靖遠縣包蟲病基因型測定及防控技術研究

劉俊石，付寶權，李斌，賈萬忠

（1.靖遠縣畜牧獸醫技術服務中心 甘肅白銀 730900；2.中國農業科學院蘭州獸醫研究所/家畜疫病病原生物學國家重點實驗室/國家動物包蟲病專業實驗室/甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室 蘭州 730046）

棘球蚴?。╡chinococcosis）是由棘球屬絳蟲（echinococcus spp.）的幼蟲-棘球蚴引起的一類重要人獸共患寄生蟲病，棘球屬終末宿主是狗、狐貍、狼等食肉類動物，成蟲寄生于其小腸內，蟲卵隨糞便排出，污染食物、飲水和周圍環境，感染棘球絳蟲的終末宿主是棘球蚴病的最重要傳染源，呈全球性分布。在我國，棘球蚴病主要分為兩型：囊型棘球蚴?。╟ystic echinococcosis，CE）和泡型棘球蚴?。╝lveolar echinococcosis，AE）。靖遠縣轄區18 個鄉鎮、177 個行政村、10.3 萬農戶，總人口50.35 萬人，其中農業人口43.98 萬人，占總人口的87.34%。2012 年靖遠縣被省上確定為養羊大縣。2019 年底各類畜禽飼養量達到614.53 萬頭（只），存欄333.12 萬頭（只），出欄281.41 萬頭（只），其中：羊只飼養量122.41 萬只，羊只出欄64.81 萬只。近幾年，全縣棘球蚴病人感染病例呈上升趨勢，每月以2～7 人的感染速度增加。發病家畜達6 萬頭（只），年新發病1.26萬頭（只），年經濟損失500 萬元。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019—2022 年，緊緊圍繞靖遠縣動物包蟲病綜合防治技術試驗示范與推廣項目，在靖遠縣萬信牛羊定點屠宰場采集典型牛羊肝臟棘球蚴包囊或疑似包囊12 份，將采集的樣品保存于-80℃冰箱。

1.2 材料

熒光PCR 儀、基因組提取試劑盒、解剖器具。

1.3 方法

1）基因型分析。用基因提取試劑盒按照產品使用說明書對處理后的包囊樣本生發層進行基因組DNA 提取，用熒光PCR 進行檢測。

2）犬糞抗原檢測。在靖遠縣包蟲病流行的四個鄉鎮共采集480份犬糞進行檢測，陽性數為36 份，陽性率為7.5%。

3）中間宿主羊血清抗體檢測。在靖遠縣包蟲病流行的四個鄉鎮共采集羊血清160 份，進行羊包蟲病感染抗體檢測，陽性數21份，陽性率13%。

4）屠宰羊肝、肺包蟲病感染情況調查。在靖遠縣萬信屠宰場用剖檢的方法檢查待宰羊800 只。待宰羊只主要來源于該縣烏蘭鎮、劉川鎮、大蘆鎮、高灣鎮等周邊鄉鎮，其中一小部分來源于會寧縣河畔鎮牲畜交易市場，屠宰檢查發現肝肺包蟲囊感染64 只，感染率為8%。

2 棘球蚴病基因型鑒定結果

通過對采集自本地綿羊肝的12 個疑似包囊（白色而較硬的非囊型棘球蚴包囊）進行了線粒體nad1 基因PCR 擴增和序列測定，結果表明其中7 個棘球蚴疑似包囊的基因型為細粒棘球絳蟲（E.granulosus）G1 基因型，結果見圖1。3 個疑似包囊為多房棘球絳蟲中絳期（E.multilocularis metacestode）。經序列比對，發現3 個多房棘球蚴nad1 基因核苷酸序列之間一致，且與NCBI 數據庫中MH259778 序列完全相同，結果見圖2[1]。

