高效液相色譜法檢測5種市售雞蛋中?；撬岷?/h1>
2022-01-24 11:40秦夢然張偉吳鳳明劉付蔡鋒隆白敬王桐于曉雪李留安
食品研究與開發 2022年1期
秦夢然，張偉，吳鳳明，劉付，蔡鋒隆，白敬，王桐，于曉雪*，李留安*
（1.天津農學院動物科學與動物醫學學院天津市農業動物繁育與健康養殖重點實驗室，天津 300392；2.天津市廣源畜禽養殖有限公司，天津 301806）
?；撬?，又稱2-氨基乙磺酸，分子式C2H7NO3S，是機體組織細胞中含量豐富的一種小分子含硫氨基酸，有廣泛的生理調節作用[1-2]。其化學性質穩定，溶于水，但不溶于乙醇等有機溶劑[3]。?；撬峋哂辛己玫慕笛切Ч鸞4-5]；對神經具有保護作用，缺乏?；撬釙斐梢暰W膜退化，最終導致失明[6]；?；撬釓V泛存在于心臟、肌肉、中樞神經系統等，且視網膜組織中?；撬岷枯^高，對維持健全的視網膜功能至關重要[7-8]；?；撬嶙鳛橐环N補充劑，通過減少氧化應激和調節線粒體功能來實現對腎臟的保護[9]；它能增加細胞抗氧化和抗病毒侵害的能力[10]；研究發現?；撬釋Ω鞣N類型的高血壓均有明顯改善作用[11]；能提高學習記憶能力，延緩衰老[12]；?；撬釋Ψ乐寡芗膊〗槿胫委熀笤侔l生狹窄以及防治心血管疾病亦有重要作用[13]。隨著人們對?；撬嵘砉δ苷J識的加深，對?；撬岬男枨笠苍絹碓蕉?。日常膳食中?；撬岷繕O微，不足以滿足人類需求，選擇富含?；撬崾称穼τ谔岣呷祟悢z入?；撬峋哂兄匾饬x[14]。
西方發達國家已普遍將其應用于醫藥及食品添加劑中。近年來國內一些營養補給品中也添加了?；撬醄15]。我國作為雞蛋生產大國，雞蛋產量在3 309萬噸左右，雞蛋消費在人們日常生活食物消費中占有很大比例[16]。雞的品種、飼料中的營養組成、飼養方式、生理因素等多種因素可能造成雞蛋中?；撬岷坎町怺17-18]。檢測不同品種、來源雞蛋的?；撬岷?，有利于人們科學合理選擇?；撬岷扛叩碾u蛋品類。目前，在?；撬峒兌葴y定方面，國內外常用的方法主要有分光光度計法、滴定法、薄層層析法、氨基酸自動分析法和高壓液相色譜法等[19]。其中滴定法、比色法和薄層掃描法易受其他氨基酸的干擾，誤差相對較大；氨基酸自動分析儀價格昂貴，限制了其使用范圍；高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）精確度、靈敏度較高，樣品處理較簡單，能夠快速進行樣品分析而被廣泛地應用。高效液相色譜法有柱前衍生和柱后衍生兩種，后者分離所需鈉離子交換柱價格昂貴，不適宜作為測定方法推廣應用[20]。有研究顯示，雞蛋中的?；撬嶂饕嬖谟诘包S中，蛋清中未檢測出[21]。截至目前，國內外有關檢測雞蛋中?；撬岷康姆椒r有報道。本試驗擬采用柱前衍生法，以鄰苯二甲醛（ortho-phthalaldehyde，OPA）為衍生試劑，乙硫醇為保護劑，建立HPLC測定雞蛋中?；撬岷康姆椒?，為雞蛋中?；撬岷康目茖W檢測提供理論參考；同時，通過檢測市售不同種雞蛋中?；撬岷?，為人們進行雞蛋消費選擇提供實踐指導。
1 材料與方法
1.1 雞蛋樣品
A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋和普通雞蛋（每種雞蛋隨機選取15枚）：市售。
1.2 主要儀器與設備
高效液相色譜儀配熒光檢測器（Agilent-1260）：安捷倫科技有限公司；超聲波清洗機（SB-100D）：寧波新芝生物科技股份有限公司；高速離心機（Sigma3-3OK）：國藥集團（天津）醫療機械有限公司；多用途渦旋混合器（VORTEX-6）：海門市其林貝爾儀器制造有限公司；超聲波振蕩器（KQ-500B）：昆山市超聲儀器有限公司；0.22 μm濾膜：天津市科億隆實驗設備有限公司。
1.3 主要試劑
