攀鱸胚胎發育觀察

馬本賀 李燕華 王海華 王夢杰 余連渭 李左宏

(1 江西省水產科學研究所，南昌市特種水產繁育與健康養殖重點實驗室，江西南昌 330039；2 上饒市信州區農技中心，江西上饒 334000)

攀鱸(Anabastestudineus)又名過山鯽、步行魚，隸屬于鱸形目、攀鱸科、攀鱸屬，為我國原生魚類，廣泛分布于我國南部以及南亞和東南亞地區[1]。攀鱸具有發達的鰓上器和鰭，依靠鰓上器的輔助呼吸和鰓蓋、胸鰭的擺動，能離水運動作短距離遷移。攀鱸肉質鮮嫩，營養豐富，且具有生長快、耐低氧、養殖周期短、風險低等優點，是近年來逐漸興起的小型經濟魚類，已在海南、廣東、福建等地開展養殖。本項目團隊從海南引進攀鱸苗種，在江西開展了人工繁育和生態養殖等方面的研究并取得較好進展，為攀鱸“南魚北養”的順利實施奠定了前期基礎。

胚胎發育是魚類早期生活史的重要階段之一，也是其機體器官發生、發展的基礎時期，直接關系到魚類繁殖的成功與否[2]。魚類胚胎發育研究是開展規?；a的理論基礎。目前國內有關攀鱸的研究較少，且主要集中在生物學[3]、毒力學[1,4]和遺傳多樣性[5]等方面，未見攀鱸早期發育的報道。本研究系統觀察了攀鱸胚胎發育過程，旨在了解其胚胎發育特點及規律，為攀鱸的人工繁殖和苗種生產提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

攀鱸繁殖親本為江西省水產科學研究所自繁自育個體，雌魚體質量為(254.04±16.18)g，雄魚體質量為(185.18±18.90)g。催產藥物使用絨毛膜促性腺激素(HCG)、促黃體素釋放激素A2(LHRH-A2)(寧波第二激素廠)，地歐酮(DOM)(寧波三生生物科技有限公司)。

1.2 試驗方法

對性成熟攀鱸親本的腹腔注射催產藥物(HCG 667 IU/mL、LHRH-A26.67 mg/mL、DOM 5.0 mg/mL)，注射量為雌魚0.5 mL，雄魚用量減半。催產后把親魚放入水泥池(5.0 m×1.5 m×1.2 m)中懸掛的網箱(網目孔徑4.75 mm)內，流水刺激親魚自行產卵受精。親魚產卵后將其移出，受精卵在池中用微流水充氧孵化。用篩絹網撈取1 000粒受精卵置于室內小型孵化桶中，孵化過程中，用加熱棒控制水溫在(27.5±1.0)℃，用微孔氣石增氧。在不同時間間隔多次取樣，每次取樣數量不少于15粒受精卵。用倒置顯微鏡(OLYMPUS Th4-200)連續觀察胚胎發育過程并拍照、記錄胚胎各時期的發育時間和形態特征，以50 %以上的個體發育進入某一階段作為該發育階段的起始時間。

2 結果

攀鱸受精卵為無黏性的浮性卵，吸水膨脹后出現明顯的卵周間隙(見圖1-1)，平均膜徑(912.92±17.07)μm，卵周間隙平均厚度為(185.18±18.90)μm。參考一般硬骨魚的胚胎發育階段劃分方法[6]，受精卵在水溫(27.5±1.0)℃、溶解氧≥6.5 mg/L、pH 7.6～8.2的環境條件下，歷經7個階段、26個時期，歷時17 h 45 min孵化出膜成為初孵仔魚。胚胎發育時序及各個階段的主要形態特征如下(見表1、圖1)。

2.1 胚盤形成

受精后原生質向動物極移動，28 min后原生質集中于動物極形成半透明的隆起狀胚盤(見圖1-2)。

2.2 卵裂

攀鱸的卵裂方式為盤狀卵裂。受精后43 min，動物極出現第1條橫貫胚盤的卵裂溝，將胚盤分成兩個大小、形態相似的分裂球，進入2細胞期(見圖1-3)。受精后59 min，出現第2條卵裂溝，兩條卵裂溝呈垂直狀，形成4個卵裂球，進入4細胞期(見圖1-4)。受精后1 h 13 min，受精卵進行第3次分裂，胚盤形成2條平行的卵裂溝，8個卵裂球呈兩行排列，進入8細胞期(見圖1-5)。受精后1 h 26 min，受精卵開始第4次卵裂，形成“4×4”排列的16個卵裂球，進入16細胞期(見圖1-6)。受精后1 h 40 min，受精卵開始第5次卵裂，進入32細胞期，此時卵裂球開始變成不規則排列(見圖1-7)。隨著卵裂的持續進行，受精后1 h 58 min，形成大小不一、重疊排列的多個卵裂球，進入多細胞期(見圖1-8)。

2.3 囊胚

受精后2 h 43 min，卵裂球數目繼續增多且體積更小，聚集在動物極形成突起狀，進入囊胚早期(見圖1-9)。卵裂細胞從動物極向植物極移動，受精后3 h 22 min，動物極突起的高度逐漸降低，進入囊胚晚期(見圖1-10)。

2.4 原腸胚

囊胚層細胞繼續向植物極移動，受精后4 h 27 min出現胚環，進入原腸早期(見圖1-11)。胚層細胞沿著胚體擴展，受精后4 h 56 min，胚層細胞繼續下包至卵黃大半部分，胚環一端形成胚盾并逐漸增長，進入原腸晚期(見圖1-12)。

