HBsAg低反應性乙肝患者HBeAg表達與HBV基因型、DNA載量的關系

呂新建，石貴福，王合群

(1.駐馬店市第一人民醫院 消化內科，河南 駐馬店 463000；2.駐馬店市中心醫院 感染科，河南 駐馬店 463000)

抗病毒治療是抑制乙肝病毒復制的重要措施，對修復肝損傷、提高肝功能具有重要作用。而近年研究指出，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)基因異質性不僅可影響乙肝的流行病學特點，還可影響病毒變異、疾病預后及抗病毒治療的應答[1]。近年，隨分子生物學發展，血清學、病毒學定量檢測廣泛應用于臨床，HBV檢測主要有乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen，HBeAg)等血清學指標與HBV DNA等病毒學指標；HBeAg、HBeAg主要反映免疫表達及抗原抗體體系，DNA載量則直接反映病毒復制[2-4]。因此，HBV基因分型及HBV DNA定量檢測逐漸應用于臨床診斷，關于HBV基因型與HBeAg表達、DNA載量之間的相關性研究逐漸成為關注點，但其結論尚存在爭議。本研究選取152例HBsAg低反應性乙肝患者，檢測、分析其HBeAg表達與HBV基因型、DNA載量的關系，以期為HBsAg低反應性乙肝的臨床診斷、病情評估及抗病毒治療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年4月至2021年10月駐馬店市第一人民醫院收治的152例HBsAg低反應性乙肝患者，HBV基因分型為B基因型43例(28.29%)，C基因型102例(67.11%)，D基因型4例(1.97%)，B/C混合基因型2例(1.32%)，C/D混合基因型2例(1.32%)。B基因型男28例，女15例，年齡22～56(39.12±8.37)歲；C基因型男63例，女39例，年齡23～61(42.25±9.23)歲；D基因型男3例，女1例，年齡分別為22、38、36、55歲；B/C混合基因型男2例，年齡分別為19、54歲；C/D混合基因型男1例，女1例，年齡分別為21、59歲。各基因型HBsAg低反應性乙肝患者性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.2 選例標準(1)納入標準：符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》診斷標準[5]；首次發現HBsAg陽性；HBsAg定量<1 000 IU·L-1；年齡>18歲；既往無抗乙肝病毒治療史，近6個月無抗纖維化藥物、免疫調節劑用藥史；患者及近親屬了解本研究并簽署知情同意書。(2)排除標準：人類免疫缺陷病毒感染；伴有失代償期肝硬化；存在藥物性肝病、酒精性肝病、其他自身免疫性肝??；處于哺乳期、妊娠期；存在惡性腫瘤疾??；存在語言、精神障礙。

1.3 治療方法入院后均接受系統保肝措施，給予恩替卡韋(福建廣生堂藥業股份有限公司，批準文號H20110172，規格：0.5 mg)抗病毒治療，口服每日0.5 mg，連續治療3個月。

1.4 HBV基因分型采用熒光PCR定量儀(德國羅氏診斷有限公司生產，型號Lightcycle 480)，以多對型特異性引物巢式PCR，進行擴增處理，將PCR產物分別置于瓊脂糖凝膠(3%)中進行電泳，加入低相對分子質量標志物，以電泳條帶長度進行基因型判定，各HBV基因分型電泳條帶：A基因型68 bp、B基因型281 bp、C基因型122 bp、D基因型119 bp、E基因型167 bp、F基因型97 bp。引物由上海英駿生物公司合成。

1.5 觀察指標(1)對比不同HBV基因型患者基線肝功能指標[基線丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase，ALT)、白蛋白(albumin，ALB)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、膽堿酯酶(cholinesterase，CHE)水平]、HBeAg轉陰率及ALT復常率。(2)對比不同HBV基因型治療前、治療3個月后的HBsAg、HBeAg表達與DNA載量。(3)分析不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達、DNA載量的相關性。