?；撬針藴势罚好绹鳶igma-Aldrich公司；甲醇、乙腈（均為色譜純）：德國默克（Merck）公司；硼酸（分析純）：天津基準化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純）：博歐特（天津）化工貿易有限公司；OPA（化學純）：天津市光復精細化工研究所；乙硫醇（化學純）：上海麥克林生物公司；亞鐵氰化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純）：天津市光復科技發展有限公司；純凈水：娃哈哈公司。
1.4 方法
1.4.1 溶液配制
0.4 mol/L硼酸鈉緩沖液：稱取2.48g硼酸和1.41 g氫氧化鈉，用水定容至100 mL。
衍生劑：稱取0.1gOPA用10mL甲醇溶解，加0.1mL乙硫醇，用0.4 mol/L硼酸鈉緩沖液定容至100 mL。
沉淀劑Ⅰ：稱取15 g亞鐵氰化鉀，用水溶解并定容至100 mL。該沉淀劑在室溫25℃下3個月內穩定。
沉淀劑Ⅱ：稱取30 g乙酸鋅，用水溶解并定容至100 mL。該沉淀劑在室溫25℃下3個月內保持穩定。
標準品儲備液：將?；撬針藴势?00 mg，用5 mL水溶解，加入 100 mL 容量瓶，用甲醇∶乙腈∶水（1∶1∶8，體積比）定容至100 mL，配制成濃度為1 mg/mL標準品溶液。
標準品工作液：將?；撬醿湟合♂?，配制成濃度為 2、5、10、20、25 μg/mL 的工作液。
1.4.2 標準曲線的測定
分別取 2、5、10、20、25 μg/mL 的?；撬峁ぷ饕?0 μL，衍生化，液相色譜分析，熒光檢測器測定，以?；撬岬纳V峰面積對應其濃度作線性回歸，得到?；撬岬臉藴是€。
1.4.3 樣品的測定
1.4.3.1 色譜條件
色譜柱：Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇+乙腈∶水（25∶75，體積比），流速0.8 mL/min；柱溫30℃；熒光檢測器：激發波長330 nm，發射波長530 nm；進樣量20 μL。
1.4.3.2 樣品前處理
稱取雞蛋黃5 g（精確至0.01 g）于錐形瓶中，加入30mL40℃左右溫水，充分混勻，置超聲波振蕩器上超聲輔助提取10min，冷卻到室溫25℃。加1mL沉淀劑Ⅰ，渦旋混合，加1 mL沉淀劑Ⅱ，渦旋混合，轉入100 mL容量瓶中用水定容至刻度，充分混勻[22]，樣液于5 000 r/min下離心10 min，留上清液，充分混勻，經0.22 μm微孔膜過濾，備用。
1.4.3.3 在線衍生化
利用1260 Vialsampler高效液相色譜自動進樣器的功能實現樣品的在線衍生。自動化進樣器吸取7 μL樣品液與13 μL衍生劑混合，混合10次，等待0.1 min，進行液相色譜分析。
1.4.4 回收率測定和精密度測定
按照 1.4.3 處理雞蛋樣品，添加 5、10、20 μg/mL 的?；撬針藴势啡芤?，渦旋混合，液相色譜分析，對照標準曲線，計算回收率（n=3）以考察方法的準確度。同一樣品進行重復測定（n=6），確定樣品的精密度。
1.4.5 樣品雞蛋?；撬岷繙y定
按照1.4.3方法對A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋和普通雞蛋蛋黃進行測定。樣品中的?；撬岷扛鶕藴是€方程進行計算。
1.4.6 數據處理
采用SPSS 22.0軟件對所有數據進行分析，用單因子方差分析進行均值間多重比較，并進行顯著性檢驗，P＜0.05為差異顯著，試驗中所有數據均以平均值±標準差表示。
2 結果與分析
2.1 HPLC條件的優化
2.1.1 流動相比例和流動相流速的優化
