溫濕度、補充營養及接種密度對褐帶卷蛾繭蜂繁育效果影響

鐘寶珠，蒙太高，2，呂朝軍*，闞金濤，李文蓮

（1.中國熱帶農業科學院椰子研究所 海南省檳榔產業工程研究中心， 海南 文昌 571339；2.云南農業大學，云南 昆明 650000）

褐帶卷蛾繭蜂（Bracon adoxophyesiMinami?kawa）隸屬于膜翅目（Hymenoptera）繭蜂科（Braco?nidae）繭蜂屬（Bracon），是紅脈穗螟（Tirathaba ru?fivenaWalker）體外寄生蜂［1-3］，可寄生紅脈穗螟的中、高齡幼蟲和預蛹。該寄生蜂產卵時先將寄主麻痹，然后產卵于其幼蟲體表，當褐帶卷蛾繭蜂幼蟲發育至老熟后，即在寄主尸體周圍結繭化蛹［4］。前人研究表明褐帶卷蛾繭蜂不僅可寄生紅脈穗螟，同時對椰子木蛾（Opisina arenosellaWalker）也有較好的寄生效果，在補充營養條件下成蟲期達60 d左右，單頭雌蜂1 d可麻痹椰子木蛾高齡幼蟲6頭左右［5］。

寄生蜂產卵量會受到環境因子影響，合理、高效的寄生蜂繁育技術，不僅可提高寄生蜂的繁育效率，同時可降低繁育成本，以便于更好將其應用于害蟲的生物防治［6］。目前國內外對于褐帶卷蛾繭蜂繁育技術研究較少，呂朝軍等研究表明采用大蠟螟為替代寄主，對褐帶卷蛾繭蜂繁育效果要優于米蛾和黃粉蟲，且最佳接種蜂蟲比為1∶1和2∶1［1］，同時篩選出最佳的繁育器材為60目網管［7］。為提高褐帶卷蛾繭蜂的繁育效率，并為該蜂的后期應用提供技術儲備，本文系統研究了溫濕度、補充營養、接種密度等對褐帶卷蛾繭蜂產卵量、孵化率、羽化率及發育歷期等多項指標的影響，以期為該寄生蜂的室內規?；庇峁├碚撘罁?。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

褐帶卷蛾繭蜂采集于檳榔園中，在室內選用大蠟螟（Galleria mellonellaLinnaeus）為寄主連續擴繁不少于10代，試驗選用羽化24 h內，且已交配的健康成蟲供試。

紅脈穗螟采集于檳榔園，室內選用檳榔心葉繁育不少于3代，試驗時選用預蛹供試。

1.2 試驗方法

除溫、濕度實驗外，所有試驗均在溫度27 ℃、75% RH、光照L∶D=12∶12的人工氣候培養箱中進行。

1.2.1 溫度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

將紅脈穗螟預蛹5頭置于50 mL的透氣離心管中，接入交尾后的褐帶卷蛾繭蜂雌成蟲2頭，置于培養箱中。設置18、2l、24、27、30 ℃共5個處理，相對濕度為75%。顯微鏡下持續觀察寄主體表著卵量至不再增加為止，統計寄生蜂初孵幼蟲、蛹及成蟲的數量，計算卵孵化率、化蛹率和羽化率。同時統計各蟲態歷期，其中成蟲期的計算為從羽化起單獨飼養直至死亡。每處理重復3次。

卵孵化率/%=初孵幼蟲數/產卵數×100；

化蛹率/%=化蛹數/初孵幼蟲數×100；

羽化率/%=羽化成蟲數/化蛹數×100。

1.2.2 相對濕度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

選擇初羽化并交尾24 h內的褐帶卷蛾繭蜂雌蜂5頭置于產卵盒（9 cm×6 cm×3 cm）中，每盒放

隨溫度降低，褐帶卷蛾繭蜂各蟲態的發育時間均延長（圖1）。以18 ℃處理為例，卵期、幼蟲期、蛹期及成蟲期相比27℃處理分別延長53.46%、58.57%、32.41%和71.94%，總發育歷期延長52.61%（圖2），達到顯著差異水平。其中在18 ℃和21 ℃處理之間、24 ℃和27 ℃處理之間及27 ℃和30 ℃處理之間，各蟲態及總發育歷期的長度之間無顯著差異。

