糧食中真菌毒素檢測技術研究進展

劉 嵐

（新疆維吾爾自治區糧油產品質量監督檢驗站，新疆 烏魯木齊 830017）

糧食是人類不可或缺的物質基礎，若糧食安全無法得到有效保證，會引發一系列社會問題[1]。其中，真菌毒素在糧食中的影響極其廣泛，目前已知的真菌毒素已達400 余種，約有3/4 被確定對人體健康會產生影響，根據有關統計數據顯示，全球每年約有2%的糧食因真菌毒素污染而無法食用，讓本就面臨糧食危機的各國雪上加霜[2]。隨著人們糧食安全意識的覺醒，食品安全問題已然占據主導地位，針對真菌毒素帶來的影響，必須采取必要的技術監測行動，在快速檢測領域主動作為，幫助人們遠離真菌毒素帶來的糧食污染，營造良好的食品安全社會氛圍。

1 真菌毒素檢測概述

真菌毒素（Mycotoxins）是由真菌生長代謝產生的毒素統稱，真菌毒素對于糧食的影響巨大，諸多糧食極易受到真菌的感染，進而產生損害人體健康的真菌毒素，根據相關研究證實，真菌毒素屬于潛在的致癌物質，一旦誤食將嚴重威脅人們的生命安全[3-5]。 目前，全球約有100 余個國家及地區，出臺了比較嚴格的真菌毒素限量規定，且形成了豐富的真菌毒素快速檢測方法，為真菌毒素的有效控制提供了出路。

近年來，國內對于真菌毒素的研究也在快速推進，重點在于突出對檢測技術的創新，嘗試利用技術手段打造檢測閉環。在糧食中較為常見的真菌毒素，包括玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）、赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）、黃曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）及伏馬毒素（Fumonisins，FBs）等類型，且在《食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中，對不同類型的真菌毒素進行了明確的規定，以確保糧食的食用安全[6-8]。因此，面對日益復雜的真菌毒素問題，必須要依據更有效的快速檢測方式，避免其對人體健康帶來傷害，力求持續改善糧食的安全現狀。

2 真菌毒素快速檢測技術

2.1 酶聯免疫法

酶聯免疫法誕生于20 世紀70年代，是較早的檢測技術之一，具有準確、快速、特異等特征，可對諸多類型的真菌毒素進行快速檢測，加之其較為合理的檢測成本，在糧食安全領域得到廣泛應用[9]。

根據對酶聯免疫法測定原理分析，即將具備良好免疫活性的抗原、抗體預先結合至所準備的固相載體表面，在開展技術檢測時依據規范的程序，將樣品與酶標抗原或抗體相結合，借助反應形成抗原或抗體復合物[10]。在結合反應完成后，分析酶標抗原或抗體與樣品抗原或抗體的比例，再對反應液中的多余物質進行清洗，以酶反應底物進行催化獲得有色產物[11]。結合其檢測反應的原理，可有效分析兩者之間的反應關系，即其顏色的變化程度與抗體或抗原比例有關，因此可通過定性或定量分析，獲得真菌毒素在樣品中的具體含量值。

有研究者利用酶聯免疫法進行了實踐，其針對牛奶制品及嬰兒奶制品中的AFM1含量進行檢測，在此過程中制備了黃曲霉毒素M1(AFM1)特異性的單克隆抗體，由此進一步增加了檢測的靈敏性和準確性[12]。ROSSI 等[13]利用酶聯免疫法，對肉雞及其飼料進行了AFB1的檢測，通過制備AFB1特異性單克隆抗體，分別測得其含量為1.25 μg·kg-1和1.41 μg·kg-1，實現了檢測方式的成功應用。

2.2 液相色譜法

在真菌毒素的檢測中，液相色譜法屬于常用方式之一，其優勢在于能夠同時實施定性及定量分析。結合真菌毒素檢測的實際情況，在檢測的過程中往往易受到諸多條件干擾，甚至產生相互制約的情況，為使檢測能達到最佳效果，在檢測實踐環節應注重綜合分析，以最佳配比呈現檢測的精準性。