本研究中，選擇甲醇+乙腈與水作為流動相，分別選用體積比 15∶85、20∶80、25∶75、30∶70 進行試驗。隨著甲醇+乙腈比例的相應變化，?；撬崤c相鄰峰的分離度也有所變化，保留時間不斷縮短，但吸收峰面積有所不同。綜合考慮吸收峰面積及保留時間，選擇流動相甲醇+乙腈和水的體積比為25∶75。流動相流速是影響高效液相色譜檢測的重要因素，流速太慢目標物質保留時間延長，峰型變寬；流速增快可以縮短保留時間，但過快則容易導致目標物質未完全檢測，峰面積變小。本研究中，通過比較不同流速（0.5、0.8、1.0 mL/min）對?；撬釞z測的影響后發現，不同流速下?；撬峋辛己玫姆蛛x效果，但保留時間和峰面積均隨流速的增大而減小。綜合考慮峰面積和保留時間，選擇0.8mL/min作為最終流動相的流速。
2.1.2 衍生劑用量和衍生時間的優化
衍生劑用量是影響?；撬釞z測的重要因素之一，衍生劑過少，易出現反應不完全，結果準確性差；衍生劑過多則容易影響峰型。本試驗選擇不同用量的衍生劑（?；撬針藰雍脱苌鷦?OPA 的摩爾比為 2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶5），通過觀察峰面積和峰型，最終確定底物?；撬崤c衍生劑OPA摩爾比為2∶1。?；撬崤c衍生試劑OPA反應迅速，靈敏度高，但衍生產物并不穩定，衍生時間過長，產物分解，峰面積減小。試驗比較了不同衍生時間（0.1、2.0、4.0 min）對?；撬釞z測的影響，當衍生時間為0.1 min時，?；撬嵋呀浹苌耆?；繼續延長衍生時間，峰面積逐漸減小。因此，確定衍生時間為0.1min。
2.1.3 ?；撬針藴是€的繪制
根據不同質量濃度?；撬針藴嗜芤旱某龇迕娣e，以?；撬豳|量濃度為橫坐標x（μg/mL），峰面積為縱坐標y，繪制標準曲線，見圖1。
圖1 ?；撬針藴是€Fig.1 Standard curve of taurine
由圖 1 可知，?；撬岷吭?2 μg/mL～25 μg/mL 范圍內，峰面積與濃度的線性回歸方程為y=2.499x，相關系數R2=0.999 9。表明?；撬嵩诖速|量濃度范圍內線性關系良好。
2.2 專屬性試驗
為考察HPLC測定蛋黃中?；撬岬姆蛛x效能及干擾情況，取空白溶液、標準品?；撬崛芤杭暗包S溶液、蛋清溶液。分別按照1.4.3方法操作，記錄色譜圖，結果如圖2所示。
圖2 專屬性試驗結果Fig.2 Results of exclusive test
由圖2可知，水在?；撬嵫苌锵鄳恢脽o色譜峰出現，不干擾?；撬岬暮繙y定（圖2A），?；撬針藴势费苌锏谋Ａ魰r間約為12.116 min（圖2B），用此方法測定雞蛋蛋黃中的?；撬岷繒r也不受其他成分干擾（圖2C），蛋清溶液在?；撬嵫苌锵鄳恢脽o色譜峰出現，說明蛋清中無?；撬幔▓D2D）。結果表明，此方法可以用于測定蛋黃中的?；撬?。
2.3 回收率測定
同一樣品分別加入不同質量濃度的?；撬針藴嗜芤哼M行測定，各加標量平行測定3次，求出?；撬峄厥章室姳?。
由表1可知，加標量為5 μg/mL時，平均回收率為99.7%；加標量為10 μg/mL時，平均回收率為100.2%；加標量為20 μg/mL時，平均回收率為100.5%，綜上結果表明，此方法的平均回收率為99.7%～100.5%，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）范圍為0.5%～0.9%。
表1 加標回收率試驗Table 1 Spread recovery experiments
2.4 精密度測定
精密度測定結果見表2。
表2 精密度測定Table 2 Precision measurement
由表2可知，同一樣品重復測定6次時，所測得峰面積范圍為0.93～0.96（平均值為 0.94），RSD值為1.3%。說明高效液相色譜柱前衍生化測定?；撬峋芏雀?。
2.5 穩定性試驗
表3列出了質量濃度為10 μg/mL的雞蛋蛋黃?；撬針悠啡芤悍胖?、2、3 h后的測定結果。
表3 穩定性試驗Table 3 Stability experiments
