定結果的相對標準偏差為1.2%，表明該方法具有較高的精密度，滿足分析要求。

表2 精密度試驗結果

2.6 重復性試驗

取適量隱形眼鏡護理液樣品，按照1.3 方法進行處理，在1.2 儀器工作條件下，對該溶液分別進行隔日測定，測定6 次，試驗結果見表3。由表3 可知，測定結果的相對標準偏差為1.7%，表明該方法具有較好的重復性。

表3 重復性試驗結果

2.7 加標回收試驗

按照所建方法，對已測的護理液樣品進行3 種濃度水平的加標回收試驗，計算PVP 的回收率和平均回收率，試驗結果見表4。

表4 PVP 加標回收試驗結果（n=6）

由表4 可知，加標樣品中PVP 的回收率為90.1%～104%，平均回收率為98.4%，表明該法具有良好的準確度。

3 結語

隱形眼鏡護理液中聚乙烯吡咯烷酮含量分析方法的建立，為生產企業產品質量控制提供了有效的科學依據，為后續行業內產品標準方法的制訂提供了理論基礎。相比較常規的凝膠色譜-示差檢測法，本方法采用強陰離子交換柱分離，220 nm 波長下進行測定PVP 的含量，精密度及準確度良好，分離效果更好，靈敏度更高，專屬性更強。