抗新冠肺炎中藥連花清瘟膠囊化學成分與臨床功效研究進展

曾垣燁，何盈盈，唐慶龍，李 康，顧妍秋，陳嘯飛 （. 海軍軍醫大學藥學院，上海 00；. 軍委政治工作部原機關門診部，北京 000；. 南部戰區總醫院衛勤部，廣東 廣州 5000；. 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院，上海 0999）

新型冠狀病毒肺炎（COVID-19），是一種由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）感染而導致的急性呼吸系統傳染病，以飛沫傳播和接觸傳播為主要傳播途徑，患者多呈現出發熱、乏力、干咳等癥狀，重癥患者還表現出呼吸困難，呼吸系統衰竭等。自2019 年12 月疫情爆發以來，COVID-19 以傳染性強、潛伏期長、傳播速度快等特點迅速引起國內外關注，并于2020 年1 月30 日被世界衛生組織(WHO)列入“國際關注的突發衛生事件”[1]?；赟ARS 病毒與新冠肺炎病毒的高度同源性，連花清瘟即被應用于COVID-19 的治療中。截止目前，連花清瘟膠囊已被列入了很多國家和地區的COVID-19 診療方案[2]。因此，根據已有的實驗研究成果以及相關臨床數據，結合連花清瘟膠囊化學性質與藥物作用特點，對其成分與功效等研究進展進行歸納綜述，以期為連花清瘟抗病毒機制研究和新冠肺炎臨床治療提供參考。

1 連花清瘟膠囊化學成分研究

中藥復方的化學成分研究對闡明其成分相互作用、藥理機制、藥效組分、配伍規律、拆方、指紋圖譜和上市后再評價等后續工作的開展十分重要。劉金平等[3]通過IR、MS、1H NMR、13C NMR等波譜手段對連花清瘟膠囊中的化學成分進行了鑒定，其中主要成分有6 類，包括蒽醌類：大黃酚、大黃素、蘆薈大黃素等；黃酮類：刺芒柄花素、山奈酚、柚皮素等；萜類：五?；ㄜ账岬?；甾醇類：β-谷甾醇等；木脂素類：連翹苷、(+)-松脂素等；有機酸類：沒食子酸、苯甲酸等。其主要有效成分大黃素有很強的抗炎抗菌藥理活性，在體外還可通過抑制生物合成而發揮抗帶狀皰疹病毒的作用[4]。

2 連花清瘟抗新冠肺炎的藥理活性

2.1 廣譜抗病毒作用

大量研究表明，連花清瘟具有廣譜抗病毒作用。竇穎等[5]對連花清瘟膠囊進行了體外抗病毒實驗，實驗表明連花清瘟膠囊對甲型H3N2 流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、單純皰疹病毒等均體現出一定抑制作用，其中對甲型H3N2 流感病毒、副流感病毒Ⅰ型、呼吸道合胞病毒抑制作用最強。莫紅纓等[6]進行了連花清瘟防治甲型H1N1 流感病毒FM1 毒株感染小鼠的實驗研究，結果顯示，連花清瘟膠囊可平衡機體免疫狀態，以減輕FM1 流感病毒引起的小鼠肺部炎性損傷，顯著改善流感病毒引起的小鼠肺炎癥狀及延長生命率，對甲型H1N1 流感病毒感染小鼠有保護作用，對病毒性感冒表現出較好療效。

2.2 解熱作用

連花清瘟是針對呼吸道病毒性感染性疾病制定的中藥復方制劑, 具有透表宣肺、清熱解毒的作用。發熱是急性呼吸道病毒性疾病的常見首發癥狀，能否快速退熱可作為評估抗感染治療用藥是否有效的重要指標之一。針對此次新冠肺炎，姚開濤等[7]采用回顧性研究方法，采集符合新冠肺炎診斷標準的普通型患者診療資料，進行關于連花清瘟治療新型冠狀病毒肺炎的臨床分析。程德忠等[8]設置對照組，針對51 例新型冠狀病毒肺炎患者應用連花清瘟進行療效分析。呂睿冰等[9]收集了2020 年1 月1～27 日就診疑似患者病例101 例，進行連花清瘟顆粒聯合西藥常規療法的回顧性評價研究，均得出了連花清瘟能夠縮短發熱持續時間，改善肌肉酸痛乏力，有效緩解發熱乏力癥狀的結論。