由表3可知，樣品放置1、2、3 h時測得?；撬岱迕娣e為0.46、0.46、0.47，平均值為 0.463，其RSD為1.2%，說明?；撬釞z測在3 h內穩定性良好，用該方法檢測?；撬岷靠纱_保其穩定性。
2.6 樣品的測定
按照1.4.3方法處理樣品，對A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋，普通雞蛋進行測定，結果見圖3。
圖3 5種市售雞蛋中?；撬岷康谋容^Fig.3 Comparison of taurine content in five commercially available eggs
由圖3可知，普通雞蛋蛋黃中?；撬岷匡@著低于A、B品牌烏雞蛋和C品牌柴雞蛋（P＜0.05），普通雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯缘陀贒品牌柴雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。A、B品牌烏雞蛋蛋黃中的?；撬岷匡@著高于D品牌柴雞蛋（P＜0.05），B品牌烏雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯缘陀贏品牌烏雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。C品牌柴雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯愿哂贒品牌柴雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。
3 結論
本研究建立了一種利用自動進樣器設定，OPA為衍生劑的柱前在線衍生高效液相色譜法測定雞蛋中?；撬岷康姆椒?，并首次對不同品種市售雞蛋中?；撬岷窟M行了檢測比較。該方法簡單易行，降低了分析成本，可推廣用于雞蛋中?；撬岷康呐繖z測，從評價?；撬岷康慕嵌忍崾?，烏雞蛋的營養價值高于柴雞蛋和普通雞蛋。
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秦夢然，張偉，吳鳳明，劉付，蔡鋒隆，白敬，王桐，于曉雪*，李留安*
（1.天津農學院動物科學與動物醫學學院天津市農業動物繁育與健康養殖重點實驗室，天津 300392；2.天津市廣源畜禽養殖有限公司，天津 301806）
?；撬?，又稱2-氨基乙磺酸，分子式C2H7NO3S，是機體組織細胞中含量豐富的一種小分子含硫氨基酸，有廣泛的生理調節作用[1-2]。其化學性質穩定，溶于水，但不溶于乙醇等有機溶劑[3]。?；撬峋哂辛己玫慕笛切Ч鸞4-5]；對神經具有保護作用，缺乏?；撬釙斐梢暰W膜退化，最終導致失明[6]；?；撬釓V泛存在于心臟、肌肉、中樞神經系統等，且視網膜組織中?；撬岷枯^高，對維持健全的視網膜功能至關重要[7-8]；?；撬嶙鳛橐环N補充劑，通過減少氧化應激和調節線粒體功能來實現對腎臟的保護[9]；它能增加細胞抗氧化和抗病毒侵害的能力[10]；研究發現?；撬釋Ω鞣N類型的高血壓均有明顯改善作用[11]；能提高學習記憶能力，延緩衰老[12]；?；撬釋Ψ乐寡芗膊〗槿胫委熀笤侔l生狹窄以及防治心血管疾病亦有重要作用[13]。隨著人們對?；撬嵘砉δ苷J識的加深，對?；撬岬男枨笠苍絹碓蕉?。日常膳食中?；撬岷繕O微，不足以滿足人類需求，選擇富含?；撬崾称穼τ谔岣呷祟悢z入?；撬峋哂兄匾饬x[14]。