圖1 棘球蚴疑似包囊基因型測定

圖2 棘球蚴疑似包囊基因序列測定

3 防控技術

3.1 切斷傳播途徑

對犬只進行驅蟲，排泄物集中處理，切斷病犬及家畜之間的傳播鏈，禁止用感染棘球蚴病的家畜臟器喂犬，對感染棘球蚴病的家畜臟器進行無害化處理[2]。

3.2 加強宣傳培訓

通過廣泛開展棘球蚴病宣傳培訓，提高人民群眾對棘球蚴病的認識，增強個人防護意識，掌握基本防治知識，形成群防群控的局面。也可通過科普宣傳的方式加強對學生的健康教育，將棘球蚴病防治知識的宣傳教育和普及納入中小學生的健康教育內容，從而全面提高棘球蚴病防控能力。

3.3 加強基層防疫隊伍建設

加強基層畜牧獸醫站的建設，有效改善基層辦公環境。不僅使人員能留下來，還要想方設法提高基層人員的業務素質，落實生物安全措施，科學化、正規化地開展棘球蚴病防治工作。同時積極爭取縣級財政支持，提高村級防疫員勞動報酬，調動其工作積極性。

3.4 認真做好犬驅蟲工作

要建立定期對家牧犬的驅蟲制度，驅除犬體內的棘球絳蟲。各鄉鎮確定驅蟲日，每月對家牧犬采用含誘食劑的吡喹酮咀嚼片進行“月月驅蟲，犬犬投藥”，吡喹酮對細粒棘球絳蟲驅蟲率可達100%。服藥前12h 將犬拴住禁食可以提高藥物吞服率。

3.5 中間畜主的免疫預防

目前，國家對棘球蚴病疫苗研發已取得突破性成就，通過接種疫苗對于棘球蚴病的防控意義重大。

3.6 加強家畜屠宰檢疫

在牛羊肉屠宰市場，檢疫人員嚴格檢疫程序，對檢疫出的病畜監督進行無害化處理，同時，開展流行病學調查，詳細了解牛羊產地來源以及飼養方式等情況，為進一步防控工作奠定基礎[3]。

3.7 確保經費投入

力爭將棘球蚴病防控工作經費納入靖遠縣年度財政預算，保證棘球蚴病監測、檢疫、無害化處理、安全防護、人員培訓、宣傳教育、督導評估等配套工作經費，確保此項工作順利進行。

3.8 持續開展流行病監測工作

建議靖遠縣以鄉鎮為單位，建立中間畜主、終末畜主、以及高危人群為監測對象的監測體系，隨時掌握全縣棘球蚴病流行情況。

3.9 加強宣傳滅鼠工作

鼠類亦是棘球蚴病傳播的中間畜主，因此對養殖場以及周邊環境進行滅鼠意義重大，建議農牧部門聯合林草部門組織轄區鄉鎮進行滅鼠工作。

4 加強組織領導

棘球蚴病防控工作必須各部門聯合行動，各部門密切配合，發動全社會力量。從學校的小學生到觀念落后的農牧民，從機關領導到一般干部，必須改變傳統的生活習慣，真正了解棘球蚴病的傳播途徑及危害性。

通過此次棘球蚴基因型分析，確定靖遠縣牛羊細粒棘球蚴均為G1 基因型；通過基因序列分析，發現同一宿主可感染不同的蟲卵。另外，經文獻檢索，這是迄今為止在靖遠縣首次發現綿羊感染多房棘球蚴的報道。但是經組織形態學鑒定，包囊中未含原頭節，與綿羊不是多房棘球絳蟲的適宜宿主的情況相一致。這些發現提示，屠宰羊曾經感染多房棘球絳蟲，羊活動場所及其周圍環境對人類健康構成生物安全風險，其傳染源需要進一步調查。這也是此次流行病學調查極為重要的新發現之一?；驒z測屬于一種實用性較強，在棘球蚴病的控制和預防中工作中應用十分廣泛，通過此次棘球蚴病基因序列測定，為下一步研制出更多的基因工程奠定基礎，最終實現對棘球蚴病的有效防治。