大午褐蛋雞1日齡胎糞禽白血病檢測關鍵點

代占輝，李 茜，郝 丹，王紅連，鄭利杰，趙曉鈺

（1.河北大午農牧集團種禽有限公司 072550；2.河北省畜牧獸醫研究所 071000；3.河北省畜牧獸醫學會 050000）

禽白血病主要以垂直傳播方式進行傳播，也可水平傳播，能夠造成多種類型腫瘤,給家禽業帶來重大經濟損失。禽白血病目前沒有疫苗，對其防控只能進行徹底凈化。

河北大午農牧集團種禽有限公司經過多年的探索與實踐，形成了蛋雞核心育種群（純系）的禽白血病凈化程序：1日齡全群胎糞檢測，6～8周齡全群血漿病毒分離，開產初期母雞蛋清普檢2枚、公雞血漿和精液病毒分離，繼代選育留種前母雞蛋清普檢2枚、公雞血漿和精液病毒分離。而1日齡全群胎糞檢測對禽白血病凈化非常重要，既能評估蛋雞核心育種群上一世代的凈化進展，又能為新世代的持續凈化打下良好基礎，及早淘汰陽性雞只，從根本上避免雞群早期可能發生水平感染，因為雞群日齡越小，禽白血病發生水平感染的幾率越大[1]。

大午褐蛋雞核心育種群由E、F、C、D四個純系組成，每年繼代

選育出雛時，需要留下母雞12000只、公雞2500只，因此大午褐蛋雞核心育種群1日齡胎糞檢測樣品至少在24000份以上，為了保證出雛后24h內完成檢測[2]，應做好以下幾方面：

1 組織保障

1日齡胎糞禽白血病檢測是一項系統工程，需要育種部、生產部、技術部、獸醫室等多部門共同參加。育種部負責胎糞采集相關工作，包括純系出雛記錄2人、雌雄鑒別與胎糞采集1人、胎糞樣品做標記2人、分發翅號與記錄1人、帶翅號2人，以上8人為一組，本環節需要安排五個小組（每名翻肛雌雄鑒別員要鑒別5000只雛雞左右同時要采集胎糞）；技術部負責胎糞樣品的處理工作，包括樣品震蕩混勻3人、樣品冷凍1人、樣品速溶4人、樣品離心4人，樣品記錄2人、記錄輸入電腦1人、統計結果1人；獸醫室負責胎糞ALVp27 抗原實驗室檢測工作，分成兩組，每組5人；生產部負責胎糞檢測的后續工作，包括陽性雞只挑選2人、陽性雞只記錄1人。高質量完成大午褐蛋雞1日齡胎糞禽白血病檢測，需69人的齊心合作，因此做好有效的組織保障是基礎。

2 胎糞的有效處理

胎糞進行禽白血病檢測前，必須對胎糞進行快速凍融處理，使細胞裂解，讓可能存在的禽白血病病毒從細胞中游離出來[3]，利于準確檢測。

對胎糞的處理措施為“兩凍、三搖、兩融、一離心”，具體流程：胎糞采集→第一次震蕩混勻（時間60s）→第一次冷凍（時間10s）→第一次溶解（水溫37℃、時間60s）→第二次震蕩混勻（時間60s）→第二次冷凍（時間10s）→第二次溶解（水溫37℃、時間60s）→第三次震蕩混勻（時間60s）→高速離心（轉速10000rpm/m）。

3 胎糞實驗室檢測

離心后的胎糞送到實驗室進行ALVp27抗原檢測，一般流程：

樣品加入反應板孵育1h→第一次洗板→加入酶標二抗孵育1h→第二次洗板，加入底物液孵育15min→加入終止液→應用酶標儀讀取結果→將結果反饋到孵化室追溯陽性雞只、予以淘汰。

特別注意不同廠家的試劑盒，檢測要求不同，以A、B、C三個不同廠家為例：①胎糞檢測用稀釋液不同：A、B廠家稀釋液為專用，C廠家稀釋液為鹽水或PBS；②胎糞檢測孵育溫度不同：A、B廠家孵育溫度為常溫，C廠家孵育溫度為37℃；③胎糞檢測用洗液不同：A廠家洗液為蒸餾水，B、C廠家洗液為濃縮液，需要稀釋；④胎糞檢測用酶標二抗不同：A、C廠家酶標二抗可以直接使用，B廠家酶標二抗需要配制后使用；⑤胎糞檢測用底物液不同：A、B廠家底物液可以直接使用，C廠家底物液分開加入。

經過持續進行大午褐蛋雞核心育種群1日齡胎糞檢測，效果顯著（見下表）。

不同年度1日齡胎糞ALVp27檢測圖表

4 精準追溯

每只純系雛雞的胎糞檢測后，為做到精準追溯，也就是能夠及時、準確找到陽性雞只并予以淘汰，經過近年來不斷改進1日齡胎糞檢測系統工程相關方法、措施，建立了可精準追溯關鍵控制點：①每只留種純系母雞的每枚種蛋在孵化至18胚齡時轉移到單個孵化紙盒，同時在紙盒上做好標記，再進行孵化出雛；21胚齡出雛后，再轉移至新的單個孵化紙盒、做標記，這樣從源頭上就避免了可能出現的混淆，為此我們申請了一項實用新型專利（一種防止交叉感染的便于單個雛雞檢測的孵化紙盒，申請號：202121182419.5）；②選用高質量的1.5mL離心管，用于胎糞的采集，主要是離心管蓋能夠封閉嚴密、離心管壁韌性大，防止在樣品處理過程中離心管蓋子松動、管壁破損；③在離心管上做的標記清晰、易辨認；④使用液氮冷凍胎糞樣品時，為防止裝有胎糞的離心管在液氮中漂出、遺落在液氮罐里，對液氮罐配套的提筒做一個蓋子（開關便捷），蓋上留有若干個直徑3mm小孔，便于液氮淹沒提筒。

通過對大午褐蛋雞核心育種群持續進行1日齡全群胎糞科學檢測，及早淘汰陽性雞只，避免可能的水平感染，為該品種禽白血病的徹底凈化打下堅實基礎，同時能夠為其他家禽的凈化具有借鑒意義。