西方發達國家已普遍將其應用于醫藥及食品添加劑中。近年來國內一些營養補給品中也添加了?；撬醄15]。我國作為雞蛋生產大國，雞蛋產量在3 309萬噸左右，雞蛋消費在人們日常生活食物消費中占有很大比例[16]。雞的品種、飼料中的營養組成、飼養方式、生理因素等多種因素可能造成雞蛋中?；撬岷坎町怺17-18]。檢測不同品種、來源雞蛋的?；撬岷?，有利于人們科學合理選擇?；撬岷扛叩碾u蛋品類。目前，在?；撬峒兌葴y定方面，國內外常用的方法主要有分光光度計法、滴定法、薄層層析法、氨基酸自動分析法和高壓液相色譜法等[19]。其中滴定法、比色法和薄層掃描法易受其他氨基酸的干擾，誤差相對較大；氨基酸自動分析儀價格昂貴，限制了其使用范圍；高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）精確度、靈敏度較高，樣品處理較簡單，能夠快速進行樣品分析而被廣泛地應用。高效液相色譜法有柱前衍生和柱后衍生兩種，后者分離所需鈉離子交換柱價格昂貴，不適宜作為測定方法推廣應用[20]。有研究顯示，雞蛋中的?；撬嶂饕嬖谟诘包S中，蛋清中未檢測出[21]。截至目前，國內外有關檢測雞蛋中?；撬岷康姆椒r有報道。本試驗擬采用柱前衍生法，以鄰苯二甲醛（ortho-phthalaldehyde，OPA）為衍生試劑，乙硫醇為保護劑，建立HPLC測定雞蛋中?；撬岷康姆椒?，為雞蛋中?；撬岷康目茖W檢測提供理論參考；同時，通過檢測市售不同種雞蛋中?；撬岷?，為人們進行雞蛋消費選擇提供實踐指導。
1 材料與方法
1.1 雞蛋樣品
A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋和普通雞蛋（每種雞蛋隨機選取15枚）：市售。
1.2 主要儀器與設備
高效液相色譜儀配熒光檢測器（Agilent-1260）：安捷倫科技有限公司；超聲波清洗機（SB-100D）：寧波新芝生物科技股份有限公司；高速離心機（Sigma3-3OK）：國藥集團（天津）醫療機械有限公司；多用途渦旋混合器（VORTEX-6）：海門市其林貝爾儀器制造有限公司；超聲波振蕩器（KQ-500B）：昆山市超聲儀器有限公司；0.22 μm濾膜：天津市科億隆實驗設備有限公司。
1.3 主要試劑
?；撬針藴势罚好绹鳶igma-Aldrich公司；甲醇、乙腈（均為色譜純）：德國默克（Merck）公司；硼酸（分析純）：天津基準化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純）：博歐特（天津）化工貿易有限公司；OPA（化學純）：天津市光復精細化工研究所；乙硫醇（化學純）：上海麥克林生物公司；亞鐵氰化鉀（分析純）、乙酸鋅（分析純）：天津市光復科技發展有限公司；純凈水：娃哈哈公司。
1.4 方法
1.4.1 溶液配制
0.4 mol/L硼酸鈉緩沖液：稱取2.48g硼酸和1.41 g氫氧化鈉，用水定容至100 mL。
衍生劑：稱取0.1gOPA用10mL甲醇溶解，加0.1mL乙硫醇，用0.4 mol/L硼酸鈉緩沖液定容至100 mL。
沉淀劑Ⅰ：稱取15 g亞鐵氰化鉀，用水溶解并定容至100 mL。該沉淀劑在室溫25℃下3個月內穩定。
沉淀劑Ⅱ：稱取30 g乙酸鋅，用水溶解并定容至100 mL。該沉淀劑在室溫25℃下3個月內保持穩定。
標準品儲備液：將?；撬針藴势?00 mg，用5 mL水溶解，加入 100 mL 容量瓶，用甲醇∶乙腈∶水（1∶1∶8，體積比）定容至100 mL，配制成濃度為1 mg/mL標準品溶液。
標準品工作液：將?；撬醿湟合♂?，配制成濃度為 2、5、10、20、25 μg/mL 的工作液。
1.4.2 標準曲線的測定
分別取 2、5、10、20、25 μg/mL 的?；撬峁ぷ饕?0 μL，衍生化，液相色譜分析，熒光檢測器測定，以?；撬岬纳V峰面積對應其濃度作線性回歸，得到?；撬岬臉藴是€。
1.4.3 樣品的測定
1.4.3.1 色譜條件
色譜柱：Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇+乙腈∶水（25∶75，體積比），流速0.8 mL/min；柱溫30℃；熒光檢測器：激發波長330 nm，發射波長530 nm；進樣量20 μL。