2.3 調節人體免疫功能

新型冠狀肺炎的發病與肺部免疫有關。韓傳映等[10]選取124 例肺炎支原體肺炎患兒的臨床資料，分為研究組與對照組各62 例，對照組予以常規西藥治療，在此基礎上研究組給予連花清瘟顆粒治療，比較兩組患兒細胞免疫功能、臨床療效指標以及治療前后血清炎性因子水平、C 反應蛋白（CRP）變化情況。發現研究組患兒細胞免疫功能指標均優于對照組(P< 0.05);研究組患兒肺啰音消失、止咳等所用時間短于對照組(P< 0.05);治療后研究組患兒血清炎性因子水平與CRP 濃度均低于對照組(P< 0.05)。說明肺炎支原體肺炎患兒給予阿奇霉素聯合連花清瘟顆粒治療可提高免疫功能，降低炎性因子水平，并縮短止咳、退熱等所用時間的結論。

3 連花清瘟膠囊抗新冠肺炎的藥理機制

3.1 連花清瘟膠囊通過抑制“炎癥風暴”改善肺功能

炎癥風暴，又稱細胞因子風暴，于1993 年由Ferrara 首次提出[11]，指機體免疫系統被病原體侵襲后，免疫細胞因子與免疫細胞之間的正反饋機制被過度激活，導致體液中大量細胞因子迅速產生的現象[12]。2005 年出現在感染H5N1 禽流感病毒患者體內的炎癥風暴現象首度引發科學界與公眾的廣泛關注，隨后研究表明，SARS 病毒[13]，H1N1 病毒[14]，H5N1 病毒[15]以及H7N9 病毒[16]等多種病毒也可導致炎癥風暴?，F有研究數據表明，患者感染SARS-CoV-2 后，機體內細胞因子數目急劇增多，多種因子之間相互作用，引起急性肺損傷，最終導致急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，甚至死亡[17]。

目前臨床上主要采用激素等免疫抑制類藥物，實現對新冠肺炎感染下過激炎癥蛋白因子的調控，但該種診療手段存在二次感染和延長病程的可能[18]。相對而言，將中藥應用于調節新冠病毒引起的炎癥風暴安全系數更高，毒副作用更小[19]?！缎滦凸跔畈《靖腥镜姆窝自\療方案》（第七版試行[20]）推薦使用連花清瘟膠囊進行中醫治療。研究表明，連花清瘟可以有效抑制病毒誘導的核轉錄因子- kB（NFkB）活化以及白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子（IP-10）基因的表達[21]，在治療小兒肺炎時，能降低血清中導致炎性的部分細胞因子水平，減緩炎癥滲出物對功能的損傷，有效緩解病情[22]。同時，在一項新冠肺炎的網絡藥理學研究[23]中，有學者發現連花清瘟膠囊中槲皮素、木犀草素、谷固醇、柚皮素、蘆薈大黃素等都具有一定的抗炎功效，能夠對新冠肺炎中的炎癥風暴水平起到抑制作用。其中，金銀花提取物[18]還能通過降低急性損傷大鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的細胞因子含量，減少ARDS大鼠體內炎性細胞浸潤，緩解病情。以上研究表明，連花清瘟膠囊能夠有效調節機體細胞因子釋放，抑制“炎癥風暴”，改善肺功能。

3.2 連花清瘟膠囊靶向受體蛋白（ACE2）緩解癥狀

血管緊張素轉化酶2（ACE2）是一種外肽酶，與血管緊張素轉化酶（ACE）基因高度同源，其水解Ang Ⅱ的產物Ang（1-7）能與Mas 結合[24]，起到抗炎癥、提高血管通透性等作用。早在2003 年非典時期，科學界就ACE2 與冠狀病毒之間的作用關系便有所研究。研究顯示，ACE2 是SARS-CoV 的功能性受體，SARS 與ACE2 結合后抑制ACE2 表達，造成ACE2 與Ang II 平衡狀態被打破，肺部血管通透性增加，導致肺部損傷[25]。Lan 等[26]研究發現，對結合ACE2 至關重要的殘基與SARS-CoV 受體結合域（RBD）殘基呈現出相似的側鏈特性。這種結構和序列上呈現出的高度相似性提示兩種病毒可能通過趨同進化，改善與ACE2 的結合能力。Yan 等[27]利用冷凍電鏡技術，得出SARS-CoV-2 能利用S 蛋白RBD 結合宿主細胞ACE2 的結論。由此可見，ACE2 對研究冠狀病毒藥物治療與作用機制方面有重要意義。Chen 等[28]采用UPLC-HRMS對連花清瘟的體內體外單體成分及其代謝產物進行分析，分別在體外、血、尿中獲得了185、107、70 個成分，并應用全二維生物色譜技術，對連花清瘟中與ACE2 具有親和活性的單體成分進行篩選，共得到8 個與ACE2 具有親和活性的體內保留成分，并進一步通過表面等離子共振技術（surface plasmon resonance, SPR），分子對接技術及蛋白抑制活性測定，最終篩選得到大黃酸、連翹酯苷A、連翹酯苷I、新綠原酸4 個化合物可與ACE2 結合并顯著抑制其活性。此項研究為連花清瘟防治COVID-19 的分子機制及臨床應用療效提供了更確切的理論基礎，推進了COVID-19 的藥物研發進程。