2 結果

2.1 不同HBV基因型患者基線肝功能、HBeAg轉陰率、ALT復常率對比152例HBsAg低反應性乙肝患者中由于D基因型、B/C混合基因型、C/D混合基因型共8例，例數較少，故僅將B、C基因型納入分析比較。經統計分析，B基因型乙肝患者HBeAg轉陰率較C基因型乙肝患者高(P<0.05)，B、C基因型乙肝患者基線ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT復常率差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同HBV基因型患者基線肝功能、HBeAg轉陰率、ALT復常率對比

2.2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表達與DNA載量治療前B、C基因型的HBsAg、HBeAg表達與DNA載量差異無統計學意義(P>0.05)；治療3個月后B基因型HBsAg較C基因型低，HBeAg表達較C基因型高(P<0.05)；B、C基因型DNA載量差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表達與DNA載量

2.3 不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達、DNA載量的相關性B基因型的HBsAg與HBeAg表達呈負相關(r=-0.486，P<0.05)，HBsAg與DNA載量無相關性(P>0.05)；C基因型的HBsAg與HBeAg表達呈負相關(r=-0.419，P<0.05)，HBsAg與DNA載量無相關性(P>0.05)。見表3。

表3 不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達、DNA載量的相關性

3 討論

乙肝是由HBV感染所致傳染性肝臟損害疾病，我國依處于乙肝中度流行區[6]?，F階段，臨床免疫球蛋白的應用、乙肝疫苗的廣泛普及，均可能引發HBsAg變異低反應性表達[7]。余占娟等[8]研究表示低反應性HBsAg乙肝患者主要為HBV C基因型，本研究C基因型占67.11%，與其研究相似，其次為B基因型(28.29%)，基因分型占比差異可能與標本數量、取樣方法有關。目前關于HBV基因型與HBeAg、HBV DNA載量之間的關系成為臨床研究重點，進一步明確其關系，對HBsAg低反應性乙肝患者診斷及病情評估具有臨床指導意義。

HBsAg水平可反映乙肝病毒復雜狀態及患者病情程度；HBeAg是HBV病毒的復制指標；HBV DNA可反映肝臟組織內的病毒復制轉錄活動的活躍程度。張小曼等[9]報道顯示，檢測HBsAg定量與DNA載量有利于了解HBV病毒復制情況。乙肝患者機體內HBV復制活躍，可增強乙肝患者體液免疫應答及細胞免疫，導致不同程度的肝損傷[10]。張榮芳等[11]研究指出，慢性乙肝患者治療前及治療初期血清HBV DNA水平與HBsAg、HBeAg相關。血清ALT、ALB、AFP、CHE是反映肝損傷的重要指標[12]。本研究顯示，B基因型乙肝患者HBeAg轉陰率較C基因型乙肝患者高，治療3個月后B基因型HBsAg較C基因型低，HBeAg表達較C基因型高，提示不同基因型病毒的復制活躍程度存在一定差異，C基因型病毒致病性強，易造成患者免疫耐受；與C基因型乙肝患者相比，B基因型乙肝患者免疫應答能力較強。張玲等[13]研究表示，乙肝患者HBV-DNA載量與其肝功能有關，且有利于臨床HBV復制情況的評估及治療方案的選擇。本研究中B基因型、C基因型乙肝患者基線ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT復常率差異無統計學意義，B、C基因型HBsAg與DNA載量無明顯相關性，可能與低反應性HBsAg乙肝患者HBsAg水平有關，機體尚無明顯癥狀、體征表現。本研究相關性分析顯示，B、C基因型HBsAg與HBeAg表達均呈負相關，HBeAg表達、DNA載量及基因型聯合監測，有利于臨床診斷、評估低反應性HBsAg乙肝患者病情程度，避免臨床對低反應性HBsAg患者的誤診、漏診，對臨床個體化調整抗病毒治療方案具有指導意義。

綜上所述，HBsAg低反應性乙肝患者HBsAg與HBeAg表達均呈負相關關系，與DNA載量相關性不明顯，不同基因型間HBsAg、HBeAg表達與DNA載量差異無統計學意義，明確HBsAg與HBeAg表達的關系并及時干預，有利于臨床診斷、治療及患者預后改善。