贛南柑桔木虱發生動態與攜帶黃龍病菌變化研究

陳慈相，胡 燕，謝金招，余海中，習建龍，李 航，宋志青

(1 江西省贛州市果樹技術推廣站，江西贛州，341000；2 江西省臍橙工程技術研究中心，江西贛州，341000；3 贛南師范大學生命科學學院，江西贛州，341000)

柑桔黃龍病(Citrus Huanglongbing，HLB)是柑桔產業上的一種毀滅性病害，能為害幾乎所有柑桔品種[1]。柑桔木虱(Diaphorinacitri)是田間傳播柑桔黃龍病的主要媒介昆蟲，主要為害柑桔嫩梢，其田間發生量和攜帶黃龍病菌(CandidatusLiberibacter asiaticus，Las)率是柑桔黃龍病發生蔓延的決定性因素[2-4]。贛南最早于1979年發現有柑桔黃龍病和柑桔木虱發生，至今已有40余年的歷史。2013年，受暖冬、臍橙價格低迷后部分果農棄管等因素影響，贛南柑桔木虱數量激增，導致柑桔黃龍病出現大暴發[5]。雖然近年來通過采取一系列綜合防控措施使疫情得到了明顯控制，但因缺乏有效的治療藥劑，該病仍然是當前對贛南臍橙產業威脅最大的病害。目前，防治柑桔木虱是防控柑桔黃龍病的關鍵措施，了解柑桔木虱種群數量及其攜帶黃龍病菌情況對疫情防控具有重要意義。本研究于2016—2020年定點、定時監測了贛南柑桔木虱發生動態，分別于2018年和2020年檢測了正常管理果園和失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率變化，以期為柑桔黃龍病和柑桔木虱的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 柑桔木虱田間發生動態監測

1.1.1 監測地點

2016—2020年，在贛南柑桔產區的安遠縣、信豐縣、大余縣、會昌縣、崇義縣、上猶縣、南康區、于都縣、興國縣、寧都縣10縣(區)，選擇20個[信豐、會昌各3個，于都、安遠各1個，其余6縣(區)各2個；品種均為紐荷爾臍橙，樹齡8～25年]正常管理的柑桔果園進行柑桔木虱田間發生動態監測。

1.1.2 監測方法

1—2月每月15日和30日(2月為28日)各調查一次；3—12月每隔5 d調查一次，每月調查6次，即每月5日、10日、15日、20日、25日、30日為調查日。每個果園按五點取樣法，每次隨機選5株樹，每株樹按東、南、西、北、頂5個方位各調查2枝共10枝新梢(或新芽)上柑桔木虱成蟲數量，每個監測果園每次共調查50枝新梢(或新芽)[6]。

1.2 柑桔木虱攜帶黃龍病菌變化調查

1.2.1 柑桔木虱采集

2018年9月和2020年9月，在龍南市、尋烏縣、安遠縣、信豐縣、會昌縣、崇義縣、瑞金市、上猶縣8縣(市)選擇53個正常管理果園(2018年20個，龍南、尋烏、會昌各2個，安遠、信豐、崇義各3個，瑞金4個，上猶1個；2020年33個，上猶1個，尋烏、崇義各2個，龍南、安遠、瑞金各4個，信豐7個，會昌9個)和32個失管果園(2018年5個，龍南、尋烏各2個，安遠1個；2020年27個：龍南、尋烏各1個，崇義、上猶各2個，瑞金、信豐各3個，安遠4個，會昌11個)采集柑桔木虱成蟲，帶回實驗室。正常果園，2018年共采集了134頭成蟲，2020年共采集了354頭成蟲。失管果園，2018年共采集了18頭成蟲，2020年共采集了379頭成蟲。