1.4.3.2 樣品前處理
稱取雞蛋黃5 g（精確至0.01 g）于錐形瓶中，加入30mL40℃左右溫水，充分混勻，置超聲波振蕩器上超聲輔助提取10min，冷卻到室溫25℃。加1mL沉淀劑Ⅰ，渦旋混合，加1 mL沉淀劑Ⅱ，渦旋混合，轉入100 mL容量瓶中用水定容至刻度，充分混勻[22]，樣液于5 000 r/min下離心10 min，留上清液，充分混勻，經0.22 μm微孔膜過濾，備用。
1.4.3.3 在線衍生化
利用1260 Vialsampler高效液相色譜自動進樣器的功能實現樣品的在線衍生。自動化進樣器吸取7 μL樣品液與13 μL衍生劑混合，混合10次，等待0.1 min，進行液相色譜分析。
1.4.4 回收率測定和精密度測定
按照 1.4.3 處理雞蛋樣品，添加 5、10、20 μg/mL 的?；撬針藴势啡芤?，渦旋混合，液相色譜分析，對照標準曲線，計算回收率（n=3）以考察方法的準確度。同一樣品進行重復測定（n=6），確定樣品的精密度。
1.4.5 樣品雞蛋?；撬岷繙y定
按照1.4.3方法對A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋和普通雞蛋蛋黃進行測定。樣品中的?；撬岷扛鶕藴是€方程進行計算。
1.4.6 數據處理
采用SPSS 22.0軟件對所有數據進行分析，用單因子方差分析進行均值間多重比較，并進行顯著性檢驗，P＜0.05為差異顯著，試驗中所有數據均以平均值±標準差表示。
2 結果與分析
2.1 HPLC條件的優化
2.1.1 流動相比例和流動相流速的優化
本研究中，選擇甲醇+乙腈與水作為流動相，分別選用體積比 15∶85、20∶80、25∶75、30∶70 進行試驗。隨著甲醇+乙腈比例的相應變化，?；撬崤c相鄰峰的分離度也有所變化，保留時間不斷縮短，但吸收峰面積有所不同。綜合考慮吸收峰面積及保留時間，選擇流動相甲醇+乙腈和水的體積比為25∶75。流動相流速是影響高效液相色譜檢測的重要因素，流速太慢目標物質保留時間延長，峰型變寬；流速增快可以縮短保留時間，但過快則容易導致目標物質未完全檢測，峰面積變小。本研究中，通過比較不同流速（0.5、0.8、1.0 mL/min）對?；撬釞z測的影響后發現，不同流速下?；撬峋辛己玫姆蛛x效果，但保留時間和峰面積均隨流速的增大而減小。綜合考慮峰面積和保留時間，選擇0.8mL/min作為最終流動相的流速。
2.1.2 衍生劑用量和衍生時間的優化
衍生劑用量是影響?；撬釞z測的重要因素之一，衍生劑過少，易出現反應不完全，結果準確性差；衍生劑過多則容易影響峰型。本試驗選擇不同用量的衍生劑（?；撬針藰雍脱苌鷦?OPA 的摩爾比為 2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶5），通過觀察峰面積和峰型，最終確定底物?；撬崤c衍生劑OPA摩爾比為2∶1。?；撬崤c衍生試劑OPA反應迅速，靈敏度高，但衍生產物并不穩定，衍生時間過長，產物分解，峰面積減小。試驗比較了不同衍生時間（0.1、2.0、4.0 min）對?；撬釞z測的影響，當衍生時間為0.1 min時，?；撬嵋呀浹苌耆?；繼續延長衍生時間，峰面積逐漸減小。因此，確定衍生時間為0.1min。
2.1.3 ?；撬針藴是€的繪制
根據不同質量濃度?；撬針藴嗜芤旱某龇迕娣e，以?；撬豳|量濃度為橫坐標x（μg/mL），峰面積為縱坐標y，繪制標準曲線，見圖1。
圖1 ?；撬針藴是€Fig.1 Standard curve of taurine
由圖 1 可知，?；撬岷吭?2 μg/mL～25 μg/mL 范圍內，峰面積與濃度的線性回歸方程為y=2.499x，相關系數R2=0.999 9。表明?；撬嵩诖速|量濃度范圍內線性關系良好。