3.3 連花清瘟膠囊通過促進α 干擾素的表達激活免疫

干擾素（IFN-α）是一種多功能活性蛋白質，其本身并無抗病毒活性，但可以通過提升抗原表達促進機體對感染細胞的識別，具有阻斷病毒的復制[29]、增強免疫細胞功能，調節系統免疫能力的作用，可以作為廣譜抗病毒藥物使用。Haagmans 等[30]通過IFN-α 預防性治療被感染的短尾猴，能夠在一定程度上抑制SARS-CoV 的復制與傳遞，并降低I 型肺泡上皮的病毒抗原的表達，改善肺部損傷。在SARS-CoV 的治療過程中，對于初期患者診療效用較好，說明IFN-α 作為廣譜抗病毒類藥物能有效抑制冠狀病毒，對于臨床藥物研究有重要意義。馬元元等通過生物信息學探討聯合使用利巴韋林和IFN-α 診療中東呼吸綜合征冠狀病毒的作用機制，發現IFN-α 可能通過改變病毒感染相關的信號通路，實現抑制病毒并緩解病情的作用?；谛滦凸跔畈《九c中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）、冠狀病毒（SARS-CoV）一定的序列同源性，根據前期對MERS-CoV 和SARS-CoV 的相關研究可以將IFN-α 試投入SARS-CoV-2 治療，IFN-α 在新冠肺炎診療方案第七版（試行）中已作為可試用的抗病毒治療藥物。

3.4 連花清瘟膠囊多成分、多靶點、多途徑發揮藥效

網絡藥理學是基于系統生物學理論，以“多基因、多靶點”為主要特性，了解藥物毒性和有效性，揭示疾病發病機制與藥物靶點網絡關系的新興學科[32]。不同于大多靶點明確的單一化學藥物，以連花清瘟膠囊為代表的復方中成藥，化學組分繁多，作用機制復雜，網絡藥理學的發展為該類藥物作用機制研究提供了新的研究策略[32]。凌曉穎[33]在網絡藥理學基礎上對連花清瘟膠囊的物質基礎以及作用機制進行探討后，通過藥物與病毒靶點的交集分析得到67 個共同靶點，總結出12 個與連花清瘟方抗病毒有關的主要活性成分。在GO 生物學分析67 個潛在靶點能得到1 946 個條目，分別涉及免疫、細胞因子、病毒受體等多個信號通路。同時，王林[23]映射連花清瘟與SARS-CoV-2 的靶點后，篩選得到55 個重合靶點，22 個抗SARS-CoV-2的關鍵化合物涉及抑炎癥、抗病毒、調節免疫等多項藥理學作用。Hopkins 等[34]聯合55 例新型冠狀肺炎確診病人的治療狀況與指標變化，構建了涉及153 種有效活性化合物和52 個靶點基因的PPI調控網絡圖，并通過多種信號通路有效改善患者癥狀。以上研究初步表明，作為復方中成藥，連花清瘟具備多成分、多靶點、多途徑發揮藥效抗SARSCoV-2 病毒的特性。

4 總結與展望

新冠肺炎的全球爆發對人類的健康及社會經濟產生了巨大影響。然而，目前針對病毒的特效藥物與疫苗的研究仍處于攻堅階段。西藥研發周期長，而在既有藥物中未有對新冠肺炎具有良好療效者。中成藥在此次抗疫工作中發揮了獨特的作用和優勢。連花清瘟膠囊在防治冠狀病毒引起的呼吸系統疾病方面具有扎實的臨床基礎。自新型冠狀病毒肺炎爆發以來，連花清瘟膠囊被廣泛應用于臨床治療，并屢次納入《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案》中。大量實驗及臨床研究已經表明，連花清瘟能夠顯著抑制SARS-CoV-2 病毒的復制，控制疾病的進展。此外，連花清瘟還可通過明顯改善發熱、咳嗽等癥狀以緩解新冠肺炎患者的臨床癥狀?，F今已發現其抗COVID-19 的主要作用機制包括通過抑制炎癥以改善肺功能；作用于靶蛋白ACE2 以減輕肺部損傷；通過上調INF-α 的表達增強機體免疫等。然而，連花清瘟作為中藥復方，其發揮療效的單體活性成分及分子機制研究還不夠深入，在很大程度上限制了其最大臨床療效的發揮。因此，對其活性成分的研究將是COVID-19 治療藥物研發的重要途徑。本課題組對連花清瘟復方中單體活性組分的篩選研究，初步表明連花清瘟的主要成分可顯著抑制ACE2 的功能活性，為后續小分子藥物的發現與研究提供了數據基礎和研究思路。