1.2.2 柑桔木虱DNA提取

用動物組織直接PCR試劑盒(福際)制備單頭柑桔木虱的DNA(方法參照試劑盒說明書)，制備產物直接用于PCR反應或置于-20 ℃保存。

1.2.3 實時熒光定量PCR檢測

采用SYBR GreenⅠ熒光染料法，利用引物對CQULA04F/CQULA04R[7]進行黃龍病菌檢測。反應體系為：2×SYBR GreenⅠMaster 5μL，10 μmol/L上下游引物各0.3 μL，無菌水3.4 μL，DNA模板1 μL。反應在實時熒光定量PCR儀(Roche LightCycler?480 II，384)上進行。擴增程序為：95 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 10 s，72 ℃ 10 s，45個循環；95 ℃ 5 s；65 ℃ 1 min，97 ℃ 1 s；37 ℃ 30 s。每個樣品3次重復，每次擴增分別設1個陽性對照，1個陰性對照和1個空白對照。

1.3 柑桔黃龍病病株率調查

在采集柑桔木虱的同時，從正常管理果園中再選擇10個果園(龍南、尋烏、安遠、信豐、會昌、上猶各1個，崇義、瑞金各2個)，根據柑桔感染黃龍病后葉片斑駁黃化、黃梢和“紅鼻果”等典型癥狀進行發病調查，并計算病株率。

1.4 數據分析

試驗數據采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 贛南柑桔木虱發生動態變化

通過對20個正常管理果園進行定點、定時監測，結果表明，贛南柑桔木虱成蟲年度發生規律相似。1—2月，成蟲處于越冬狀態，發生數量較低；3月隨著氣溫上升和春梢萌發，成蟲量開始逐漸增多，發生高峰期主要集中在5月下旬至10月上旬，下半年發生量明顯高于上半年，與前期研究結果一致[6]。2016—2019年，柑桔木虱成蟲年度發生最高峰平均蟲量依次為84頭/百梢(8月5日)、81頭/百梢(9月10日)、57頭/百梢(7月10日)、25頭/百梢(9月25日)，發生數量呈逐年降低趨勢。尤其是2018年和2019年下降明顯，與上年相比分別下降29.63%和56.14%；但2020年柑桔木虱發生數量較前幾年明顯增加，最高峰平均蟲量達93頭/百梢(8月30日)(見圖1)。

圖1 2016—2020年贛南正常管理果園柑桔木虱成蟲發生動態

2.2 柑桔木虱攜帶黃龍病菌變化

2.2.1 正常管理果園

對采集的柑桔木虱成蟲進行單頭木虱Las檢測的結果表明，2018年帶菌柑桔木虱為27頭，帶菌率為20.15%，帶菌木虱的平均CT值為27.75±2.44(平均值±標準差，下同)；2020年帶菌柑桔木虱為46頭，帶菌率為12.99%，帶菌木虱的平均CT值為28.06±1.54。這表明，總體上，2020年贛南正常管理果園柑桔木虱帶菌率較2018年有所下降，帶菌木虱體內帶菌量(以平均CT值表示)差異無顯著(p>0.05)。不同區域正常管理果園柑桔木虱帶菌率存在一定差異，2018年從高到低依次為崇義>龍南>尋烏>會昌>安遠>瑞金>上猶>信豐，2020年依次為崇義>會昌>安遠>上猶>尋烏>瑞金>信豐>龍南。除安遠、信豐和上猶外，其他5個縣(市)2020年柑桔木虱帶菌率均較2019年有所下降(見圖2)。

圖2 正常管理果園柑桔木虱成蟲帶菌變化情況

2.2.2 失管果園

對采集的柑桔木虱成蟲進行單頭木虱Las檢測的結果表明，2018年帶菌柑桔木虱為15頭，帶菌率為83.33%，帶菌木虱的平均CT值為24.50±4.40；2020年帶菌柑桔木虱為196頭，帶菌率為51.72%，帶菌木虱的平均CT值為28.20±2.94?？梢?，2020年柑桔木虱帶菌率較2018年有所下降。同一區域，失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率大多明顯高于正常管理果園(見圖3)。