采用液相色譜法時，需要結合真菌毒素的特點，如部分自發光的真菌毒素檢測，可利用熒光檢測器的液相色譜法分析，或根據檢測對象的具體特點，對照熒光所產生的強度變化進行分析，以強化檢測設備的準度[14]。在熒光信號增強方面，可選擇運用溴碘或環糊精等衍生劑幫助衍生。目前，國內研究者對于該檢測方法也有相關研究。例如，何學超等[14]在糧食對黃曲霉毒素B 族的檢測中，對不同檢測方法前處理技術的比較分析，包括以柱后衍生、熒光檢測、紫外檢測為主的分離檢測技術，以及免疫親和柱凈化、硅膠凈化、固相萃取等，證實液相色譜法的應用極具優勢。

此外，有研究者對玉米產品的玉米赤霉烯酮進行檢測，采用反相高效液相色譜法選取粉碎后的玉米樣品，再利用90%的乙腈溶液，結合提取、過濾、旋轉、蒸發、濃縮、分離、儀器檢測及定量等過程，對玉米中的玉米赤霉烯酮進行了測定，其日內相對標準偏差為5.8%，日間相對標準偏差為4.0%，檢出限為10 μg·kg-1[15-16]。

2.3 氣相色譜法

氣相色譜法在真菌毒素的檢測中，多用于對弱熒光或弱吸收，以及不含發色或熒光基團的檢測[17]。其主要是源于該檢測方法的特殊性，可對缺少羥基基團的A 類單端孢霉烯族化合物實施檢測，檢測的效果優于其他檢測方式，因此也成為該類真菌毒素的有效檢測方法。

通常情況下，氣相色譜法利用電子捕獲檢測器對真菌毒素進行檢測，但分析前的衍生化屬于氣相色譜法的關鍵環節，一般以硅烷化試劑作為衍生試劑，以避免受樣品基質及檢測要求差異性帶來的影響，全面提升檢測的有效性和精確性。例如，俞瓊等[17]在研究中針對玉米中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇實施檢測，以氯仿-乙醇對樣品實施處理，在硅膠柱凈化后，使用甲苯-丙酮和二氯甲烷-甲醇分別進行洗柱和洗脫，配合電子捕獲檢測器對玉米樣品實施測定，其檢出限為10 μg·kg-1。

2.4 免疫膠體金

免疫膠體金屬于一種較為創新的快速檢測技術，在實踐應用中表現出諸多的優勢，包括時間短、靈敏度高、操作簡單等，尤其是不需要依賴專業儀器，可隨時進行檢測，因此也被廣泛應用于大批量樣品的檢測領域[18-20]。由于該技術未來的廣泛應用優勢，以及在不同真菌毒素中的應用，目前已經成為一種極具普遍性的快篩檢測方法。

在具體的應用環節，可利用結合墊作為膠體金標記特異性抗體的承載，再利用試紙條對樣本進行檢測，當試劑緩慢移動至真菌毒素抗原區域，通過與膠體金標志試劑間的反應，使檢測帶上顯示顏色，以此作為判斷真菌毒素含量的對照依據。根據現階段的研究成果顯示，免疫膠體金主要應用領域為單種真菌毒素的檢測，同時在多種真菌毒素檢測中也有應用案例。桑曉霞等[20]在檢測中結合新抗體的應用，制備了免疫膠體金檢測試紙，在AFB1檢測中的檢出限為1 μg·kg-1，且與黃曲霉毒素無交叉反應。

3 結語

綜上所述，隨著食品安全要求的不斷提升，對于真菌毒素的檢測也將更加嚴格，必須持續挖掘真菌毒素快速檢測技術的潛力，配合現階段的糧食安全監測需求，做好各類糧食的檢測分析，確保為社會提供安全可靠的糧食。從技術層面上看，包括酶聯免疫法、液相色譜法、氣相色譜法和免疫膠體金等在內的快速檢測技術，仍然需要加緊創新與實踐，保證快速檢測技術的穩定性、準確性和普及性，以及采取更加豐富的檢測技術手段，做好糧食安全領域的實時監測工作，竭力為社會糧食安全提供強大的技術支持。