籃狀菌屬藍狀菌組的兩個中國新記錄種

王 龍金世宇

(1.中國科學院微生物研究所真菌學國家重點實驗室,北京 100101;2.北京市京西林場,北京 102300)

0 引言

籃狀菌屬(TalaromycesC.R.Benj.)于1955年建立[1],是發菌科(Trichocomaceae)的一個物種較多的屬?；@狀菌的產分生孢子結構一般為對稱雙輪帚狀枝(symmetrical biverticillate penicillus),有些種會產生裸囊殼型子囊果的有性繁殖結構。

基于β-微管蛋白基因(β-tubulin gene,Ben A)、鈣調蛋白基因(calmodulin gene,Ca M)、RNA 多聚酶Ⅱ第二大亞基基因(DNA-dependent RNA polymerase II second largest subunit gene,Rpb2)和r DNA ITS1-5.8S-ITS2(ITS)的分子系統發育學(molecular phylogenetics)研究顯示籃狀菌屬目前可分8個組(section)約175種[2-5]?；@狀菌組(sect.Talaromyces)是籃狀菌屬已發現物種最多的組,在本論文完成時世界范圍內該組共發現76種,中國已發現42種[3-17]。本文報道從我國貴州麻江縣、山東青島沿海灘涂土壤樣品中分離得到的兩個新記錄種,即安妮索菲籃狀菌(T.annesophieaeHoubraken)和土壤籃狀菌(T.soliJurjevi &S.W.Peterson)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和分離

土壤樣品采自我國貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣杏山鎮、山東青島沿海灘涂和湖北隨州大洪山。樣品分離采用改進的倍比稀釋涂布平皿法[18-20],菌株保在我國權威菌種保藏機構CGMCC(AS1-1 ＝AS3.16070,QD4-1 ＝AS3.16071,SZ1-1 ＝AS3.16072)。

1.2 傳統分類學研究

菌株培養性狀的觀測采用查氏酵母精瓊脂(Czapek yeast autolysate agar,CYA)分別在25、37、5 ℃和麥芽精瓊脂(5% malt extract agar,MEA)在25 ℃培養1周后觀測,分生孢子和菌絲及滲出液和可溶性色素顏色的名稱采用Ridgway的名稱[21-23]。顯微性狀的描述選取MEA 25 ℃培養1周的產孢結構做普通光學顯微鏡載片觀測[2]。

1.3 PCR擴增和測序

基因組DNA 的提取方法及PCR 擴增條件和參數參考Wang and Zhuang[24],Ben A的擴增引物為bt 2a和bt 2b[25],Rpb2引物為T1和E2[13],ITS引物為ITS5和ITS4[26]。PCR 擴增產物經純化后由諾賽生物技術有限公司進行正向和反向測序。

1.4 分子系統發育學分析

測序得到序列使用Bioedit 7.0.9[27]校對,然后后提交到GenBank(AS1-1＝AS3.16070:Ben A＝MW988086,Rpb2＝MW988088,ITS＝MW965793;QD4-1＝AS3.16071:Ben A＝OK104790,Rpb2＝OK104793,ITS＝OK087306,SZ1-1＝AS3.16072:Ben A＝ MW988087,Rpb2＝ MW988089,ITS＝MW965794)。選擇籃狀菌組49個物種的模式菌株和本研究的三個菌株進行分子系統發育學分析,以糙刺孢籃狀菌組(Sect.Trachyspermi)的艾斯尤特藍狀菌T.assiutensisSamson&Abdel-Fattah作為外群。這些菌株的Ben A-Rpb2-ITS組合序列用MEGA 6[28]進行最大似然法(Maximum Likelihood,ML)做系統樹,同時進行自展法(bootstrap)1000次重復評估各分支的可靠性(圖1),序列矩陣的“gaps”處理為“partial deletion”[29]。

2 結果

Ben A-Rpb2-ITS組合序列矩陣共1948個位點(site),ML分析的最適替代模型為K2 ＋GI。根據該序列矩陣的分子系統學研究顯示菌株AS3.16070與安妮索菲籃狀菌的模式菌株CBS 142939聚在一起,bootstrap支持率為100%;菌株AS3.16071和與土壤籃狀菌的模式菌株NRRL 62165同在一個分支,bootstrap支持率為99%,菌株AS3.16072 和與T.veerkampii的模式菌株CBS 500.78 聚在一起,bootstrap 值為98%。依據多相分類學分析支持這些菌株的鑒定,經過查詢中國已發表的籃狀菌物種,確定安妮索菲籃狀菌和土壤籃狀菌為我國新記錄種(圖1～圖3)。

圖1 根據Ben A-Rpb 2-ITS的ML系統發育樹

圖3 土壤籃狀菌AS3.16071的形態特征。

安妮索菲籃狀菌(圖2)

圖2 安妮索菲籃狀菌AS3.16070的形態特征

Talaromyces annesophieaeHoubraken,Persoonia 39:461,2017[30]。

在CYA 上25℃培養7 d,形成直徑25～26 mm 的菌落,較厚,表面具少量輻射狀皺紋;邊緣于培養基表面,整齊;菌落絨狀;大量產孢,呈水芹綠色Cress Green to Dark Cress Green(R.Pl.XXXI);菌絲硫黃色Sulphur Yellow(R.Pl.V);滲出液稀少,呈無色微滴狀;可溶性色素無;背面呈天皇棕色Mikado Brown(R.Pl.XXIX)。