圖1 溫度對褐帶卷蛾繭蜂各蟲態發育歷期影響Fig.1 Effect of temperature on the different stage duration of B.adoxophyesi

圖2 溫度對褐帶卷蛾繭蜂總發育歷期影響Fig.2 Effect of temperature on total developmental duration of B.adoxophyesi

2.2 濕度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

濕度變化對褐帶卷蛾繭蜂產卵量、孵化率、化蛹率均無顯著影響，但可干擾成蟲羽化（表2）。在置紅脈穗螟預蛹10頭。將產卵盒置于培養箱中，設置55%、65%、75%、85%、95%共5個相對濕度（relative humidity，RH）處理，溫度為27 ℃。數據統計同1.2.1。每個處理重復3次。

表2 相對濕度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖效果影響Table2 Efftcts of realative humidity（RH） on reproductive effect of B. adoxophyesi

1.2.3 補充營養對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

將初羽化并已交尾的褐帶卷蛾繭蜂雌蜂5頭，置于產卵盒（9 cm×6 cm×3 cm）中，每盒放置紅脈穗螟預蛹10頭。設飼喂10%蜂蜜水和飼喂清水（對照）處理。將產卵盒置27 ℃，75% RH下培養。數據統計同1.2.1。每個處理重復3次。

1.2.4 接種密度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

挑選初羽化褐帶卷蛾繭蜂成蟲，分別以1、2、4、6、8對蜂處理放入養蟲盒中（15 cm×20 cm×10 cm）。將浸有10%蜂蜜水的脫脂棉球掛在蜂箱側面作為成蜂食源，27 ℃，75% RH下令寄生蜂交配。挑選紅脈穗螟預蛹20頭分別放入養蟲盒中。數據統計同1.2.1。每個處理重復3次。

1.3 數據分析

采用Excel和SPSS V21.0軟件對數據進行分析，多重比較采用Duncan氏新復極差法（DMRT法）；將全部初始數據進行標準化，消除綱量的影響，然后進行主成分分析。

2 結果與分析

2.1 溫度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

溫度變化會影響褐帶卷蛾繭蜂產卵量（表1）。在供試5個溫度處理中，以18 ℃處理單雌產卵量最少，比30 ℃處理減少35.49%，而在21~30 ℃褐帶卷蛾繭蜂的單雌產卵量之間差異不顯著。同時研究結果表明，供試范圍內各溫度處理的卵孵化率、化蛹率及成蟲羽化率均無顯著差異。供試濕度處理范圍內，95%RH和55%RH處理組羽化率均最小，且差異不顯著，分別為68.35%和66.73%，而75%RH處理羽化率最高（81.99%），比95%RH和55%RH處理分別提高13.64%和15.26%。

表1 溫度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖效果影響Table 1 Efftcts of temperature on reproductive effect of B. adoxophyesi

濕度變化對褐帶卷蛾繭蜂卵期和幼蟲期均無顯著影響，但會影響蛹期、成蟲期和整個發育歷期長度（圖3，圖4）。隨濕度增加，蛹期、成蟲期和整個發育歷期均顯著增加，以整個發育歷期為例，55%、65%、75%、85%和95%濕度下，總發育歷期分 別 為19.50、20.83、22.67、24.00和25.33 d，95%濕度處理比55%和65%處理的總發育歷期分別延長29.90%和21.60%。

圖3 相對濕度對褐帶卷蛾繭蜂各蟲態發育歷期影響Fig.3 Effect of realative humidity on the different stage duration of B. adoxophyesi

圖4 相對濕度對褐帶卷蛾繭蜂總發育歷期影響Fig.4 Effect of realative humidity on total developmental duration of B. adoxophyesi

2.3 補充營養對褐帶卷蛾繭蜂繁殖影響

對褐帶卷蛾繭蜂補充10%蜂蜜水后，產卵量比飼喂清水處理提高約61.04%（表3），此結果表明通過補充營養后，雌蟲體內營養增加導致產卵量提高。通過補充蜂蜜水后，成蟲期約延長71.70%（圖5），整個發育歷期約延長21.45%（圖6）。