2.5 神經胚

受精后6 h 4 min，胚層細胞下包至卵黃底部，胚環一端膨大形成頭部，進入神經胚期(見圖1-13)。受精后6 h 59 min，胚層完全包圍卵黃，胚孔閉合，進入胚孔封閉期(見圖1-14)，胚體初步形成。

2.6 器官形成

胚體繼續發育，受精后7 h 32 min，胚體頭部出現兩個突起，為眼的原基，進入眼基期(見圖1-15)。受精后8 h 17 min，頭部進一步隆起，胚體背部出現5～7對體節，進入肌節期，并開始出現零星的黑色素細胞(見圖1-16)。體節數量繼續增加，受精后9 h 3 min，黑色素逐漸增多，胚體尾部隆起形成尾芽，進入尾芽期(見圖1-17)。受精后10 h 14 min，頭部的眼原基發育成橢圓形的眼囊，進入眼囊期(見圖1-18)。受精后11 h 50 min，頭部后方出現橢圓形的耳囊，進入耳囊期，此時尾芽繼續發育形成尾部(見圖1-19)。受精后12 h 22 min，在眼囊視杯口出現了晶狀體，進入晶體期，此時尾部與胚體明顯分離(見圖1-20)。受精后13 h 51 min，胚體出現輕微抽動，進入肌肉效應期(見圖1-21)。受精后14 h 26 min，胚體前端與卵黃囊連接處發育成管狀心臟，心臟開始有規律地搏動，周邊流動淺紅色血液，進入心跳期(見圖1-22)，搏動頻率在(132.7±7.2)次/min。受精后15 h 57 min，胚體整個尾部與卵黃脫離接觸，尾部開始無規則顫動，進入尾顫期(見圖1-23)。

2.7 出膜

受精后16 h 43 min，整個胚體在卵膜內翻滾轉動，尾部蜷縮在卵膜內，進入將孵期(見圖1-24)。受精后17 h 31min，胚體尾部擺動頻率和幅度加劇，首先破膜而出，進入出膜期(見圖1-25)，尾部首次伸直，頭部和身體還在卵膜內，此時心搏率為(145.6±8.8)次/min。受精后17 h 45 min，隨著胚體的繼續晃動，卵膜破裂，整個胚體擺脫卵膜，成為初孵仔魚(見圖1-26)，完成胚胎發育整個過程。

初孵仔魚沉于水底，全身分布黑色素，全長(1 915.31±92.21)μm，體寬(673.85±26.99)μm。仔魚頭部與身體前端呈近橢圓形的球體，卵黃囊位于仔魚腹部，呈圓形或橢圓形，身體后端與尾部細長呈棍狀。初孵仔魚心搏率為(166.9±8.5)次/min，消化道未貫通。

3 討論

攀鱸1齡即可達到性成熟，其受精卵為無黏性的浮性卵，卵質均勻，卵裂方式為盤狀卵裂，胚胎發育歷經胚盤形成、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成和出膜7個階段。攀鱸的胚胎發育與一般硬骨魚發育規律相似[7]，但在發育過程中有其自身特點。攀鱸受精卵為浮性卵，與同屬攀鱸亞目的叉尾斗魚(Macropodusopercularis)[8]和圓尾斗魚(M.chinensis)[9]一致，而暹羅斗魚(Bettasplendens)[10]則為沉性卵。攀鱸受精卵吸水膨脹后膜徑為(912.92±17.07)μm，略小于暹羅斗魚和圓尾斗魚，而大于叉尾斗魚。胚胎發育過程中，攀鱸肌節期時在胚體和卵黃囊上開始出現黑色素細胞，且隨著器官形成、發育，黑色素逐漸增多。雜交鱧(烏鱧Channaargus×斑鱧C.maculata)[11]在腦泡形成期出現少許黑色素沉淀，圓尾斗魚則在眼囊期出現色素。攀鱸初孵仔魚全身及卵黃囊皆分布有黑色素細胞，而大多數魚類在剛出膜時身體近半透明狀，僅有少量黑色素。如雜交鱖(大眼鱖Sinipercakneri×翹嘴鱖S.chuatsi)初孵仔魚魚體基本透明，而卵黃囊含有較多黑色素[12]。

一般而言，受精卵的卵徑大小與胚胎發育歷時成正相關關系，受精卵越大，胚胎發育時間越長，其初孵仔魚規格也越大[13]。本研究中，攀鱸胚胎發育歷時17 h 45 min，初孵仔魚全長(1 915.31±92.21)μm，受精卵大小、發育時長和仔魚規格均小于大口黑鱸(Micropterussalmoides)[14]、翹嘴鱖[15]、大眼鱖[16]、黑莓鱸(Pomoxisnigromaculatus)[17]等其他鱸形目魚類。在出膜階段，胚胎孵化酶的消化和胚體的物理運動共同作用于卵膜，促使卵膜破裂，完成孵化過程。在合適的溫度區間，孵化酶的活性隨著溫度的升高而增強[18]，這也加快了胚體出膜的進程。陳祈輝等[19]使用規格較小的攀鱸作為親魚進行人工繁殖，發現在水溫28 ℃下胚胎孵化時間長達72 h，遠長于本試驗結果。其原因可能為親魚性腺發育情況、卵子質量不同。此外，孵化密度、水流量、溶解氧和pH等外界因子也會對胚胎發育產生較大影響[20]。以上因素的共同作用導致其與本試驗中攀鱸胚胎發育時間差異較大。綜上所述，攀鱸胚胎發育歷時較短，初孵仔魚分布有較多黑色素細胞，胚胎發育過程中與其他魚類相比有共性也有其特異性。