2.2 專屬性試驗
為考察HPLC測定蛋黃中?；撬岬姆蛛x效能及干擾情況，取空白溶液、標準品?；撬崛芤杭暗包S溶液、蛋清溶液。分別按照1.4.3方法操作，記錄色譜圖，結果如圖2所示。
圖2 專屬性試驗結果Fig.2 Results of exclusive test
由圖2可知，水在?；撬嵫苌锵鄳恢脽o色譜峰出現，不干擾?；撬岬暮繙y定（圖2A），?；撬針藴势费苌锏谋Ａ魰r間約為12.116 min（圖2B），用此方法測定雞蛋蛋黃中的?；撬岷繒r也不受其他成分干擾（圖2C），蛋清溶液在?；撬嵫苌锵鄳恢脽o色譜峰出現，說明蛋清中無?；撬幔▓D2D）。結果表明，此方法可以用于測定蛋黃中的?；撬?。
2.3 回收率測定
同一樣品分別加入不同質量濃度的?；撬針藴嗜芤哼M行測定，各加標量平行測定3次，求出?；撬峄厥章室姳?。
由表1可知，加標量為5 μg/mL時，平均回收率為99.7%；加標量為10 μg/mL時，平均回收率為100.2%；加標量為20 μg/mL時，平均回收率為100.5%，綜上結果表明，此方法的平均回收率為99.7%～100.5%，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）范圍為0.5%～0.9%。
表1 加標回收率試驗Table 1 Spread recovery experiments
2.4 精密度測定
精密度測定結果見表2。
表2 精密度測定Table 2 Precision measurement
由表2可知，同一樣品重復測定6次時，所測得峰面積范圍為0.93～0.96（平均值為 0.94），RSD值為1.3%。說明高效液相色譜柱前衍生化測定?；撬峋芏雀?。
2.5 穩定性試驗
表3列出了質量濃度為10 μg/mL的雞蛋蛋黃?；撬針悠啡芤悍胖?、2、3 h后的測定結果。
表3 穩定性試驗Table 3 Stability experiments
由表3可知，樣品放置1、2、3 h時測得?；撬岱迕娣e為0.46、0.46、0.47，平均值為 0.463，其RSD為1.2%，說明?；撬釞z測在3 h內穩定性良好，用該方法檢測?；撬岷靠纱_保其穩定性。
2.6 樣品的測定
按照1.4.3方法處理樣品，對A、B品牌烏雞蛋，C、D品牌柴雞蛋，普通雞蛋進行測定，結果見圖3。
圖3 5種市售雞蛋中?；撬岷康谋容^Fig.3 Comparison of taurine content in five commercially available eggs
由圖3可知，普通雞蛋蛋黃中?；撬岷匡@著低于A、B品牌烏雞蛋和C品牌柴雞蛋（P＜0.05），普通雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯缘陀贒品牌柴雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。A、B品牌烏雞蛋蛋黃中的?；撬岷匡@著高于D品牌柴雞蛋（P＜0.05），B品牌烏雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯缘陀贏品牌烏雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。C品牌柴雞蛋蛋黃中的?；撬岷柯愿哂贒品牌柴雞蛋，但差異不顯著（P＞0.05）。
3 結論
本研究建立了一種利用自動進樣器設定，OPA為衍生劑的柱前在線衍生高效液相色譜法測定雞蛋中?；撬岷康姆椒?，并首次對不同品種市售雞蛋中?；撬岷窟M行了檢測比較。該方法簡單易行，降低了分析成本，可推廣用于雞蛋中?；撬岷康呐繖z測，從評價?；撬岷康慕嵌忍崾?，烏雞蛋的營養價值高于柴雞蛋和普通雞蛋。
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