表3 補充營養對褐帶卷蛾繭蜂繁殖效果影響Table3 Efftcts of supplementary nutrients on reproductive effect of B. adoxophyesi

圖5 補充營養對褐帶卷蛾繭蜂各蟲態發育歷期影響Fig.5 Effect of supplementary nutrients on the different stage dura?tion of B. adoxophyesi

圖6 補充營養對褐帶卷蛾繭蜂總發育歷期影響Fig.6 Effect of supplementary nutrients on total developmental du?ration of B. adoxophyesi

2.4 接種密度對褐帶卷蛾繭蜂寄生效能和后代影響

接種密度變化會顯著影響褐帶卷蛾繭蜂的單雌產卵量，在各處理中以接種4對和6對寄生蜂處理組的單雌產卵量最高，分別為44.67粒和44.33粒，但對卵孵化率、化蛹率和成蟲羽化率無影響（表4）。供試接種密度對褐帶卷蛾繭蜂不同蟲態和整個世代的發育歷期均無顯著影響（圖7、圖8）。

圖7 接種密度對褐帶卷蛾繭蜂各蟲態發育歷期影響Fig.7 Effect of inoculation density on the different stage duration of B. adoxophyesi

圖8 接種密度對褐帶卷蛾繭蜂總發育歷期影響Fig.8 Effect of inoculation density on total developmental duration of B. adoxophyesi

表4 接種密度對褐帶卷蛾繭蜂繁殖效果影響Table 4 Efftcts of inoculation density on reproductive effect of B. adoxophyesi

2.5 褐帶卷蛾繭蜂繁育的影響因子主成分分析

利用SPSS V21.0軟件先對數據進行標準化處理，使其服從正態分布，并消除綱量影響之后進行主成分分析。對褐帶卷蛾繭蜂的產卵量、孵化率、化蛹率、羽化率以及發育歷期的指標進行主成分分析，共提取到特征根大于1的主成分3個（表5）。其中第1主成分的特征值為3.15，方差貢獻率為35.03%，主要表現為褐帯卷蛾繭蜂卵期、幼蟲期、蛹期、成蟲期和總體發育歷期占有較大的系數；第2主成分的特征值為2.37，方差貢獻率為26.28%，在第2主成分中化蛹率、羽化率、孵化率和單雌產卵量有較大的正系數值，即第2主成分和褐帯卷蛾繭蜂的化蛹率、羽化率、孵化率和單雌產卵量呈正相關；第3主成分的特征值為1.38，方差貢獻率為15.36%，主要和蛹期、單雌產卵量、孵化率呈正相關，前3個主成分的累積貢獻率達到76.67%。

表5 主成分的相關系數、特征值、貢獻率和累計貢獻率Table 5 Coefficient， characteristic value， variance contribution rate and accumulated contribution rate of principal components

根據主成分因子得分系數矩陣得到各成分因子得分模型為：

以各成分對應方差貢獻率為權重，根據主成分得分和對應的權重線性加權求和得到各主成分得分、綜合得分和排名結果見表6，得到綜合評分模 型 函 數 為：F=0.350 3×F1+0.262 8×F2+0.153 6×F3，結果顯示接蜂密度為4對寄生蜂的綜合評分最高為1.41，即在本試驗條件下，當接蜂密度為4對，褐帯卷蛾繭蜂可以獲得較高的單雌產卵量、孵化率、化蛹率和羽化率，對寄生蜂繁殖有利。

表6 主成分得分和綜合得分Table 6 Principal component score and comprehensive score

3 討論

溫度變化對昆蟲卵的孵化、幼蟲發育、化蛹和羽化功能等均會造成影響，并因昆蟲種類不同而有差異［8-9］。林玉英等［5］研究發現隨溫度降低，褐帶卷蛾繭蜂世代歷期顯著延長。本研究結果表明，隨溫度降低，褐帶卷蛾繭蜂的產卵量減少，同時各蟲態發育時間均延長，進一步說明可通過適當提高繁育溫度來增加褐帶卷蛾繭蜂的產卵量，并縮短發育歷期。相對濕度對昆蟲體內代謝起作用，進一步影響與此有關的繁殖、生長發育、存活率等［10］，如切割潛蠅繭蜂在35%RH條件下不能正常交配并繁殖后代。本研究中濕度對褐帶卷蛾繭蜂產卵量、孵化率、化蛹率等無影響，但會干擾成蟲羽化率并影響整個發育歷期，各供試濕度中以75%RH的羽化率最高，可作為該蟲大量繁育的參考濕度。