長期以來，我國的傳統金融業無法滿足居民的投資需求。股票市場波動較大風險高，銀行存款收益率低，收益率和風險無法同時滿足投資者的需求。個人理財產品的出現很好的解決了這一矛盾，雖然存在一定風險，但是相比于股市，個人理財產品的風險要小很多，與此同時個人理財產品的收益有遠遠高于銀行的固定存款。因此在很大程度上滿足了市場上大部分風險厭惡型的投資者。

在MEA 上25 ℃培養7 d,形成直徑33～35 mm 的菌落,較薄,表面平坦,邊緣完整;菌落絨狀;大量產孢,呈豆綠色至艾蒿綠色(Pea Green to Artemisia Green,R.Pl.XXXII);菌絲淡綠黃色Light Viridine Green(R.Pl.VI);滲出液無;可溶性色素無;背面呈摩洛哥紅色Morocco Red(R.Pl.VI)。

在查氏酵母精瓊脂(CYA)上37 ℃培養7 d,不萌發。

在查氏酵母精瓊脂(CYA)上5 ℃培養7 d,不萌發。

產孢結構發生于表面菌絲,孢梗莖(80～)100～250×2～3μm,壁光滑;帚狀枝雙輪生兼不規則生;?；枯?～6個,10～12×2～3μm;瓶梗披針形,4～6個/輪,10～12×2～3μm;孢子近球形至橢球形,2.5～3μm,有時較大可達4μm,壁粗糙。

主要特征:生長適度,形成絨狀菌落,在CYA 上分生孢子呈水芹綠色,很像構巢曲霉(Aspergillus nidulans(Eidam)G.Winter)的孢子顏色;帚狀枝雙輪生兼不規則生,菌絲硫黃色,分生孢子橢球形至近球形,壁粗糙。

分布和基物:貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣杏山鎮土壤(AS1-1＝AS3.16070)。

土壤籃狀菌(圖3)

Talaromyces soli Jurjevic&S.W.Peterson,Fung.Biol.123(10):757,2019[31]。

在MEA 上25 ℃培養7 d,形成直徑35～38 mm 的菌落,較厚,平坦,邊緣整齊;菌落絮狀兼繩狀;適度產孢,呈豆綠色Pea Green(R.Pl.XLVII);菌絲淡綠黃色Pale Greenish Yellow(R.Pl.XV);滲出液少量,呈淺褐色;無可溶性色素;背面呈奶油色Cream Color(R.Pl.XVI)。

在CYA 上37 ℃培養7 d,菌落直徑25-28 mm,類似于CYA 上25 ℃、7 d。

在CYA 上5 ℃培養7 d,不萌發。

由氣生菌絲和繩狀菌絲產生產孢結構,孢梗莖(10～)100～200×2.5～3.5μm,壁光滑;帚狀枝雙輪生,偶見單輪生;?；枯?～10個,8～13×2.5～3.5μm;瓶梗披針形,每輪4～10個,9～12×2.5～3.5μm,分生孢子橢球形,3.5～4.5×3～3.5μm,壁光滑。

主要特征:生長適中,形成菌絲繩,菌絲體呈綠黃色,分生孢子呈榆葉綠色;帚狀枝雙輪生,偶見單輪生;分生孢子橢球形,壁光滑。

分布和基物:山東青島灘涂土壤(QD4-1＝AS3.16071)。

3 討論

安妮索菲籃狀菌此前只在荷蘭發現,GenBank目前只有其模式菌株CBS 142939的序列[30]。我國的菌株AS3.16070在菌落形態上與模式菌株幾乎完全相同,其帚狀枝及各個部分的形態和維度與模式菌株也非常接近,但我國菌株的分生孢子壁粗糙,而模式菌株的孢子壁光滑,另外我國菌株還產生一些較大的分生孢子,模式菌株則否。該菌株與模式菌株的Ben A序列無差別(MW988086 vs.MF590098),Rpb2序列只差1個堿基(MW988088 vs.MN969199),ITS 序列有2 個堿基的差異(MW965793 vs.MF574592)。Ben ARpb2-ITS組合序列的分子系統發育學分析顯示我國菌株與模式菌株同在一個分支且支持率顯著(圖1)。

土壤藍狀菌此前只發現于美國和尼加拉瓜[31]。我國菌株AS3.16071與模式菌株在CYA 菌落形態上無大差別,例如它們均形成絮狀和繩狀臟粉色及綠黃色菌絲體,但其分生孢子顏色略有差異,我國菌株的分生孢子呈榆葉綠色而模式菌株的分生孢子呈灰綠色。它們的顯微結構幾乎無差別,比如他們均由繩狀菌絲和氣生菌絲產生產孢結構,帚狀枝雙輪生,偶見單輪生,孢子橢球形,但我國菌株的孢子壁光滑而模式菌株孢子壁稍粗糙。我國菌株與模式菌株的Ben A序列無差異(OK104790 vs.MH792947),Rpb2有2個堿基的差異(OK104793 vs.MH793138),ITS序列完全相同(OK087306 vs.MH793074)。組合序列的分子系統發育學分析顯示該菌株與模式菌株同在一個分支且具有顯著的支持率(圖1)。