圖3 2020年同一區域正常管理果園與失管果園柑桔木虱成蟲帶菌率對比

2.3 柑桔木虱帶菌率與黃龍病病株率關系

10個正常管理果園的病株率，2018年為(7.197±4.405)%，2020年為(5.931±4.576)%。對柑桔黃龍病病株率(x)和柑桔木虱帶菌率(y)進行相關回歸分析的結果表明，總的線性回歸方程為y= 2.893 5x+ 5.888 8，R2= 0.619 9(p<0.001)；2018年的相關方程式為y=2.761 6x+0.074 6，R2=0.763 5(p<0.001)；2020年的回歸方程式為y=3.470 2x+9.232 4，R2=0.815 8(p<0.001)(見圖4)。即，柑桔黃龍病病株率和柑桔木虱帶菌率呈極顯著正相關。

圖4 正常管理果園2018年(左)和2020年(右)柑桔木虱帶菌率與黃龍病病株率關系

3 討論與結論

柑桔木虱是柑桔新梢害蟲，柑桔木虱成蟲只產卵于新梢嫩芽，沒有新梢則不產卵繁殖。在贛南地區，柑桔木虱全年發生高峰期集中在5月下旬至10月上旬，與柑桔夏梢、秋梢、晚秋梢抽發期吻合；不同年份的具體發生高峰期存在差異，可能與當年的氣候因素導致柑桔抽梢期變化有關。自2013年柑桔木虱大發生以來，贛南把柑桔木虱列為最重要的害蟲進行防治，推廣了抓“五個關鍵時期”高效藥劑防治、大區域統防統治和小區域“中心戶長制”聯防聯控，以及抹除夏梢、晚秋梢等綜合防控措施，取得了良好的防控效果。因此，2016—2019年贛南正常管理果園柑桔木虱發生數量逐年下降。2020年柑桔木虱發生數量明顯增加的原因，推測可能是受新冠肺炎疫情影響，果農冬季、早春清園工作無法正常進行，導致越冬蟲口基數增多；加上5—6月贛南地區降雨多而頻繁，促使夏梢大量抽發且不整齊，導致6月底柑桔木虱蟲口數量明顯增加，于8月底秋梢期發生量到達全年最高峰。

秋冬季節柑桔葉片和果實更易表現出典型的柑桔黃龍病癥狀，植株內病菌含量較高，柑桔木虱的獲菌率和體內病菌濃度也隨之增高。有研究結果表明，單頭柑桔木虱含菌量在4—7月處于較低水平，隨后開始上升，9—12月柑桔木虱體內含菌量較高[8-9]。但10月中旬后由于氣溫降低和秋梢老熟，田間柑桔木虱蟲口數量較低[6]。因此，本研究選擇在秋季9月采集田間柑桔木虱進行Las檢測。檢測結果表明，2020年正常管理果園和失管果園柑桔木虱帶菌率均低于2018年，失管果園柑桔木虱帶菌率遠高于正常管理果園。通過對柑桔木虱帶菌率與果園病株率進行相關回歸分析，發現柑桔木虱帶菌率與果園黃龍病病株率呈極顯著正相關關系，這與余繼華等[3]的研究結果一致。由此推測，2016—2019年贛南柑桔木虱帶菌率降低可能與贛南地區柑桔黃龍病平均發病株率逐年下降有關；失管果園由于樹勢弱，抽梢不整齊，加上長期不打藥防治柑桔木虱，黃龍病發病株率較高，因此柑桔木虱的帶菌率也更高。

針對贛南柑桔木虱發生動態及其攜帶黃龍病菌情況，建議在柑桔木虱防治中重點加強下半年的柑桔木虱防治力度，尤其是夏梢、秋梢、晚秋梢萌發期的防治；同時要及時清除正常管理果園中的病樹，并徹底清理失管果園，從而減少黃龍病傳染源。