適當的補充營養可提高蟲體內的營養水平，進而對其生長發育和產卵等行為造成影響，此現象已在昆士蘭果蠅（Bactrocera tryoniFroggatt）和南亞實蠅（Bactrocera tauWalker）上的研究上得到證實［11-12］。在寄生蜂繁育方面，以10%蜂蜜水+粉蚧蜜露為營養時可延長亞金跳小蜂（Aenasius bambawaleiGi-rault）壽命并提高其種群適合度［13］，同時補充蜂蜜、葡萄糖、蔗糖、果糖等糖類營養均能顯著延長豌豆潛蠅姬小蜂（Diglyphus isaeaWalker）的壽命［14］。在本研究中，對褐帶卷蛾繭蜂補充10%蜂蜜水后，成蟲期比對照約延長71.70%，整個發育歷期延長21.45%，同時產卵量也顯著增加，說明在褐帶卷蛾繭蜂繁育過程中，增加營養物質可提高擴繁效率。

適宜的寄生蜂接種密度，對于提高繁育效果具有重要意義。前人研究表明煙蚜繭蜂（Aphid?ius gifuensisAshmead）在低寄主密度下傾向于過寄生，在高寄主密度下有避免過寄生的趨勢［15］。本文研究顯示，在接種4對和6對寄生蜂的單雌產卵量最高，且兩者間無顯著異，同時在本試驗過程中，觀察到在寄生蜂密度達到一定程度后，寄生蜂自身之間會干擾相互之間的產卵行為，因此在褐帶卷蛾繭蜂繁育過程中保持適度的寄生蜂密度可提高繁育效率。通過主成分分析，本研究得出3個特征值大于1的主成分，且累計方差貢獻率達到76.67%，同時通過對主成分得分和綜合得分進行統計排序，結果顯示接蜂密度為4對處理組的綜合評分最高為1.41，對褐帯卷蛾繭蜂的繁育更有利。

眾所周知，現階段害蟲防控技術中化學防治仍占主導地位［16-17］，但隨著消費者對農產品質量要求的提高及化學防治中藥劑的殘留危害問題［18］，無藥化防治逐步提上日程，生物防治技術也開始受到重視［19］。寄生蜂作為重要的生物防治因子，已在美國白蛾（Hyphantria cuneaDrury）、松墨天牛（Monochamus alternatusHope）等［20-21］的防治上廣泛應用，以后也必將在其它害蟲的防治上逐漸推廣，這其中就需要解決寄生蜂規?；庇年P鍵技術問題。在本研究中我們發現繁育溫度、濕度、接種密度等均會對褐帶卷蛾繭蜂的發育造成影響，相關研究結果對于其它種類寄生蜂規?；庇哂幸欢ǖ慕梃b意義，同時本研究中溫濕度、營養添加和密度效應之間的交互效應關系、溫濕度、密度和營養的雙因素和三因素關系等均有待進一步研究。

4 結論

本文研究了不同溫度、濕度、補充營養及寄生蜂接種密度下，褐帶卷蛾繭蜂的繁育效果，以期為該寄生蜂的規?；庇峁┘夹g支撐。結果表明，從產卵量、孵化率、化蛹率、羽化率及發育歷期等方面綜合考慮，在本研究供試條件下，褐帶卷蛾繭蜂的最佳繁育溫度為21~30 ℃之間；各相對濕度對單雌產卵量、卵孵化率、化蛹率、卵期和幼蟲期長度均無影響，但在75%RH下成蟲羽化率最高，可作為該寄生蜂繁育的參考濕度；在褐帶卷蛾繭蜂接種過程中適當添加補充營養并控制接種密度均可提升繁育效果。